高效快速提取股骨头中总RNA的方法

背景:从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想。目的:探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法。方法:取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA。另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照。紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率。甲醛变性胶电泳观察RNA的28S,18S条带是否清晰,有无降解和DNA污染。结果与结论:实验方法提取的总RNA浓度在0.80～0.90g/L,A260/A280在1.90～2.00之间,A260/A230在1.4～1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染。甲醛变性胶电泳可清晰显示28S,18S两条带,大体观察其比例大约为1:1,证实RNA提取完整,没有降解。由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究。     

高效快速提取股骨头中总RNA的方法

背景：从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想。目的：探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法。方法：取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA。另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照。紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率。甲醛变性胶电泳观察RNA的28S,18S条带是否清晰,有无降解和DNA污染。结果与结论：实验方法提取的总RNA浓度在0.80～0.90g/L,A260/A280在1.90～2.00之间,A260/A230在1.4～1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染。甲醛变性胶电泳可清晰显示28S,18S两条带,大体观察其比例大约为1：1,证实RNA提取完整,没有降解。由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究。     

西妥昔单抗联合含奥沙利铂化疗方案对转移性结直肠癌作用的系统评价和Meta分析

目的:系统评价西妥昔单抗联合含奥沙利铂化疗方案对转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer,mCRC)的有效性及安全性。方法:检索Pubmed、SCI-EX-PANDED、EMBASE、Cochrane图书馆、CBM及CNKI数据库,同时检索会议文献、正在进行的研究,并追踪已获文献的参考文献。根据设定的标准,2名作者独立对文献进行筛选及数据提取。采用RevMan5.2软件进行文献质量评估、数据综合。根据异质性的大小采用固定或随机效应模型。结果:共有7项研究(3291例)符合纳入标准。纳入研究的KRAS(v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog)基因野生型及总人群无进展生存期(progression free survival,PFS)的危险比(hazard ratio,HR)分别为0.89(95%CI:0.71~1.12,P=0.31)、0.98(95%CI:0.86~1.12,P=0.81)。两组人群总生存期(overall survival,OS)的HR值分别为1.00(95%CI:0.92~1.09,P=0.97)、1.02(95%CI:0.94~1.11,P=0.64)。两组人群临床有效率的风险比(risk ratio,RR)分别为1.20(95%CI:1.02~1.41,P=0.01)、1.25(95%CI:1.03~1.52,P=0.03)。试验组不良反应(尤其是皮疹及腹泻等)的发生率较对照组高。结论:西妥昔单抗联合含奥沙利铂化疗方案较单纯化疗并未明显延长mCRC患者的PFS和OS,即使在KRAS野生型的患者中也是如此,且增加了不良反应发生率;但是,该方案明显提高了治疗有效率。     

核糖核酸干扰下调骨桥蛋白表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨骨桥蛋白（OPN）下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响。方法参考相关文献，设计并合成OPN的小干扰RNA（siRNA），通过荧光标记测定2株细胞的转染效率。Western印迹法检测OPN蛋白下调情况。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA对OPNmRNA的下调率及随时间的变化。流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法连续7d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化，并采用混合模型进行统计分析。Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析。结果2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90％以上。干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调。SGC7901细胞在siRNA转染后72hOPN mRNA表达下降最低，达47％；MKN28细胞在siRNA转染后48hOPN mRNA表达下降最低，达40％。OPN被干扰后，SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱（混合模型分析与未干扰组比较，P〈0．01）。OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响，其中SGC7901分裂期细胞比例由18．78％降至17．02％，MKN28分裂期细胞比例则由4．96％降至0．39％。2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡。OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降，穿过人工基底膜的细胞数明显减少（SGC7901：t=5．172，P〈0．01；MKN28：t=11．365，P〈0．01）。结论siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达，OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关。     

门脉高压药物治疗的现状和展望

门脉高压的药物治疗包括降低门脉压力(PP)、降低曲张静脉压力和壁的张力。两种类型的药物:缩血管药物和扩血管药物,分别通过减少门脉侧支血流和降低门-肝血管的阻力起到降低门脉压力的作用,其中半衰期短的药物用于治疗急性出血,而半衰期长的药物则用于预防出血。     

胃癌靶向治疗新进展

化疗是进展期胃癌最常见的治疗方法,但单纯化疗的疗效十分有限。随着对胃癌分子生物学研究的深入,多个胃癌“驱动基因”已被发现,针对这些基因的靶向药物也被尝试用于胃癌的治疗,目前已有多个大型Ⅲ期临床研究评价了这些靶向药物治疗胃癌的效果,本文拟对这些临床研究作一总结,并思考研究结果带给我们的启示。     

降纤酶治疗下肢深静脉血栓形成的临床研究

目的 :观察降纤酶治疗下肢深静脉血栓形成的临床疗效。方法:采用降纤酶10IU加人生理盐水250ml静脉滴注每日1次 ,3天后改为5IU共7天为一疗程 ,并以尿激酶治疗为对照组。结果 :降纤酶治疗组全血低切粘度、高切粘度、纤维蛋白原测定值均较对照组有显著差异(P<0.05) ,治疗显效率与对照组相似。结论 :降纤酶能降低血浆纤维蛋白原浓度 ,溶解血栓 ,抗血栓形成 ,临床疗效可靠     

洁净手术部的建设与管理(五)--洁净手术室安全用电措施

众所周知,在现代手术过程中,电子仪器和电子设备日益增多。洁净手术室为控制手术室内的空气温度、湿度、洁净度和室内静压、风速、噪音,又增加了更多的电子设备,洁净手术室用电量也明显增加,因此安全用电是洁净手术室设计施工中重要的技术环节。1交流电对人体影响区域分析人体对电流流过身体的防护主要有两方面的自我保护措施:一是皮肤有较大的电阻,它限制了电流的增加;二是在电击的过程中,伴随产生了肌肉的收缩,有助于人体脱离电源。但在手术过程中,电极多数进入人体,或用降低接触电阻的导电液,贴附在皮肤上,使皮肤的电阻旁路。另外从人体…     

中西医结合治疗慢性乙型肝炎49例总结

采用拉米夫定与肝喜合剂联用治疗慢性乙型肝炎49例，并与单用拉米夫定治疗的45例进行对照观察，结果治疗组在症状改善、HBeAg、抗HBe血清转换、肝功能、HBVDNA和提高疗效等方面均优于对照组，两组比较差异有显著性。     

六味地黄汤对小鼠肝微粒体色素P450的影响

目的:观察六味地黄汤对肝微粒体色素P450酶系的影响,并对单味中药与其复方对色素P450酶系的影响进行比较分析。方法:ICR小鼠50只,雌雄各半,随机分成空白组(0.9%氯化钠注射液),肝药酶诱导剂组(苯巴比妥钠)、肝药酶抑制剂组(西米替丁)、六味地黄汤低剂量组[5.63g/(kg·d)]、六味地黄汤高剂量组[11.26g/(kg·d)],每组10只。苯巴比妥钠组为皮下注射给药,剂量为0.08g/(kg·d),其余组均为灌胃给药,西米替丁组剂量0.4g/(kg·d),其他中药组剂量均为20m L/(kg·d),1次/d。共10d。末次给药1h后处理动物,取肝组织制备肝微粒体,ELISA法测定细胞色素P450的含量,进行统计比较。结果:与空白组比较,六味地黄汤低、高剂量组色素P450含量均明显增加(P0.05或P0.01);高剂量组增加优于低剂量组(P0.05)。肝药酶抑制剂组色素P450含量较空白组明显增加(P0.01);肝药酶诱导剂组色素P450含量较空白组明显减少(P0.05)。结论:六味地黄汤对肝微粒体色素有诱导作用,且高剂量组的作用强于低剂量组。