登革病毒2型NS1蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果观察

目的　以登革病毒 2型 (denguevirus2 ,DV2 )非结构蛋白 (non structrulprotein 1,NS1)为靶基因 ,构建DV2 NS1的候选DNA疫苗 ;并探讨其在小鼠体内诱导特异性体液免疫和细胞免疫的作用。方法　将登革病毒 2型NS1 NS2a基因片段克隆至含AG强启动子的真核表达载体pCXN2上 ,构建成重组体pCXN2 NS1 NS2a。在体外将重组质粒转染Cos 7细胞 ,间接免疫荧光检测其在真核细胞中的表达。大量提取空质粒和重组质粒 ,进行动物免疫实验。结果　重组质粒可在真核细胞中有效地表达NS1蛋白。免疫接种小鼠后可诱发机体产生针对NS1蛋白的特异性体液免疫和细胞免疫。末次免疫前已有抗体产生 ,4周后达高峰。抗体依赖补体介导的溶细胞作用 (antibody dependentcomple ment mediatedcytolysis,ADCC)试验结果显示产生的抗体在体外具有特异的杀细胞作用。淋巴细胞增殖实验结果显示 ,实验组小鼠的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异有显著性。流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞变化情况 ,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比 ,CD4 + 、CD8+ 细胞水平有较大升高 (P <0 .0 1)。动物保护性实验结果显示 ,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时 ,有 6 6 .6 %的免疫鼠受到保护。结论　NS1 NS2a基因重组质粒免疫小鼠可以诱     

SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义

目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL 12在SARS冠状病毒的致病与免疫过程中可能起降低细胞免疫功能作用     

大肠癌患者VEGF和NO血清水平及其与恶变程度的关系

目的:研究血清中血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)表达水平及其与大肠癌恶变程度的关系。方法:分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定和分光光度法检测46例大肠癌患者术前和30例健康人血清中VEGF和NO的含量。结果:大肠癌患者血清VEGF和NO表达水平均较健康人明显增高(P<0.01),且随着大肠癌浸润深度增加、有淋巴结转移以及Dukes分期愈晚者而显著增高(P<0.01)。血清VEGF与NO含量呈明显正相关(r=0.8152,P<0.01)。结论:VEGF和NO与大肠癌的发生、发展及转移调控过程有关,术前检测血清VEGF和NO含量对判断大肠癌的浸润转移以及Dukes分期具有重要价值。     

人类胎儿珠蛋白基因位点的结构

已知最少有两种非等位的γ-珠蛋白基因,在由146个氨基酸组成的γ-珠蛋白链的136位上的氨基酸,一个是甘氨酸,另一个是丙氨酸,分别标示为Gγ和Aγ·以γ-珠蛋白互补DNA对细胞DNA杂交支持这一结论。作者应用单复制基因绘图技术画出γ-珠蛋白基因内及其外围限制性内切酶位置的物理图形。方法是:正常人胎盘DNA用限制性内切酶消化并变性。将各个碎片在1.2％琼脂糖凝胶上电泳分离,从琼脂糖凝胶上转移到硝酸纤维素微孔滤膜,并和     

α2bβ3蛋白同源模拟及抗血栓RGD-c小分子设计

目的血小板上的α2bβ3蛋白是干扰素家族的重要一员,由2个亚基组成,在血小板凝集过程中,可以与纤维蛋白原上的RGD特征序列结合,使血小板凝集。这样可以在理论上设想一个环形RGD小分子(RGD-c),与α2bβ3蛋白结合,阻断其与纤维蛋白原的结合位点,有效阻止血栓形成。实验目的在于建立α2bβ3三维模型,设计RGD-c,了解该蛋白与RGD-c的结合位点和方式。分析不同侧链:RGD-c的结合效果,选出最合适的RGD-c作为实验室药物配制的理论依据。     

基于Midkine/Notch2/Hey1信号通路探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠的抗炎作用

目的 探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中肝素结合因子（Midkine）/跨膜受体蛋白（Notch2）/Hey1信号通路中的影响及其抗炎的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1·d^-1）和γ-分泌酶抑制剂组（Notch1通路抑制剂,DAPT）,每组10只。以烟熏联合脂多糖（LPS）法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃（ig）给药;DAPT组ig DAPT（0.02 g·kg^-1）;正常组及模型组ig等体积生理盐水。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中Midkine、中性粒细胞趋化因子-1（CINC-1）、大鼠巨噬细胞来源趋化因子（MDC）、大鼠CXC趋化因子5（CXCL5）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）和核转录因子-κB（NF-κB）p65的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达;免疫组化（IHC）检测大鼠肺组织中Midkine、Notch2和Hey1蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5、NE和NF-κB p65含量均显著升高（P<0.01）;肺组织Midkine、Notch2和Hey1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组和DAPT组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5和NF-κB p65含量均显著减少（P<0.01）;Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达显著下降（P<0.01）。结论 二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能是通过下调Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达,抑制Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5释放有关。     

中老年人如何缓解心理压力

七类常见的精神压力和负担正在不知不觉中侵蚀着中老年人的身心健康.中老年人如何缓解心理压力?为此,笔者特邀专家为您剖析压在中老年人心头的七块"石头",并传授"碎石大法".     

肠蛔虫致腹膜炎漏诊1例

患者女,45岁.因中下腹突发性疼痛4天,加重1天,伴畏寒发热.于2000年3月15日入院.患者于1个月前曾类似腹痛发作,经当地医院保守治疗症状缓解.体格检查:T38℃、P88次/min、BP13/9kPa.急性痛苦貌、消瘦.双肺无干湿罗音.腹平坦、软、中下腹压痛明显,肌卫、无反跳痛,肝脾无叩痛,肠鸣音弱.血常规:WBC8.0×109、RBC4.7×1012、Hb132g/L、N0.73、L0.24;尿常规未见异常.胸膜透视:双肺心膈未见异常.膈下未见游离气体.B超:子宫后壁见4.3cm×3.8cm×3.6cm不均质中低回声块,子宫直肠窝见深约1.0cm液性暗区,肝脾双肾未见异常.肝功、肾功及电解质均正常.诊断:子宫肌瘤盆腔炎.经抗炎对症治疗5天后,症状缓解,无肌卫及畏寒发热,行子宫全切除术.术中见大量淡黄色腹水,吸出约1500ml.小肠浆膜系膜大量粟粒样白色结节,空回肠交界处粘连扭曲,充血水肿,其系膜淋巴结肿大,约3cm×3cm×2cm.大肠网膜肥厚,呈灰白色,数条蛔虫穿入.直肠与子宫后壁粘连,子宫直肠窝内见数条蛔虫.右输卵管充血肿胀,伞部可见一条蛔虫穿入.十二指肠球部前壁可见一条蛔虫嵌入,取出后,见蛔虫有嵌环,十二指肠液溢出,其周围无水肿增厚.即行清洗腹腔,取出腹腔内蛔虫,修补十二指肠穿孔,切除空回肠交界处病变小肠约20cm及相应系膜.送检.术后诊断:肠蛔虫致十二指肠穿孔、腹膜炎、子宫肌瘤.病理诊断:先天性小肠憩室、小肠浆膜及系膜慢性肉芽肿(寄生虫所致).半月后痊愈出院. 讨论:肠蛔虫致腹膜炎是临床上蛔虫所致并发症之一.目前随着生活条件改善,已明显少见.虫卵致肠表面慢性肉芽肿类似结核样,更为罕见.通常引起穿孔部位是小肠.本例漏诊主要是对本病认识不足:首先是单纯依赖B超报告,想到盆腔炎、子宫肌瘤.未进一步追询病史,忽视了曾有吐清涎、吐蛔虫病史.其次体检中遗漏了肠部移动性浊音这一重要体征.没有进行诊断腹穿.第三是术后回顾,本例临床上已明显少见.穿孔部位发生于十二指肠,并且又被阻塞其症状时而发作缓解.术前要想通过影像学诊断,确实很难,患者通常以其它表现形式就诊相关科室.由于漏诊,缺乏全面的体检及分析导致术前向家属交待不够,准备不充分,术中紧急请求会诊.术中情况向家属交待,延误手术时间,险些酿成医疗纠纷,应吸取经验教训.     

血管狭窄性疾病的经皮血管成形术治疗

目的探讨血管闭塞性疾病的血管内治疗方法和疗效。方法采用血管内尿激酶溶栓术、经皮血管腔内成形术(PTA)和内支架植入术治疗动脉病变18例26段,静脉病变22例26段。患者男23例,女17例,年龄25～85岁,平均60.5岁。结果溶栓疗法成功率93.02％(40/43段);PTA治疗成功率96.15％(25/26段);内支架治疗9段全部成功。观察6个月以上疗效满意率为88.46％(46/52段)。结论根据血管闭塞性病变的性质和程度不同,采用不同的血管内治疗方法。局部溶栓是治疗血栓性闭塞的基本方法。提出血栓性闭塞开通后保留导管抗凝溶栓治疗2～3天的新观点。     

生信分析肾阴虚型绝经后骨质疏松症分子机制及熟地黄靶向治疗

目的基于生信数据挖掘探究肾阴虚型绝经后骨质疏松症的病理机制及熟地黄的治疗靶点。方法通过GEO数据库挖掘阴虚型绝经后骨质疏松症患者差异表达基因,运用GeneCards及OMIM数据库预测骨质疏松症相关基因,采用R软件对阴虚靶点与骨质疏松靶点映射匹配。借助String数据库在线平台进行蛋白互作网络构建。分子对接预测熟地黄治疗阴虚型骨质疏松症的靶点。采用DAVID数据库进行生物过程及通路注释。结果通过分析得到差异表达基因1 272个,骨质疏松症靶点662个,阴虚型骨质疏松症相关靶点45个,主要涉及细胞凋亡调节、雌激素应答、骨骼肌系统发育等生物过程,并由PI3K-Akt、Wnt信号通路、MAPK信号通路、卵巢类固醇生成等信号通路调节。熟地2种有效成分能够作用于核心蛋白IGF1、VEGFA等。结论熟地黄可能靶向IGF1、VEGFA等核心蛋白,通过PI3K-Akt、MAPK等信号通路调节细胞凋亡及雌激素应答过程,从而实现防治阴虚型骨质疏松症的疗效。