定向诱导的骨髓基质细胞移植后在大鼠缺血脑组织中的分布

目的探讨人骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）源神经细胞体内移植后的分布状况。方法采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离、纯化人MSCs。MSCs经bFGF预诱导24h及阿魏酸钠（Sodium Ferulate）诱导24h后用于移植。采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型．缺血2h后行再灌注，24h后经栓塞侧颈内动脉注入诱导后的MSCs（5×10^6/0．8ml）（n=61。2w后取脑组织行冰冻切片．通过检测人细胞核特异抗体MAB1281来鉴定移植的人MSCs。结果MSCs经阿魏酸钠诱导后．细胞逐渐圆缩并伸出突触．呈现神经细胞样形态。在移植大鼠脑内可检测到MAB1281呈阳性表达的人MSCs．且MSCs主要分布在缺血侧损伤灶的周围，明显高于对侧同部位及其它脑区。结论人MSCs源神经细胞移植后在大鼠脑内存活并主要聚集在脑内缺血灶的周围。     

肾透明细胞癌miRNA-34a、Notch1和Hes1的表达及意义

目的观察miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织的表达，探讨其与肾癌发生发展的关系及可能的临床意义。方法运用实时荧光定量PCR方法检测miRNA-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌组织及其相应的癌旁正常组织的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果与正常组织相比，miRNA．34a在肾癌组织中高表达（P〈0．05），Notch1、Hes1在肾癌组织中低表达（P〈0．05）；miRNA-34a随着肾癌病理分级的增高而增高，Notch1的表达则随着肾癌病理分级的增高而降低（P均〈0．05）。结论高表达的miRNA-34a通过下调其靶基因Notch1参与肾透明细胞癌的发生发展，此有望成为肾癌诊断的分子标志物及潜在的治疗靶点。     

间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达

目的:研究间接接触共培养条件下骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞(myocadium-lkce cells,CMs)的分化及相关调控基因的时序表达;筛选MSCs定向分化为CMs的重要调控基因。方法:将MSCs与CMs按1∶5的比例进行间接接触共培养,连续观察两周,在相差显微镜下观察MSCs的形态变化。采用免疫荧光染色法检测心肌特征性肌动蛋白α(α-actin)和心脏肌钙蛋白T(cTnT)的表达。应用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C及TEF-1等相关调控基因在分化过程中的时序表达。结果:共培养后,MSCs的体积增大,其梭形形态逐渐变短变粗近似棒状或椭圆形,细胞之间形成连接,排列方向趋于一致。共培养两周时,α-actin及cTnT阳性细胞的比例分别为29.63%和27.38%。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培养后1 d表达开始增强,诱导后7 d达高峰,以后虽有所下降但仍维持在较高水平;TEF-1基因在诱导过程中表达无明显变化。结论:间接接触共培养条件下,MSCs可分化为心肌细胞。在此过程中,TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因可能是调控MSCs定向分化为心肌样细胞的重要调控基因。     

BALB／C小鼠胚胎干细胞的分离培养及初步鉴定

目的从BALB／C小鼠的早期胚胎中分离和培养胚胎干细胞（Es细胞），并对其生物学特性进行初步鉴定。方法收集BALB／C小鼠3．5d胚龄的囊胚，分离内细胞团（ICM）细胞进行培养，以小鼠原代胚胎成纤维细胞（PMEF）作为饲养层，细胞扩增传代，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶（AKP）染色对细胞集落进行初步鉴定。结果ES细胞呈集落样生长，AKP染色阳性，符合小鼠ES细胞的一些特性．结论BALB／C小鼠囊胚在原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖的影响及Notch1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫荧光细胞染色法检测各组缺血侧室管膜下区Nestin、Ki-67及Notch1的表达。结果（1）BMSC移植组缺血侧室管膜下区Nestin和Ki-67阳性细胞数较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高;（2）BMSC移植组缺血侧室管膜下区Notch1的表达明显高于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖,且可能与促进Notch1表达有关。     

昆明鼠胚胎干细胞系的建立及其特性

背景:到目前为止,国际上通用的动物胚胎干细胞细胞系大多是从129品系和C57BL/6系小鼠中获得的,少部分来自BALB/C系,来自于中国昆明鼠则鲜有报道.目的:分离培养昆明系小鼠胚胎干细胞,并对其生物学特性进行初步鉴定.设计、时间及地点:以细胞为对象的观察性实验,于2006-05/2007-06在南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所完成.材料:昆明小鼠3.5 d胚龄的囊胚.方法:自昆明系小鼠3.5 d胚龄的囊胚分离内细胞团细胞,接种于小鼠原代胚胎成纤维细胞饲养层上,对分离的内细胞团细胞进行扩增、传代培养.主要观察指标:观察胚胎干细胞集落的生长情况,对其碱性磷酸酶表达进行染色分析,采用免疫荧光法检测其阶段特异性胚胎抗原1表达,以反转录-聚合酶链反应检测其特异性表达因子c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2的基因表达情况,并对其体内外分化能力对进行鉴定分析.结果:分离、培养自内细胞团的细胞呈典型的胚胎干细胞集落样生长,碱性磷酸酶染色及阶段特异性胚胎抗原1荧光染色阳性,细胞表达c-Myc,Nanog,Oct3/4和Sox2等基因,细胞在体内外均能分化成来源于不同胚层的多种细胞类型.结论:成功从昆明小鼠囊胚中分离并建立一株胚胎干细胞系,其生物学特性与其他胚胎干细胞株相符.     

经阿魏酸钠定向诱导的骨髓间充质干细胞在脑缺血大鼠体内移植研究

目的探讨经阿魏酸钠定向诱导的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体内移植后在局灶性脑缺血大鼠脑内的存活及分布状况。方法分离、培养人MSC,经阿魏酸钠定向诱导后用于移植。复制大鼠局灶性大脑中动脉栓塞模型,实验组经股静脉注入诱导后CM-DiI标记的MSC,对照组注入等体积的生理盐水。2周后取脑组织行冰冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在脑组织中的存活及分布状况,同时检测神经元标志物NSE的表达。结果 MSC经阿魏酸钠诱导24h后,细胞逐渐圆缩并伸出突触,呈现神经细胞样形态,CD29表达阳性,CD34表达阴性。实验组大鼠脑内可见CM-DiI标记的MSC,主要分布在缺血侧损伤灶;同时可检测到细胞表面表达神经元标志物NSE。结论 MSC经阿魏酸钠诱导后向神经细胞分化,诱导分化的细胞能在脑缺血大鼠脑内存活,且主要分布在缺血侧损伤区,并仍保留已分化神经细胞的特性。     

TNF-α体外诱导rMSC向神经细胞分化的研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。方法采用密度梯度离心法分离rMSCs．取培养至3-5代的rMSCs以含TNF-α 5ng／ml的培养基培养,镜下观察细胞诱导后形态的变化,采用免疫荧光细胞化学染色法检测神经前体细胞标志物巢蛋白nestin和神经元特异性烯醇化酶在细胞中的表达强度和分布。结果rMSCs经TNF-α诱导6h后基本表现为典型神经样细胞形态．nestin和NSE呈阳性表达。结论TNF—α具有体外诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的作用。     

肾缺血对缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的影响

Objective To investigate the expression changes of microRNAs and VEGF-NOTCH in renal ischemic injury in mice, and to explore the potential mechanism associated with renal angiogenesis.Method Male Balb/c mice were subjected to a standard renal ischemia to induce acute kidney injury (AKI) after 45 min of bilateral renal artery clamping. Following 4 h, 24 h of reperfusion or sham operation, kindey tissues were collected and subjected to detect the expression changes of microRNAs which relatived with angiogenesis and VEGF, Flk-1, Notch1 mRNA by Quantitative Real-time RT-PCR. Flk-1 protein was detected by Western blotting analysis at 24 h and 72 h following Ischemia/Reperfusion(I/R) injury. The expression of CD31 was examined in tissue sections by immunohistochemistry staining, and the microvessels in ischemic region of each group were counted. Results miRNA-210 and miRNA-92a expression increased significantly, with prominent changes at 4 h and 24 h after reperfusion( P ＜ 0.05 ). VEGF and Flk-1 mRNA expression and Flk-1 protein were increased in renal I/R compared with control group respectively (P＜0.05 ).Immunohistochemistry staining results of CD31 showed a significant increase of microvessels in renal ischemic region. Conclusion This study first reported the changes in miRNAs expression in response to kidney I/R in mouse. our results implied that miRNAs may be involved in targeting VEGF-Notch pathway signaling to regulate angiogenesis after renal I/R injury. It provided novel insights into the angiogenesis mechanism of renal ischemic injury.     

缺血性脑损伤大鼠MicroRNA 210的动态变化

目的观察缺血性脑损伤后大鼠缺血皮质区microRNA 210的表达变化规律,探讨mir-210对脑缺血后血管新生的可能影响。方法实验分为缺血后1d、3d、7d组和假手术组(n=5),缺血组采用线栓法制作大脑中动脉阻塞模型,于缺血后1、3、7d处死大鼠,取缺血皮质区用于实验;假手术组仅暴露动脉。提取各实验组脑缺血皮质区的miRNA,Real time PCR比较各实验组mir-210的表达水平。结果脑缺血后mir-210表达显著上调,缺血后1d、3d、7d分别为假手术组的7.2±0.56、20.1±0.87和20.3±0.76倍(P0.05)。结论脑缺血后mir-210表达显著上调,mir-210可能在促进脑缺血后血管新生过程中起重要作用。