Sca-1,CD24和Muc1在雌性大鼠静止期乳腺中的表达

目的 研究干细胞抗原(Sca-1),CD24和Muc1在静止期乳腺中的表达.方法 用Western免疫印迹法检测Sca-1和CD24在6周龄和9周龄大鼠乳腺中的含量变化,制备6周龄、9周龄SD雌性大鼠乳腺标本,切片(4 μm),运用免疫组化酶标和免疫组化荧光法对乳腺中Sca-1,CD24,Muc1进行标记.结果 Sca-1,CD24在6周龄的大鼠乳腺中的含量略低于9周龄大鼠;Sca-1在乳腺叶间导管、分支导管及腺泡周围表达;CD24在分支导管、乳脂垫及腺泡周围中表达;Muc1在分支导管和叶间导管中表达.结论 Sca-1阳性细胞可能代表一类乳腺祖细胞,CD24阳性细胞代表一类乳腺干细胞,而Muc1阳性细胞代表成熟腺上皮细胞.本实验为上述细胞的鉴定提供了一些形态学证据,但需要细胞移植实验进一步实证.     

NucleofectorTM电转仪转染外源基因至骨髓基质细胞优化方案

目的用Nucleofector^TM电转仪介导真核表达载体pEGFP-C1及pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源细胞，并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体以Nacleofector^TM电转仪转染不同方法获得的骨髓来源细胞，改变DNA的量、转染后血清浓度，在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率；转染后48h进行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测目的基因的表达情况。结果相同条件下转染骨髓来源的神经干细胞（NSC）较转染骨髓基质细胞（MSC）可获得更高的转染效率；质粒2～10雌获得最佳的转染效率；提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率；RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin＋细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin＋细胞的效率，为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2转基因猪胚胎成纤维细胞的构建与鉴定

目的构建上皮组织特异性表达鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1(N-LMP1)和人补体受体2(CR2)真核表达载体,转染猪胚胎成纤维细胞并筛选整合有N-LMP1和CR2基因的细胞克隆,为构建与EBV感染相关的猪鼻咽癌模型奠定基础。方法通过直接合成ED-L2启动子和N-LMP1,从人B淋巴细胞中的RNA经RT-PCR扩增出CR2,将上述3个片段逐个连接到真核表达载体pN1上,构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的载体pN1-EDL2-N-LMP1-CR2;用脂质体转染猪胚胎成纤维细胞,经药物G418筛选和PCR鉴定阳性克隆。结果成功构建上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的真核表达载体pN1-ED-L2-N-LMP1-CR2,并成功整合到猪胚胎成纤维细胞的基因组中,获得了整合有目的基因N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆。结论获得了上皮组织特异性表达N-LMP1和CR2的猪胚胎成纤维细胞克隆,为通过细胞核移植方法获得表达N-LMP1和CR2转基因猪提供了供体细胞。     

大鼠肝卵圆细胞的分离与鉴定

目的：分离、培养和鉴定大鼠卵圆细胞。方法：以3'-me-DAB刺激卵圆细胞迅速增生,改良梯度离心法分离、培养大鼠卵圆细胞,观察其形态及增值特点并进行细胞免疫组织化学鉴定。结果：改良的梯度离心的方法能够有效地分离大鼠肝卵圆细胞,卵圆细胞胞体为卵圆形,代谢缓慢,具有干细胞的特点,可以形成集落,并且表达OV6、CD34及Nestin。结论：改良梯度离心法分离的细胞具有干细胞的特点,可以表达卵圆细胞特异性的表面标记OV6、造血干细胞表面标记CD34和神经中间丝蛋白Nestin,具有横向分化的可塑性,为进一步实验研究提供参考依据。     

音猬因子对神经干细胞增殖与分化的影响

目的 探讨音猬因子(SHH)对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响. 方法从大鼠胚胎端脑皮质及海马分离培养的NSCs分为SHH组、RA组和PBS组.分别用SHH、维甲酸(RA)及PBS条件培养液处理后,通过免疫细胞化学等方法检测NSCs的增殖及分化情况.结果体外培养的NSCs能快速增殖并形成神经球,其中的细胞均表达NSCs特异性标志物nestin.BrdU作用于NSCs 3 h后,SHH组的BrdU阳性率明显高于RA组和PBS组,而RA组和PBS组之间无显著差异.当NSCs在分化条件培养液中培养7d后,SHH组和RA组中的βⅢ-tubulin阳性率及Rip阳性率显著高于PBS组,SHH组又显著高于RA组和PBS组.结论 SHH可以促进NSCs增殖及其向神经元和少突胶质细胞的分化.     

刺蒺藜及其配伍对人黑色素瘤A375细胞黑素代谢的影响

目的:探索刺蒺藜及不同配伍对人黑色素瘤A375细胞黑色素代谢的影响。方法:刺蒺藜不同浓度及其不同配伍组在不同的浓度范围(1.5~12 mg/m L)中作用A375细胞48h后,采用CCK-8法检测细胞的活性和采用Na OH裂解法测定黑色素含量。结果:对细胞活性的影响:刺蒺藜组、丹参组、刺蒺藜+丹参组、刺蒺藜+防风+丹参+菟丝子组对A375细胞活性有显著的抑制作用(P0.01);防风组、菟丝子组、刺蒺藜+防风组、刺蒺藜+菟丝子组对A375细胞活性有双向调节作用,在相对低浓度组表现为促进作用,在相对高浓度表现为抑制作用(P0.01);所有组都有随着浓度增加而对A375细胞活性抑制加强的趋势。对黑色素含量的影响:所有组对黑色素含量无明显作用(P0.05)。结论:刺蒺藜及其配伍对A375细胞活性的影响主要是抑制作用,而对黑色素含量变化的影响与对照组近似,无明显影响。     

抗Vn、抗CD44单克隆抗体抑制内皮—单个核细胞粘附的研究

<正>单个核细胞粘附于动脉内膜表面可见于机体的许多病理过程和正常的生命活动,如炎症、免疫反应、动脉粥样硬化等.但有关粘附的机制尚不清楚,为此,我们对粘附相关蛋白介导粘附的作用进行了系列研究.本实验采用单克隆抗体阻断法,观察了Vn和CD44在内皮一单个核细胞粘附过程中的作用和作用特点.实验采用培养的血管内皮细胞,传至第二至三代,分离纯化外周血单个核细胞,将单个核细胞用单克隆抗体处理后,     

三种反义c-myc RNA对血管平滑肌细胞凋亡的影响

为探讨反义寡脱氧核苷酸对大鼠肝细胞载脂蛋白Ｂ基因的表达是否具有调控作用,并探索其作用机制。以合成的载脂蛋白Ｂ基因正、反义寡脱氧核苷酸加入培养的肝细胞,测量载脂蛋白Ｂ１００含量;用反转录聚合酶锭反应评价载脂蛋白Ｂ基因的表达。结果发现,载脂蛋白Ｂ基因反义宜脱氧核苷酸可明显下调载脂蛋白Ｂ１００的ｍＲＮＡ表达,５、１０、１５和２０μｍｏｌ／Ｌ的反义寡脱氧核苷酸,可分别降低肝细胞载脂蛋白Ｂ深度的２６．６％、     

胎鼠肝nestin阳性细胞的分离培养和诱导分化研究

目的建立胎鼠肝nestin阳性细胞的体外分离、培养和诱导分化的方法。方法采用机械分离法结合悬滴培养法获得胎肝干细胞,原代培养2d后改变培养基,添加含20%胎牛血清的DMEM(含25ml/L葡萄糖,100U/ml青链霉素,pH值7.6),添加烟酰胺10mmol/L,胰岛素1mg/L,N2添加剂,碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子各20μg/L诱导分化为nestin阳性细胞。结果和结论大鼠胎肝内存在nestin阳性细胞,在体外扩增后加入诱导剂可定向分化为胰岛β细胞。