高同型半胱氨酸血症对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶表达的影响及叶酸的干预作用

目的 探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响及叶酸的干预作用.方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、HHcy组和叶酸干预组,每组10只.在大鼠饮水中添加蛋氨酸[1.0 g/(kg·d)]制作HHcy模型,叶酸干预组大鼠同时给予叶酸[0.4 mg/(kg·d)]灌胃,共持续8周.在实验前后测定各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸的浓度,给各组大鼠进行Morris水迷宫试验检查学习记忆能力,实验8周后用免疫组化染色观察大鼠海马区ChAT的表达水平.结果 与正常对照组和叶酸干预组比较,HHcy组水迷宫试验的逃避潜伏期明显延长,穿过平台次数明显减少,停留时间明显缩短(P＜0.05～0.01);HHcy组大鼠海马CA3区ChAT阳性细胞平均灰度值明显降低(P＜0.01).叶酸干预组与正常对照组以上各项检查结果 比较,差异无统计学意义.结论 HHcy导致大鼠学习记忆能力下降以及海马CA3区ChAT表达水平降低.补充叶酸能够起到很好的干预作用.     

采用PCR方法检测Fmr1基因敲除小鼠的基因型

目的为Fmr1基因敲除小鼠探索快速、简单的基因型PCR检测方法。方法设计两对引物扩增野生型Fmr1基因和Fmr1缺陷突变基因的DNA片段,用PCR仪梯度方案测试最佳退火温度,并将所得基因型结果与经典的western blot方法比较。结果野生型仅在800bp处有一条条带,突变纯合子仅在500bp处有一条条带,杂合子则在500bp和800bp处出现两条条带。用PCR方法获得的Fmr1基因分析结果与经典的western blot方法获得的结果完全一致。结论用PCR方法分析Fmr1基因敲除鼠的基因型具有快速、简单、廉价和适用的特点。     

钠通道SCN1A基因短发夹RNA表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的沉默效果

目的采用人SCN1A基因非保守区DNA构建短发夹RNA（shRNA）稳定表达的重组质粒,在HEK293细胞中抑制SCN1A基因表达。方法PCR分别正反向扩增SCN1A基因特异序列,构建成一个绿色光蛋白（GFP）与发夹结构RNA（shRNA）融合表达的重组质粒pEGFP-SCN1A-shRNA;该质粒和对照质粒（pCMV-EGFP）分别与SCN1A基因表达质粒（pCMV-SCN1A）共转染HEK293细胞株,采用半定量RT-PCR及双荧光共定位法鉴定SCN1A基因的表达情况。结果与对照相比较,shRNA表达质粒转染的培养细胞中SCN1A基因mR-NA表达量下调90%;双荧光共定位显示实验组阳性细胞中只检测到GFP蛋白,未能检测到Nav1.1,而对照组阳性细胞中能同时检测到GFP蛋白和Nav1.1。结论shRNA表达质粒在培养细胞中能有效地抑制SCN1A基因的表达。该质粒可进一步改造成腺病毒表达载体,在动物脑组织中进行永久性表达,建立癫痫等神经系统疾病的动物模型,可望成为致病机理研究和开发新治疗途径的工具。     

广东汉族人颅内动脉瘤与肿瘤坏死因子TNFα-1031基因多态性的相关性研究

目的 探讨广东汉族人群肿瘤坏死因子TNFα-1031基因多态性与颅内动脉瘤的相关性.方法 采用聚合酶链-限制性片段长度多态性方法检测118例颅内动脉瘤患者与100名健康对照者TNFα-1031基因多态性,并对两组人群中该基因的基因型频率进行比较.结果 在患者中T/T基因型有86例(72.88%),T/C基因型有29例(...     

海马内注射内皮素-1导致大鼠痫性发作和海马硬化的初步研究

目的 观察大鼠海马内注射内皮素(endothelin,ET)-1是否导致大鼠痫性发作和海马硬化.方法 立体定位在成年大鼠海马CA3区内分别注射1 μL ET-1(200 pmol,15只)、海人酸(kainate,KA 5 pmol,15只)或磷酸盐缓冲液(PBS,0.01 mol,8只),观察大鼠行为学、脑电及对侧海马病理学改变.结果 海马注射PBS后大鼠未见痫性发作,脑电图呈10～15 Hz、150-200μV基本节律.注射ET-1或KA 2 h内大鼠出现不同程度的痫性发作和脑电图异常改变(尖波或尖慢波),KA组3-5级发作率高于ET-1组(86.67% vs 16.67%,P<0.05).部分ET-1和KA组大鼠在给药后2～3周可见癫痫样发作行为学改变.与PBS组比较,El-1和KA组给药后48 h对侧海马各区Nissl染色细胞数明显减少,GFAP表达增强(P<0.05);给药后30 d,对侧CA3区和门齿区苔藓纤维出芽评分高于PBS组(P<0.05).结论 海马注射ET-1可以导致大鼠癫痫样行为改变和海马硬化.     

HHcy大鼠学习记忆能力和基底前脑ChAT的变化及早期叶酸干预

目的 观察高同型半胱氨酸血症(HHcy)对大鼠学习记忆能力和基底前脑胆碱乙酰基转移酶（ChAT）的影响及早期叶酸(FA)干预的作用。方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、HHcy组和FA组,对照组给予饮用水,在HHcy组饮用水中添加蛋氨酸（1.0g/kg/d）,在FA组饮用水中添加蛋氨酸（1.0g/kg/d）并予FA（0.4mg/kg/d）灌胃,共进行8周,测定各组血浆同型半胱氨酸（Hcy）、FA的基础浓度及实验满8周时的浓度,Morris水迷宫实验评估各组的学习记忆能力,并对大鼠基底前脑进行ChAT的免疫组化实验,对其灰度值进行分析。结果 HHcy组的学习记忆能力较对照组和FA组均减退（P均＜0.01),经灰度分析比较后显示HHcy组基底前脑隔内侧核、Meynert’s基底核ChAT阳性细胞的表达与其余两组的差异具有统计学意义（P＜均0.01)。结论 过量的蛋氨酸饮食可致HHcy,影响学习记忆能力,HHcy影响学习记忆能力考虑与基底前脑核团的胆碱能神经元的减少有关; 早期补充叶酸可降低血浆Hcy水平,改善HHcy对学习记忆能力的影响。