自制硅胶染色板改进超薄切片铅染色法的操作

在制备常规电镜生物标本时,常用铅染色液对超薄切片进行染色,以增加超微结构的反差。铅染色液为目前电镜技术中最常用的全能染色剂,它具有很高的电子密度。细胞的各种结构对它都有极大的亲和力。但是铅易与空气中的二氧化碳结合,产生碳酸铅沉淀而污染切片,造成切片制作的失败。     

慢传输型便秘患者结肠壁内Cajal细胞的形态学研究

目的 慢传输型便秘(STC）患者乙状结肠壁内cajal细胞(ICC)的形态学研究。方法 全层铺片、冰冻切片的免疫细胞化学染色及透射电镜观察。结果 正常成人乙状结肠壁内ICC主要分布在环肌内侧面与粘膜下层之间(ICC-SM)、环肌层内(ICC-CM)、纵肌层内(ICC-LM)及肌间神经丛周围(ICC-MP)。STC乙状结肠壁内ICC的数量均较正常对照组减少，其中，ICC-SM和ICC-CM减少尤为显著，约减少60％。铺片显示ICC-MP不仅数量减少，且突起的分支亦减少，彼此间不能形成完整的细胞网络。电镜观察可见上述部位的cajal细胞内溶酶体聚集、脂质沉积，ICC-SM突起间的缝隙连接较小、数量减少。结论 本研究结果提示ICC的这些病理改变可能与STC的发生、发展有关，但是，ICC的减少是该病的原因还是继发性损害的结果仍有待进一步研究。     

大鼠缺血性脑损伤后早期一氧化氮细胞来源的研究

探讨缺血性脑损伤后一氧化氮 (NO)的细胞来源。脑缺血后 1～ 3天增多的黄递酶 (NDP)阳性细胞多数体积较大 ,形似神经元 ;胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫阳性细胞呈典型的纤维型或原浆型星形胶质细胞状 ;在海马及室周等有部分细胞显示NDP组化产物与GFAP免疫荧光信号共存 ,共存细胞约占NDP阳性细胞 10 %～ 15 %。提示脑缺血后早期 ,NO可能主要源自神经元而非胶质细胞     

周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在大鼠脑发育过程中的表达及其分布

目的　研究周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )的mRNA及蛋白在大鼠发育过程中脑内的表达及分布。方法　采用胚胎至老年期Wistar大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。　结果　 1 原位杂交结果显示 ,脑内CDK5mRNA在大鼠E14～P35 0整个发育过程中均有表达 ,成年后趋于稳定 ;脑内CDK5mRNA主要定位于神经元 ,阳性区域主要分布于大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。 2 免疫组织化学结果显示 ,出生后脑内CDK5蛋白表达较强 ,胚胎及老年鼠表达较弱 ;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内 ;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。　结论　以上结果进一步证明 ,脑内CDK5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期 ;老年大鼠海马内CDK5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关     

转染重组bcl-2基因缓解RA介导NTCD的电镜观察

神经胚形成 ( neurulation)中最关键的形态学变化是神经管的形成 ,在此过程中 ,正常 PCD是不可缺少的因素之一。在神经管关闭过程中发生率很高的各种神经管关闭缺陷 ( neuraltube closure defect,NTCD) ,大多数亦与凋亡异常有关。研究发现 PCD广泛存在于发育中的神经系统 ,其意义在于对神经系统进行雕塑 ,最终使人神经系统的发育达到结构的高度精细和功能的尽善尽美。但目前关于早期神经管发育中的 PCD及与原癌基因 bcl-2的关系研究极少。为此本实验用电镜技术结合全胚胎培养技术和重组基因转染技术研究转染 bcl- 2基因能否减轻 PA介…     

老年性学习记忆减退与大鼠脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5的表达

背景周期素依赖性蛋白激酶5是周期素依赖性蛋白激酶家族的成员之一,脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5mRNA及其蛋白在脑内的表达及分布状况与神经退行性变思维认知学的关系一直被研究者关注.目的探讨大脑发育过程中的周期素依赖性蛋白激酶5对神经系统的发生和退行性变的影响.设计单因素方差分析实验.单位解放军第一军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室.材料实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学实验室完成.Wistar大鼠胚胎期(E8～E21)、新生期(P0～P15)、幼年期(P16～2个月)、成年期(＞ 2个月)及老年期(＞8个月后)5个阶段25只大鼠,每组5只.方法采用胚胎期至老年期大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色.主要观察指标不同脑区内周期素依赖性蛋白激酶5mRNA及其蛋白的阳性细胞分布及表达状况.结果25只大鼠全部进入结果分析.①周期素依赖性蛋白激酶5mRNA在大鼠E14～P350整个发育过程中均有表达,成年后趋于稳定;周期素依赖性蛋白激酶5mRNA主要定位于神经元,阳性区域主要分布于大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团.②出生后周期素依赖性蛋白激酶5表达较强,胚胎及老年鼠表达较弱;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达.结论脑内周期素依赖性蛋白激酶5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期,在新生期、幼年期有较为显著的表达,成年后表达下降,尤以老年期显著.老年大鼠海马内周期素依赖性蛋白激酶5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关.     

原肌球蛋白在增生性瘢痕中的表达与作用研究

目的原肌球蛋白是肌球蛋白主要相关蛋白之一,在细胞骨架与运动中起着重要的作用。探讨原肌球蛋白在增生性瘢痕中的作用,有助于揭示瘢痕挛缩的产生机制。方法收集2006年3月-2008年7月48例患者不同时期增生与非增生瘢痕组织标本,利用基因芯片筛选出的瘢痕相关基因——原肌球蛋白基因特异片段,制备成寡核苷酸探针与瘢痕组织切片进行原位杂交。同时,将各标本进行原代细胞培养,制备成纤维细胞爬片,进行原位杂交。结果原肌球蛋白基因在3、6个月的增生性瘢痕中表达均明显强于9、12个月增生性瘢痕及非增生性瘢痕,阳性细胞比例也高于9、12个月增生性瘢痕及非增生性瘢痕。结论瘢痕增生挛缩与细胞骨架运动的相关基因存在密切关系,而原肌球蛋白可能在其中起着重要作用。     

改良低温包埋胶体金免疫电镜技术

近年来,胶体金方法广泛应用于生物学研究中,为确定抗原存在的部位提供了一种检测手段。但在常规电镜制样操作过程中,因高温聚合等因素的影响,致抗原活性部份丧失,易导致该法的失败。80年代初,Lowicry1 K4M(以下简称K4M)作为低温包埋剂用于免疫电镜样品制备的包埋后染色。K4M是一种低粘度的包埋剂,可在低温(-20℃)下,由紫外     

脑缺血后海马内星形胶质细胞活化与神经元损伤的相关性研究

探讨缺血性脑损伤后海马内星形胶质细胞 (Ast)的反应与神经元损伤的关系。实验结果表明脑缺血后海马Ast的反应与神经元的损伤密切相关 ,反应性Ast是积极应答神经元损失的结果 ,在维持神经元存活中起作用     

大鼠缺血性脑损伤早期一氧化氮含量的变化及其细胞来源的研究

目的 观察缺血性损伤后脑内一氧化氮(Nitric oxide，NO)含量的变化并确定NO的细胞来源。方法 采用短暂性全脑缺血再灌注模型，运用NO生化检测、NADPH-黄递酶组化、免疫荧光双标技术及图像分析等方法。结果 ①脑内NO的浓度于缺血再灌注后12h后即升高，1～3d达高峰并持续至第5天，此后逐步下降。②NDP阳性细胞数在缺血再灌注后1d即达高峰，以颞叶皮质、海马与室周区明显；再灌注14d后阳性细胞减少或消失。③脑缺血早期(1～3d)NDP阳性细胞与GFAP免疫荧光阳性细胞少数有共存，仅占10％～15％。结论 缺血性脑损伤早期NO的浓度增高，合成NO的细胞以神经元为主。