携带可调控人前脑啡肽原基因逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建四环素调控的含人前脑啡肽原基因(hPPE)逆转录病毒载体。方法用PCR方法扩增目的基因hPPE,定向克隆入逆转录病毒四环素反应质粒(pRevTRE)中,酶切反应、PCR 及DNA测序鉴定重组逆转录病毒载体pRevTRE/hPPE;在脂质体介导下分别将pRevTRE/hPPE和逆转录病毒四环素调节质粒(pRevTet-on)转入包装细胞PT67,经相应的抗生素稳定筛选得到抗性细胞克隆。RT-PCR鉴定得到阳性产病毒细胞系PT67/Tet-on和PT67/TREhPPE。用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果经限制性酶切分析、RT-PCR及DNA序列分析证实pRevTRE/hPPE中含有hPPE基因。转染有pRevTet-on的FT67细胞病毒滴度为2.6×105 CFU/ml,转染有pRevTRE/hPPE的PT67细胞病毒滴度为3.2×105 CFU/ml。结论成功构建了含有受四环素调控hPPE基因的逆转录病毒载体,建立了能产较高滴度逆转录病毒的包装细胞系,为可调控细胞移植镇痛的研究奠定了实验基础。     

亲爱的你愿意陪我生吗

孩子呱呱坠地的那一刻,通常会让许多躺在产床上的妈妈喜极而泣。然而,是否所有的妈妈都愿意跟自己的丈夫分享那充满生命奇迹的一刻呢?是不是所有的爸爸都愿意一直陪护在太太的身旁,聆听孩子的第一声啼哭呢?"陪"与"不陪",是个难题记者通过采访和网上调查发现,对于陪产的态度,无论男性还是女性,都有     

无糖甜食的低致龋作用

关于龋病受膳食影响的现代研究进展,许多文献都有记载。这些研究确定了以下的论点：①家庭食用糖有致龋作用,其消耗频数有致病意义;②如果完全取代食糖,防龋作用就有可能出现;③现在,在工业化国家人群中,食糖与龋病之间的相关性,已不很明显;④如果长期用含氟牙膏刷牙,那么食糖与龋病之间直接相关的证据就不再存在。     

巨大纵隔肿瘤14例麻醉体会

1994－1997年，行巨大纵隔肿瘤切除术14例，均采用静吸复合全麻，现报道如下。1！临床资料1．1一般资料本组患者14例，男12例，女2例，年龄最大66岁，最小7岁，体重30－70kg。ASA分级11一皿级。术前合并有胸闷、胸痛6例，胸壁静脉曲张或上腔静脉压迫综合征3例，气管受压移位3例，急性气道阻塞2例。1．2麻醉方法14例患者术前3011fill肌内注射安定10lug，阿托品0．5lug或东英若碱0．3lug。除3例行紧急气管插管外，其余均采用25g／L硫喷妥钠5－6ndkg、＆fR胆碱l－2lug／kg、芬太尼0．lIng静脉注射诱导气管插管。术中以10g／L普鲁卡因加0．4g…     

小剂量氯胺酮对趾部切口疼痛模型大鼠脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的影响

目的探讨小剂量氯胺酮对趾部切口疼痛模型大鼠脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的影响。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组:正常对照组(A组)、手术切口组(B组)、氯胺酮10.0mg/kg术前30min腹腔内注射组(C组)和氯胺酮10.0mg/kg术后30min腹腔内注射组(D组),每组8只。除A组外,其他3组按Brennan法制作趾部切口疼痛模型。术后1h观察动物疼痛行为的改变,以累积疼痛评分评定疼痛行为。术后2h固定取材,用免疫组织化学方法观察脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的变化。结果与A组相比,手术后B组、C组和D组大鼠的累积疼痛评分明显上升(P<0.01)。与A组相比,B组、C组和D组大鼠手术侧脊髓背角谷氨酸含量明显下降(P<0.01),但3组之间差异无显著性。氯胺酮在手术前、后使用都能明显抑制切口疼痛刺激诱导的Fos在脊髓浅层和固有核的表达。浅层内Fos阳性神经元平均数由B组的(27±8)分别下降到C组的(15±3)和D组的(21±4),与B组相比差异有显著性(P<0.01),C组与D组相比有差异也有显著性(P<0.05);在固有核B、C和D组Fos阳性神经元平均数分别为(12±3)、(6±2)和(8±3),与B组相比差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论在大鼠切口疼痛模型中,氯胺酮10mg/kg腹腔内注射对大鼠疼痛行为和脊髓背角谷氨酸含量无明显影响,但可明显抑制脊髓背角Fos的表达,且预先给药的抑制作用更强。     

白介素-8在胃液误吸性肺损伤中变化的观察

近年来研究表明免疫炎症性细胞因子的释放及多形核中性粒细胞（Polymorphonuclear neutrophil leukocytes,PMN）的浸润具有重要作用[1]。白介素-8（Interleukin-8,IL-8）是重要的前炎性细胞因子。本实验通过兔气管内注入胃液的方法复制误吸性肺损伤动物模型,侧重观察其急性发病过程中血浆及支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-8的变化和作用,探讨IL-8在胃液误吸性肺损伤中的变化。     

医疗机构如何满足医保病人的医疗需求

城镇职工基本医疗保险系统具有多重属性,既要保障参保职工的就医权利,又要使医疗机构得到合理的经济补偿,同时还要实现医保基金的安全运转.     

耳穴注射微量青霉素治疗急性扁桃体炎80例疗效观察

观察耳穴注射微量青霉素对急性扁桃体炎的治疗效果。取青霉素皮试验0.1ml耳穴皮内注射，80例患者治疗3次，痊愈61例，显效16例，好转3例，表明其疗效确切。     

构建人端粒酶反转录酶修饰的永生化大鼠骨髓间充质干细胞株

背景：骨髓间充质干细胞具有取材方便、多向分化及低免疫原性等优点,是转基因细胞移植镇痛领域中的理想载体细胞,但由于骨髓中间充质干细胞含量有限、体外培养的复制性衰老等问题,制约其在镇痛研究中的应用。 目的：构建永生化大鼠骨髓间充质干细胞株,为转基因细胞移植镇痛提供载体细胞来源。 方法：构建携带人端粒酶反转录酶基因的慢病毒pLV-Puro-EF1α-hTERT并转染第3代骨髓间充质干细胞后进行嘌呤霉素筛选,获得阳性细胞克隆并扩大培养,分别采用RT-PCR和TRAP法检测转染细胞人端粒酶反转录酶的表达和端粒酶活性,同时观察细胞形态、增殖和诱导分化能力、表面分子以及Nestin、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达,检测细胞染色体核型和致瘤性。 结果与结论：人端粒酶反转录酶基因修饰的骨髓间充质干细胞可以体外连续培养超过30代。与未转染的细胞和对照病毒转染的细胞相比,慢病毒转染的骨髓间充质干细胞人端粒酶反转录酶mRNA表达、端粒酶活性以及细胞增殖能力均提高,细胞周期主要处于G2/M以及S期,增殖指数明显升高;细胞表面分子CD29、CD44、CD90表达阳性率大于70%,而CD34、CD45表达阳性率不足5%,胞浆Nestin的表达阳性,而MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ未见表达,保留了干细胞成骨、成脂、成神经的分化能力,细胞形态、染色体核型均正常,裸鼠接种无致瘤性。以上结果提示成功构建了人端粒酶反转录酶基因修饰的永生化大鼠骨髓间充质干细胞株,为转基因细胞移植用于镇痛研究提供了生物学性状均一、稳定的安全载体细胞。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程