大鼠胚胎期及出生早期乳腺干细胞的免疫组织化学研究

取妊娠20日龄胎鼠及出生后3、8d的SD大鼠乳腺组织标本进行HE染色显微镜下观察,借助抗体SCA-1、CK18和α-SMA,用免疫酶标法和免疫荧光法对细胞进行免疫组化鉴定。结果表明,妊娠第20d鼠胚、出生后3d和8d乳鼠的次级导管上皮中可鉴别出4种细胞表型：SCA-1阳性细胞、CK18阳性细胞、SCA-1和CK18双阳性细胞、SCA-1和？或CK18阴性细胞。根据细胞的形态大小和分布位置,确定SCA-1阳性的小亮细胞为乳腺干细胞。提示大鼠胚胎期及出生早期的乳腺干细胞存在分化潜能;此可为其分离及作为种子细胞转染外源性基因提供实验依据;CK18阳性细胞为已分化的腺上皮细胞,SCA-1和CK18双阳性细胞为已定向的腺上皮祖细胞。     

松弛素的心血管保护效应与一氧化氮

松弛素为相对分子质量6000的胰岛素样多肽类激素，除参与妊娠、分娩、扩张产道等作用外，尚具有心血管效应和抑制血小板聚集作用，此外，尚有抑制细胞增殖和细胞外基质合成等，与一氧化氮具有相似的效应，提示松弛素可能部分通过一氧化氮介导而发挥作用。松弛素对心血管系统作用的一氧化氮机制在心血管疾病的治疗中可能具有潜在的意义。     

人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的 检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义。方法 对孕妇自愿捐献的胎龄为10~34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达。结果 胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内。随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移。到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞。结论 在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用。     

内皮—单个核细胞体外粘附的实验研究

采用体外细胞培养法，建立了内皮－单个核细胞联合培养模型，观察了模型中单个核细胞形态和数量的变化。所见３种形态的单个核细胞，分别称为Ｉ型，Ⅱ型和Ⅲ型细胞。对３型细胞进行了形态的描述和定量的观察，认为 内皮细胞对单核细胞向巨噬细胞分化有诱导作用，该方法简便，安全、可靠，是研究内皮一单个核细胞粘附的理想模型。     

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的 构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体，使其在牛乳汁中高效表达，从而建立牛乳腺生物反应器。方法 RT-TD-PCR法克隆目的基因，通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体：采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果 显微注射法和乳腺注射法转基因后，t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达，t-PA基因的表达不受转基因方法的影响，但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量。提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异，可能受着不同的因素或调控系统的影响。     

三种反义c—mycRNA对成纤维细胞NIH3T3的体外生物学效应

目的　了解反义c myc基因稳定整合对正常细胞的影响。　方法　将分别载有c myc第 1、2和 3外显子的反义片段的 3种反义c myc重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3,导入c myc正常表达的正常小鼠成纤维细胞系NIH3T3,并在基因稳定表达后进行各项检测。　结果　 3种反义载体导入明显抑制了NIH3T3c myc表达(抑制作用aM2 >aM3>aM1)、PCNA表达 (aM2 >aM1>aM3) ,使细胞体外生长增殖活性下降 (下降程度aM2 >aM1>aM3) ,aM2、aM3还使细胞周期出现了延长和DNA合成减少 ,并使NIH3T3软琼脂集落形成能力下降 (aM2 >aM3)。　结论　反义c mycRNA的导入对正常细胞的生长增殖能力有抑制作用 ,提示局部治疗和靶向治疗在反义c myc基因治疗中的必要性     

粘附蛋白介导粘附信号传导的机理探讨

为了探讨粘附蛋白介导粘附信号传导的机制 ,我们进行了一系列的实验。首先观察了 CD4 4,Vn在单核细胞粘附于内皮表面过程的作用 ,然后观察了细胞因子 IL- 1、IL- 6、TNF和 IFN对 CD4 4和 Vn表达的调节作用 ,进一步观察了细胞色素 B对 CD4 4、Vn表达和单核细胞粘附的抑制作用 ,最后观察了细胞粘附对单核细胞增殖特性的影响。结果表明 CD4 4和 Vn可介导单核细胞粘附于内皮表面 ,细胞因子可上调 CD4 4和 Vn的表达并促进单核细胞的粘附 ,细胞骨架参与单核细胞的粘附过程 ,细胞粘附过程中单核细胞内 DNA含量和 PCNA表达增加。因此 ,我们推测粘附信号可通过细胞因子作用于粘附蛋白 ,继而通过细胞骨架引起细胞内生物学功能的变化     

人组织型纤溶蛋白酶原激活剂基因的克隆与鉴定

目的获得编码人组织型纤溶蛋白酶原激活剂(humantissueplasminogenactivator,ht-PA)的基因。方法从Bowesmelanoma细胞株中提取总RNA,然后通过,RT-TouchdownPCR(RT-TDPCR)法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pSP72连接,酶切鉴定并测序。结果酶切图谱与预期的一致,测序结果与Genebank上公布的一致。结论ht-PA克隆成功,为对该基因进一步研究和人工修饰奠定了基础。     

肝卵圆细胞的研究进展

肝卵圆细胞(hepaticovalcells,HOC)是存在于肝脏中的一类肝干细胞,目前已证实了它在人及 多种动物中存在。HOC来源并定位于肝内的胆管系统中,具有多向分化潜能,正常时处于静止状态,只有当 肝脏发生严重损伤且肝细胞再生障碍时才受到激活并大量增殖,可分化为肝细胞和胆管细胞,以修复重建肝 脏组织、恢复生化功能。本文就HOC的来源、定位、生物学特性、研究方法及应用方面的进展情况作一综述。     

成年大鼠不同发育时期乳腺上皮小亮细胞CD24的免疫组化研究

目的观察成年大鼠乳腺不同发育时期CD24阳性表达的乳腺上皮小亮细胞部位、数量的变化。方法制备成年大鼠乳腺不同发育时期（选取静止期、孕期、哺乳期、退化期）组织标本，采用免疫组织化学和光镜技术检测CD24的表达。结果CD24在导管小亮细胞中的染色程度普遍高于腺泡；相比于静止期和退化期，CD24更多地表达于孕期和哺乳期的小亮细胞；静止期和退化期表达无显著性差异（P〉0．05）；孕期和哺乳期表达也无显著性差异（P〉0．05）。结论CD24蛋白参与了正常成年大鼠乳腺组织的发育过程，且可能是鉴定乳腺干细胞（MaSCs）及观察MaSCs发育与分化过程的重要分子。