大鼠动脉粥样硬化动脉壁单核细胞形态学观察

内皮铺片后用光镜、扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察了大鼠动脉粥样硬化病变过程中单核细胞的形态变化。结果表明,单核细胞的主要改变是:(1)单个或成群地粘附于内皮表面;(2)穿越内皮;(3)迁入内皮下层;(4)吞噬脂质,转变为泡沫细胞。讨论了单核细胞粘附及转变成泡沫细胞的机制和意义。     

单核细胞与动脉粥样硬化研究进展

单核／巨噬细胞可参与动脉粥样硬化病变的全过程，因此，近年来再一次引起有关学者的关注。本文就单核细胞与内皮细胞的粘附、单核细胞的转变与泡沫细胞的形成、单核细胞与动脉粥样硬化的早期病变及单核细胞与动脉粥样硬化的增生性病变等问题及有关研究进展进行一综述。     

乳腺定位表达载体在小鼠乳腺中的活性检测

目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中,待小鼠产子、泌乳后,检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 ng/ml。结论 此方法可以作为从动物整体水平上检测乳腺定位表达载体表达效力的一种简便而有效的方法。     

三种反义c-myc RNA稳定表达对血管平滑肌细胞生长、增殖的影响

目的 研究反义基因在细胞中持续、稳定表达对平滑肌细胞生长增殖的影响。方法 将分别载有c(myc第1、2和3外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3导入大鼠主动脉平滑肌细胞（SMC）,并于持续筛选后1个月进行稳定表达检测。结果 aM1和aM2能持续抑制靶细胞Myc蛋白表达（分别为对照表达量的59.7%和81.3%）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达（分别为对照表达量的52.4%和51.9%）,抑制靶细胞的生长增殖活性并以aM2作用最强（抑制率达到30%）,同时,aM2还有一定的延长细胞周期和减少DNA合成的作用,而aM3作用相反。另外,与瞬时表达相比,外源基因在靶细胞中的作用并非一成不变,而基因转染操作对细胞的影响会随着细胞的代偿逐渐减少并在短期内消失。结论 对c(myc中不同区域进行反义封闭会产生不同的效应,对其转录活性区进行封闭可取得最强的细胞生长抑制。而靶细胞对对外源基因导入可能具有“纠正作用”。     

30 体外连接蛋白血管壁分布的免疫组织化学观察

<正>体外连接蛋白(Vn)是存在于血液和某些组织中的粘附糖蛋白,具有多种生理功能,参与某些病理过程,并与动脉粥样硬化的发生有密切关系.本文用链亲和素一生物素(LSAB)法,对人主动脉、脐静脉及脐静脉内皮培养细胞的Vn的分布进行了观察,为研究Vn在动脉粥样硬化发生中的作用提供基础资料.取意外死亡人的主动脉和正常分娩的人脐静脉,4%多聚甲醛固定,冰冻切片.一抗为抗Vn单克隆抗体,显色系统为鼠LSAB试剂盒.无菌操作分离脐静脉内皮细胞,在含15～20%小牛血清的1640培养基中培养,同法染色.观察结果表明,Vn主要分布于血管的内膜,以内皮下层分布较多.染成棕色,内皮及内皮表面呈黄色,中膜和外膜可见黄色和淡黄色染色;各组的对照片均不显色.Vn在脐静脉和主动脉中膜分别分布于平滑肌和弹性膜之间,在外膜则主要沿胶原纤维分布.Vn在脐静脉与主动脉的分布情况基本一致.其含量大致力:内皮下层>内皮及内皮表面>中膜和外膜.脐静脉内皮培养细胞也见有Vn分布,主要位于胞膜下,而核周染色较淡,提示内皮细胞可能有合成Vn的功能,但尚不能排除血浆中Vn与内皮细胞通过受体—配体结合、或Vn通过细胞内吞作用进入内皮的可能.Vn主要由肝细胞产生,有人曾提出内皮细胞和单核细胞可合成Vn,并与动     

组织胚胎学投影教材的制作与应用

<正> 组织胚胎学是一门重要的医学基础课程,其主要内容为机体微观形态及其功能的描述,微观形态在我们的宏观世界里属于看不见,摸不着的东西,因此在学习的过程中教师的语言描述显得十分重要,如何使学生能掌握并牢记重点内容是我们教学中的难点,而掌握好重点和难点关键是理解微观形态和功能的相关.学习组胚时的学生均为医学院的新生,对组织胚胎学内容非常生疏,记忆起来更觉得困难.怎样才能更好的运用宝贵的课堂教学时间,而带领学生尽快地适应新课程的学习、掌握并学到更多的知识,是一名教师的职责.近两年来我在教学实践中编写了投影教材,并改进了投影胶片的制作方法,实践表明,它可以帮助教员达到上述目的,并收到了良好的教学效果,现介绍如下.1 投影教材的选材与编排投影教材力求重点突出,对每次课的内容进行高度的概括,语言精练、准确,用尽量少的字数表达最完整最准确的概念.在此基础上做到层次分明,条理清楚,从大的概念过度到小的概念油浅入深使之达到化难为易,化繁为简,易记易懂的效果.如在讲授基本组织学的上皮组织时,首先列出上皮组织的几大特点,接下去介绍上皮组织的分类,然后再详细介绍各种上皮的特点及其形态中的特殊结构.遇重点和难点,做出适当的标记,以求画龙点睛.     

构建EGFP-PDX-1融合表达载体电穿孔转染大鼠胎肝干细胞的研究

目的 构建PDX—1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染人大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达。方法 从SK900／BLSCRIPT质粒中扩增PDX—1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP—C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转染;分析转染前后细胞生长曲线,荧光显微镜下观察、RT-PCR鉴定转染结果。结果 重组质粒经酶切鉴定正确无误,经电穿孔转染后GFP和PDX-1基因均能在胎肝干细胞中保持较长时间稳定表达,并对胎肝干细胞的生长增殖影响较小。结论 成功构建了PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,能在胎肝干细胞中较稳定表达,为研究PDX-1存干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞中的调控作用提供了物质基础。     

外源性基因经乳腺导管注射在大鼠乳腺组织中表达的机制研究

目的研究外源性基因经乳腺导管注射在乳腺组织中表达的机制。方法依据乳腺发育时期的不同（即9周龄未孕、妊娠7d、妊娠12d、妊娠18d、产后7d、产后14d）将36只SD大鼠分为6个实验组（6只／组）,以绿色荧光蛋白（GFP）高效表达质粒pCE-29与脂质体混合后,经乳腺管导人各组大鼠第5对乳腺。48h后取材冰冻切片,荧光显微镜下观察各组GFP的表达情况,如有表达则对该张冰冻切片行HE染色,前后图像对比以确定GFP表达位置。另取不同发育时期正常大鼠乳腺组织制作石蜡切片,HE染色。结果pCE-29质粒由乳头管导人后,实验组中妊娠12d组和产后7d组中各有2只有GFP表达,图像对比后确定GFP是在乳腺腺泡细胞中表达：石蜡切片HE染色后观察大鼠乳腺组织,在从妊娠初始到产后的发生变化过程中,在妊娠12d和产后7d时处于分裂期的腺细胞较多,而其他时期处于分裂期的腺细胞较少。结论在妊娠12d和产后7d这两个时期,外源性基因经乳腺管注射可以转入腺泡上皮细胞而得到表达。表达的机制可能是在妊娠期及分娩后,由于体内激素作用,乳腺干细胞在以上两个时期不断分化．启动腺细胞分裂增殖,分裂期的腺细胞进行DNA复制,因此可能接受外源性基因的机率大。本实验为外源性基因经乳腺管注射在动物乳腺的表达提供了重要的研究资料。     

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的 构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法 RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果 显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。     

慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立

摘要：目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,
建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水
平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上
清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting 和Real-time
PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成
功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了
干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。