促红细胞生成素对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对AKT 蛋白表达的影响

摘要： 目的 观察促红细胞生成素 （EPO） 对慢性心力衰竭 （CHF） 大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及对蛋白激酶 B （AKT） 蛋白表达的影响。方法 30 只成年雄性 SD 大鼠先按随机数字表法分为 2 组, 假手术 （Sham） 组 （n=6） 和模型（Model） 组 （n=24）; 模型组采用腹主动脉缩窄术建立 CHF 模型, 术后 8 周存活 16 只, 再随机分为 EPO 组与对照（Control） 组各 8 只。EPO 组予以 3 000 U/kg EPO 腹腔注射, 3 次/周, 连续 4 周; Sham 组、 Control 组给予等量的生理盐水。分别在术后 4 周、 8 周、 12 周 （即给药 4 周） 行心脏彩超检查大鼠心功能。第 12 周末全部大鼠禁食 24 h 后处死, 观察心肌组织细胞形态、 心肌细胞凋亡及计算凋亡指数 （AI）; 采用 Western blot 法检测心肌 P-AKT/AKT 蛋白表达情况。结果 超声心动图显示 Model 组 4 周时出现心室肥厚, 8 周时出现心力衰竭; EPO 干预 4 周后较 Control 组左室射血分数 （LVEF） 明显升高 （P < 0.05）, 收缩末期室间隔厚度 （IVSs）、 收缩末期左心室后壁厚度 （LVPWs）、 舒张末期室间隔厚度 （IVSd）、 舒张末期左心室后壁厚度 （LVPWd） 明显降低 （P < 0.05）。EPO 组 AI 较 Control 组显著降低（23.87%±1.45% vs 35.58%±2.81%, P < 0.01）; 与 Sham 组 （0.81±0.17） 比较, Control 组 （0.35±0.06） P-AKT/AKT OD 值明显降低, EPO 组 （1.61±0.16） 较 Control 组升高 （P < 0.01）。结论 EPO 可有效改善 CHF 大鼠的心功能, 抑制心肌细胞凋亡, 促进 AKT 的磷酸化。     

阻断肾素-血管紧张素系统对肾小球硬化的保护作用

目的　探讨阻断肾素 -血管紧张素系统 (RAS)对肾小球硬化的作用及其机制。方法　 30只SD大鼠单侧肾切除加阿霉素 (6mg/kg)尾静脉注射制作肾小球硬化大鼠模型 ,并随机分成肾小球硬化组 (D组 ) ,肾小球硬化苯那普利治疗组 (DB组 )和肾小球硬化芦沙坦治疗组 (DL组 ) ,每组各 10只 ,另取 10只SD大鼠为假手术组 (C组 ) ,尾静脉注射生理盐水。DB组每天灌胃苯那普利 10mg/(kg·d) ,DL组每天灌胃芦沙坦 4 0mg/(kg·d) ,C组及D组每天灌胃相应量生理盐水。治疗 6周后用RT -PCR分别测定肾皮质转化生长因子 β1(TGFβ1)、Ⅳ型胶原 (ColⅣ )、纤维连接蛋白 (Fn)、内皮素 - 1(ET - 1)和一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达 ,用WesternBlotting测定肾皮质TGFβ1,ET - 1和iNOS蛋白 ,免疫组化测定ColⅣ及Fn。结果　肾小球硬化组出现明显蛋白尿 ,血白蛋白下降及胆固醇上升 ,与假手术组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,血尿素氮及肌酐也上升 ,肾小球系膜细胞增生 ,细胞外基质沉积 ,肾皮质TGFβ1,ColⅣ ,Fn ,ET - 1和iNOSmRNA比假手术组分别升高 3 5 9,2 5 7,2 2 1,2 5 8和 3 2 8倍 ,蛋白表达也分别升高 2 6 0 ,1 4 0 ,0 75 ,1 83和 2 15倍。苯那普利及芦沙坦分别治疗 6周后 ,能明显减轻蛋白尿、细胞外基质沉积及肾小球硬化 ,     

微管相关蛋白1B在Fmr1基因敲除小鼠脑组织内的表达变化

目的 探讨脆性X智能低下蛋白（fragile X mental retardation protein,FMRP）对微管相关蛋白1B（microtubuleassociated protein 1B,MAP1B）是否具有调控作用。方法应用免疫组化、免疫印记和原位杂交的方法,对1周龄和6周龄的Fmr1基因敲除型（KO）和同龄野生型（WT）小鼠脑组织MAP1B及MAP1B mRNA进行分析。结果免疫组化的结果显示 ：6周龄KO小鼠各个脑区MAP1B的平均光密度值（MOD）值均显著低于同龄WT小鼠（P 〈 0.05）,1周龄KO小鼠仅在小脑和海马显著降低（P 〈 0.01） ;各脑区MAP1B的MOD值在6周龄小鼠均比同基因型的1周龄小鼠显著降低（P 〈 0.05）。免疫印记和原位杂交结果分别显示MAP1B及MAP1B mRNA在KO小鼠的海马组织均显著降低（P 〈0.05）。结论MAP1B和MAP1B mRNA在Fmr1基因敲除小鼠脑组织的表达均显著减少,提示FMRP可能正性调节MAP1B的表达。     

匹罗卡品癫痫模型中突触素Ⅰ的表达及苔藓纤维出芽的动态变化

目的探讨癫痫发生过程中突触素Ⅰ(SYNⅠ)在海马和齿状回的表达及齿状回苔藓纤维出芽的动态变化。方法建立匹罗卡品癫痫持续状态模型,用图像分析系统测定海马和齿状回不同时点SYNⅠ免疫反应吸光度值．Neo-timms’染色观察齿状回苔藓出芽的演变。结果SYNⅠ在海马和齿状回的表达于癫痫状态后2d、7d出现降低,14d开始升高,30d、60d表达明显增高；齿状回内分子层于14d开始出现苔藓纤维出芽,大鼠在同期开始出现自发发作。结论在癫痫状态后2d即出现了突触可塑性的变化,14d后由于神经轴突的再生,齿状回内分子层出现苔藓纤维出芽,形成了兴奋性的环路,可能是癫痫反复自发发作的病理基础,SYNⅠ及苔藓纤维出芽较好的反应了神经可塑性的变化。     

跳台实验训练后 FMR1基因敲除小鼠学习记忆与细胞外信号调节激酶1／2的关系

目的：探讨跳台实验训练后FMR1基因敲除（ KO）小鼠学习记忆与海马CA1、CA3区细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路的关系。方法将20只4周龄FVB近交系KO及20只野生型（WT）小鼠分为KO组和WT组。利用跳台实验观察各组小鼠被动学习记忆能力,并通过Western blot检测海马CA1、CA3区ERK1／2及p－ERK1／2的表达。结果跳台实验第1天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。跳台实验第2天KO组的潜伏期较WT组短,错误次数较WT组多。 Western blot结果显示跳台后KO组海马组织CA1区p－ERK1／2表达增加,与WT组比较差异有统计学意义（ P＜0.05）;跳台后KO组海马CA3区p－ERK1／2表达虽有增加,但与WT组比较,差异无统计学意义;跳台后KO组海马组织CA1及CA3区ERK1／2的表达与WT组比较差异无统计学意义。跳台后KO组和WT组ERK1／2及p－ERK1／2的表达与跳台前比较差异无统计学意义。结论 FMR1基因敲除小鼠学习记忆障碍与海马p －ERK1／2的异常表达有关。     

Rho激酶抑制剂及CD8+T细胞在EAE模型的作用机制研究

目的 观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对RhoA、Rock-Ⅱ以及CD8+T细胞在脑和脊髓组织中表达的影响,探索法舒地尔在实验性自身免疫性脑脊骨髓炎(EAE)模型中的作用机制.方法 把90只Lewis大鼠随机分为5组:A组(空白对照),B组(免疫后第13天),C组(免疫后第21天),D组(免疫后第35天)及E组(法舒地尔干预组).以豚鼠全脊髓为抗原混合福氏完全佐剂(CFA)诱导Lewis大鼠EAE模型,观察实验动物神经功能损害的情况;利用免疫组织化学染色法观察实验动物组脑、脊髓组织中RhoA、Rock-Ⅱ以及CD8+T细胞的表达.结果 成功建立Lewis大鼠EAE模型,A、B、C、D、E 5组中RhoA、Rock-Ⅱ以及CD8+T细胞在脑、脊髓组织中均有表达,在免疫后21 d达高峰,在免疫后及法舒地尔干预组的脑、脊髓组织中表达较空白对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);法舒地尔干预组RhoA、Rock-Ⅱ以及CD8+T细胞在脑、脊髓组织的表达较免疫后各个时间点有所减轻,差异有统计学意义(P<0.05);免疫后第13天组与免疫后35天组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Rho激酶抑制剂可以抑制EAE的病情进展、减轻神经元及轴索损害,其机制可能是抑制了Rho激酶参与白细胞及巨噬细胞迁移、浸润、吞噬过程;抑制Rho信号转导通路对细胞骨架的调节作用,而起到促进轴突再生、保护神经元的作用.     

新生儿皮质第一层PV免非Cajal-Retzius疫反应Cajal—Retzius和神经元的分布

目的 研究Caial—Retzius(CR)和非Caial-Retzius(NCR)神经元在新生儿大脑13个皮质区的分布、相应密度和可能的亚型。方法 采用免疫组织化学方法检测新生儿大脑皮质神经元数目及分布。结果 (1)PV免疫反应阳性CR细胞见于所有的新皮质区，这些区域在第一层深部也发现PV-ir水平纤维丛。(2)许多PV—ir CR细胞显示退行性变的明显标志。(3)除大的CR细胞外，小的．PV-ir NCR神经元也出现在新皮质区。它们包括不同的形态学种类，可以区分为几种亚型。结论 NCR细胞高密度地出现于第一感觉区3、1、17和41区。由于PV—ir NCR细胞密度在各区的差异，PV-ir CR与PV—ir NCR的比率在第一感觉区相对较低。目前对出生早期大鼠躯体感觉皮质的研究报道第一层存在复杂的相关的神经元间自发作用的时空模式。一个很大的可能性就是区域多样的神经元活性可能在不同脑区皮质环路中起主要作用。     

人胎听皮质含生长抑素神经元的发育

用免疫组织化学ＡＢＣ，研究了１６周至新生儿听皮质含ＳＳ神经元的发育，含ＳＳ神经元最早出现在２４周，少数散在的含ＳＳ神经元分布在脑室下层，套层，多数分布在皮质Ⅳ到Ⅵ层，随后向浅层发育，提示发育顺序似从深层向浅层发育，深层含ＳＳ神经元发育，分化，成熟比浅层早。含ＳＳ神经元的胞体平均截面积随发育过程逐渐增大，但不均速。低胎龄，突起数少而短，双极和多极神经元比例接近，随胎龄增大，多极神经元逐渐比例增高，皮     

拉莫三嗪及丙戊酸钠对锂-匹罗卡品致(癎)大鼠的神经保护作用及其对癫(癎)的治疗作用

目的:观察拉莫三嗪(LTG)及丙戊酸钠(VPA)对锂-匹罗卡品癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马锥体细胞、齿状回门区神经元的保护作用及对癫(癎)的治疗作用.方法:用大鼠制作锂-匹罗卡品SE动物模型,分三组:SE对照组,LTG治疗组和VPA治疗组.此三组在SE后2h给予安定阻断(癎)性发作,再分别给予适量生理盐水(NS)、...     

锂对脆性X综合征小鼠模型的跳台行为及糖原合成酶激酶3β活性的影响

目的 探讨氯化锂治疗是否能改善Fmr1基因敲除小鼠(ko鼠)学习跳台行为及糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的活性.方法 选用30日龄的Fmr1基因敲除小鼠(ko鼠)及同日龄的野生型小鼠(wt鼠),两种小鼠均分别给予生理盐水和氯化锂30、60、90、120、200 mg/kg.观察用药后ko鼠及wt鼠分别在行为学跳台实验中的潜伏期和错误次数.同时用免疫印迹观察ko及wt鼠的海马和皮层的GSK3β和磷酸化GSK3β(P-GSK3β)的表达.结果 与未治疗的wt鼠比较,未治疗的ko鼠跳台实验中的潜伏期时间短,错误次数增加,存在学习跳台障碍;免疫印迹实验结果:ko鼠P-GSK3β表达比wt鼠少.氯化锂治疗能够恢复ko鼠的学习跳台行为及增加P-GSK3β的表达量.氯化锂最佳使用剂量为30 mg/kg.结论 锂能改善ko鼠的学习跳台能力,可能与锂改善P-GSK3β的表达增加有关,对Fmr1基因敲除小鼠有治疗作用.