Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达

目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分
3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,
纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3
代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官（心、肺、脑、肾）的nestin 表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的
nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小
鼠脑、肺组织存在较高水平nestin 表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织
中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞“干性”的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。
     

视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

目的：从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子（ROP）并建立ROP－绿色荧光蛋白（GFP）融合基因转基因小鼠模型。方法：用PCR法从基因组内扩增ROP，通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体，并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pMOP-EGFP表达质粒经Not I酶切线性化后，用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核，制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建小鼠，基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传化后，取眼球进行冰冻切片，在荧光显微镜下观察视网膜下GFP的表达。结果：从基因组内扩增出了2.1kb的小鼠ROP，成功构建了小鼠ROP－GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建，分别命名为C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU21,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论：成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠，它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制，还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。     

人nestin第二内含子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

目的构建含有人nestin第二内含子的荧光素酶报告基因并检测其活性。方法从NCBI数据库获得nestin的DNA全长序列（NC），用软件分析找到其第二内含子位置，通过的方法从人血全基因_000001vectorNTIPCR组DNA中钓取nestin的第二内含子全长片段，克隆到报告基因pGL3-promoter载体上，将报告基因载体转染至293T细胞，采用双荧光素酶报告基因系统评估第二内含子的活性。结果成功钓取nestin第二内含子片段，长度为1688bp，测定其DNA序列正确。瞬时转染293T细胞，经双荧光报告实验显示转染了pGL3-nes-promoter载体的细胞其相对荧光素酶活性相比于空载组，大约提高了3．39倍，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论成功构建了含有nestin第二内含子的荧光素酶报告载体，为进一步研究nestin的调控机制奠定基础。     

内皮－单个核细胞体外粘附的实验研究

采用体外细胞培养法，建立了内皮－单个核细胞联合培养模型，观察了该模型中单个核细胞形态和数量的变化。所见３种形态的单个核细胞，分别称为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型细胞。对３型细胞进行了形态的描述和定量的观察，认为培养内皮细胞对单核细胞向巨噬细胞分化有诱导作用。该方法简便、安全、可靠，是研究内皮一单个核细胞粘附的理想模型。     

白细胞介素－6和肿瘤坏死因子调节冠心病患者单个核粒细胞CD116抗原表达

白细胞介素－６和肿瘤坏死因子调节冠心病患者单个核粒细胞ＣＤ_（１１６）抗原表达安靓，李进，刘小荣（广州第一军医大学细胞生物学实验室，５１０５１５）ＣＤ１１６是近年来广受重视的白细胞表面粘附受体家族的成员，可介导白细胞与血管内皮细胞的粘附，并可能与动脉?..     

组织学实习课板书艺术

板书是教师授课最常用、最简便的教学手段之一,虽然多媒体教学、电化教学在教学中的应用日益增加,并正在成为现代化教学的主流,但仍不能完全取代板书这一经典的教学方式,板书的质量直接影响到教学质量,优美的板书是用文字和图形符号巧妙地结合而绘成的艺术画面,令人在赏心悦目的氛围下高效率地汲取知识。组织学为一门形态科学,主要借助显微镜来观察器官、组织和细胞的结构特点,因此,组织学实习课的教学有其自身的特点,相应的板书应能反映出组织的结构层次以及各层次结构的特点。而且要重点突出;绝不能仅仅是千篇一律的文字表面,而应将其当作…     

IL－6、TNF调节冠心病人单个核细胞CD11b抗原表达的研究

采用免疫组织化学碱性磷酸酶标记ＡＢＣ（ＡＢＣ－ＡＰ）法显示。并用图像分析仪进行定量分析，研究了冠心病人和正常人单个核细胞ＣＤ１１６抗原表达及白介素－６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对白细胞分化抗原ＣＤ１１６表达的调节作用。结果表明，冠心病人ＣＤ１１６表达高于正常人，ＩＬ－６和ＴＮＦ对ＣＤ１１ｂ均有上调作用，且其对冠心病人ＣＤ１１ｂ的上调作用明显高于正常人，表明冠心病人ＣＤ１１ｂ表达对细胞因子的敏感性增强。     

在分子克隆中用PCR进行定点突变

目的：在视蛋白基因启动子上增加一个XbaI酶切位点。方法：设计突变引物，用致突变PCR的条件引入突变，然后对产物作酶切鉴定并测序。结果：除人工引入突变的地方产生预期突变外，其它的碱基序列无改变。结论：定点突变成功。     

相对定量法检测nestin-GFP转基因小鼠外源基因整合拷贝数

目的计算出转基因小鼠nestin-GFP的外源基因整合拷贝数,为研究该模型中外源基因遗传及表达的稳定性打下基础。方法用荧光定量PCR的方法对F0代的2只小鼠基因组做检测。先根据已知拷贝数的GFP(green fluorescent protein)和GAPDH来制作标准曲线和方程,然后计算出基因组中二者所含拷贝数的比例来计算外源基因的拷贝数。结果 2只F0的外源基因拷贝数分别是3和4。结论 nestin-GFP转基因小鼠的外源基因整合拷贝数分别是3和4。     

云南省成人AIDS病人抗病毒治疗的疗效分析

目的评估云南省成人艾滋病病人国家免费抗病毒治疗的疗效。方法采用横断面调查的方法,分析云南省各级定点医疗机构,从2001年1月1日至2012年12月31日,接受国家免费抗病毒治疗的AIDS病人的资料,包括人口学资料、基线CD4＋T淋巴细胞（CD4）计数和病毒载量（VL）。结果在治病人病毒抑制率未随治疗时间延长而降低;女性病毒抑制效果好于男性（P〈0.01）;因静脉注射毒品感染艾滋病病毒（HIV）的病人病毒抑制率低于其他途径感染的人群（P〈0.01）;基线CD4〈100个/μL的病人其病毒抑制率显著高于CD4〉100个/μL的病人;30岁以上病人病毒抑制率好于30岁以下者;未婚病人的病毒抑制率比其他婚姻状况（包括已婚、同居、离异或分居等）的人群差。结论云南省艾滋病病人抗病毒治疗效果情况整体较好,但需要加强对于男性、未婚、30岁以下、吸毒感染,以及基线CD4〉100个/μL病人的依从性教育,及时做好VL检测和评估、耐药筛查等工作;基线CD4〉350个/μL的病人,加强治疗管理可以保证治疗效果。