脑外伤后小鼠海马区notch信号的表达变化

目的观察脑外伤后小鼠海马区notch信号基因的表达变化。方法采用Feeney自由落体法复制闭合性脑外伤小鼠模型,分为假手术对照组和脑外伤组,于伤后4h、1d、3d分别处死。采用实时荧光定量PCR法检测伤后各时间点notch1、hes1mRNA的表达。结果 （1）notch1 mRNA表达水平在伤后4h开始升高,1d时达到高峰,较对照组升高约6倍,3d时有所回落,但仍维持在高水平,较对照组升高2倍。（2）hes1 mRNA在伤后4h无明显变化,1d时达到高峰,较对照组升高3倍,3d时回落到正常水平。结论脑外伤后notch1和hes1 mRNA明显增高,提示notch信号被激活,可能与伤后NSCs增殖分化相关。     

氯化镧阻断LPS诱导巨噬细胞钙信号通路激活及TNF-α释放

目的探讨氯化镧（LaCl3）对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导巨噬细胞钙信号通路激活及肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放的影响。方法将巨噬细胞RAW 264.7随机分成四组：LPS组（培养液中含1μg/ml LPS）,LaCl3＋LPS组（以含2.5μmol/ml LaCl3的培养基孵育细胞一定时间后,再予以1μg/ml LPS刺激）,LaCl3组（培养液中含2.5μmol/ml LaCl3）及对照组（培养液中不含LaCl3和LPS）。于不同时间点分别收集各组细胞及其培养上清待测。以Fluo-3/Am加载细胞,经上述不同分组处理一定时间后,流式细胞术观察细胞内Ca2＋浓度（[Ca^2＋]i）的变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中TNF-α水平。结果流式细胞术测定结果显示：LPS组细胞内[Ca^2＋]i为（336.67±26.16nmol/L）,与对照组比较差异显著（P〈0.01）;LaCl3＋LPS组（162.67±26.41nmol/L）显著低于LPS组（P〈0.01）;LaCl3组（29.84±6.42nmol/L）与对照组相比略低但无统计学意义（P〉0.05）。LPS组细胞培养上清TNF-α含量（152.19±15.68pg/ml）与对照组相比,显著升高（P〈0.01）;而LaCl3＋LPS组细胞培养上清中TNF-α含量为43.95±6.55 pg/ml,与LPS组相比显著下降（P〈0.01）且与对照组相比无差异;LaCl3组细胞培养上清中TNF-α含量（27.84±3.73pg/ml）与LPS组相比显著下调（P〈0.01）,并且与对照组相比亦显著下调（P〈0.05）。结论一定浓度的LaCl3可阻断LPS诱导巨噬细胞钙信号通路激活及抑制TNF-α的释放。     

大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定

目的:目前内皮祖细胞主要从骨髓、脐带血和外周血获取,但其分离培养方法尚不成熟,外周血来源因损伤小、易获取而被普遍使用,但得到的内皮祖细胞纯度较低.实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定方法.方法:实验于2006-08/2007-08 在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成.①实验材料:2周龄SD大鼠由南昌大学医学院动科部提供,雌雄不拘,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:应用梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,贴壁筛选法分离内皮祖细胞,置于添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子的M199培养液中扩增培养,对培养2周的细胞采用免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体-2、CD34、CD133, 采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因表达.结果:①培养4 d,光电显微镜下可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长.培养7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的"鹅卵石"样外观.2周左右可见细胞排列成条索状结构并可呈"微血管样"排列生长.②贴壁细胞免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、FLK-1、CD34、CD133阳性,RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因阳性表达.结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养和体外扩增.     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血区微血管增生及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSC）移植对脑缺洫皮质区血管形成的影响及微血管Noteh1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫组织荧光染色法检测各组缺血皮质区Ⅷ因子及Notch1的表达。结果（1）植入的BMSC可以趋向性迁移到脑缺血损伤区域。（2）BNSC移植组脑缺血皮质区新生徽血管密度较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高。（3）BMSC移植组缺血皮质区多数微血管内皮细胞阳性表达Notch1,且明显多于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血区血管新生,且可能与促进Notch1表达有关。     

BALB/C小鼠胚胎干细胞的分离培养及初步鉴定

目的从BALB/C小鼠的早期胚胎中分离和培养胚胎干细胞(ES细胞),并对其生物学特性进行初步鉴定.方法收集BALB/C小鼠3.5d胚龄的囊胚,分离内细胞团(ICM)细胞进行培养,以小鼠原代胚胎成纤维细胞(PMEF)作为饲养层,细胞扩增传代,观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶(AKP)染色对细胞集落进行初步鉴定.结果ES细胞呈集落样生长,AKP染色阳性,符合小鼠ES细胞的一些特性.结论BALB/C小鼠囊胚在原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞.     

镧对内毒素/脂多糖诱导的巨噬细胞核因子KB活化的抑制作用

目的了解稀土元素镧对内毒素/脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)核因子κB(NF-κB)活化的影响,并探讨其机制。方法分离培养小鼠腹腔 Mφ,分为:空白对照组,无刺激因素;LPS 组,用1μg/ml LPS 刺激30 min;镧离子(La~(3 ))组,用2.5 μmol/L La~(3 )刺激30 min;La~(3 ) LPS 组,先后用2.5μmol/L La~(3 )、1μg/mI LPS 各刺激30 min;La~(3 )/LPS 组,2.5μmol/L La~(3 )刺激30 min 后,洗涤细胞,再加入1μg/ml LPS 刺激30 min。采用细胞免疫荧光染色法观察 NF-κB在各组细胞中的分布与表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法捡测胞核中 NF-κB/p65蛋白活性;蛋白质印迹法检测细胞核内 NF-κB/p65蛋白及胞质中核因子抑制蛋白α(IκBα)的表达量。ELISA 法测定各组细胞培养上清液中肿瘤坏死冈子α(TNF-α)的含量。结果 (1)免疫荧光染色显示,空白对照组、La~(3 )组、La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组 Mφ绿色荧光多分布于胞质,胞核荧光强度分别为42±7、73±30、48±11和67±19;LPS 组绿色荧光集中于胞核,荧光强度为116±14,明显高于其余4组(P<0.01)。(2)胞核 NF-κB/p65蛋白活性:LPS 组吸光度值为0.435±0.066.与空白对照组(0.048±0.027)、La~(3 )组(0.062±0.049)、La~(3 ) LPS 组(0.066±0.031)、La~(3 )/LPS 组(0.108±0.017)比较,明显偏高(P<0.01)。(3)LPS 组 Mφ胞核 NF-κB/p65蛋白表达水平明显高于其余4组,胞质 IκBα蛋白表达水平明显低于其余4组。(4)TNF-α含量:La~(3 )组培养上清液中 TNF-α含量低于试剂盒检测下限(25 pg/ml)及空白对照组(P<0.05),La~(3 ) LPS 组和 La~(3 )/LPS 组低于 LPS 组(P<0.01),但高于空白对照组。结论 LPS 可激活小鼠腹腔 MφNF-κB/p65核移位,并使胞核中 NF-κB/p65的表达量和活性升高、胞质 IκBα蛋白表达下调,导致 TNF-α分泌增多。镧可抑制上述效应。     

人诱导性多能干细胞向神经干细胞分化过程中相关microRNA的表达变化

目的 观察人诱导性多能干(induced pluripotent stem,iPS)细胞向神经下细胞(neural stem cells,NSCs)定向分化过程中相关microRNA的变化.方法 结合维甲酸(RA)和无血清培养基诱导法,获得人iPS细胞分化来来源的NSCs,以未分化的iPS细胞为对照组,分别提取拟胚体(...     

真皮多能干细胞与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)三元共聚酯的生物相容性

目的 观察小鼠真皮多能干细胞(SKP)与聚(对苯二甲酸丁二醇酯-co-聚乙二醇-co-低聚乳酸)(PBTEOLA)三元共聚酯的生物相容性.方法 分离培养小鼠乳鼠SKP.用DAPI标记SKP细胞核后,荧光显微镜下动态观察SKP接种在共聚酯支架上的生长情况;SKP与共聚酯体外立体培养至第4天和第7天时,通过扫描电镜及苏木素-伊红(HE)染色观察细胞生长及基质分泌情况;噻唑蓝(MTY)比色法检测共聚酯对SKP的增殖影响.结果 SKP细胞接种于共聚酯上24 h后即贴壁生长,第5～7天时为生长高峰.SKP牢固地黏附于共聚酯材料表面和孔隙内,细胞间有伪足相连,且有基质形成.检验时间因素和材料因素交互作用时,差异无统计学意义(P＞0.05).共聚酯对细胞生长无明显影响.结论 PBTEOLA三元共聚酯对SKP细胞具有良好的生物相容性,可选择作为组织工程的支架材料.     

尿道修复材料的研究及应用进展

尿道修复材料是尿道修复重建成败的关键,将尿道的修复材料分为自体组织材料、人工合成材料及组织工程化材料,从实验室和临床2方面对尿道修复材料的研究及应用进展进行综述.     

尿道修复材料的研究及应用进展

尿道修复材料是尿道修复重建成败的关键,将尿道的修复材料分为自体组织材料、人工合成材料及组织工程化材料,从实验室和临床2方面对尿道修复材料的研究及应用进展进行综述.