镧对内毒素/脂多糖诱导的巨噬细胞核因子κB活化的抑制作用

目的 了解稀土元素镧对内毒素／脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）核因子KB（NF-κB）活化的影响,并探讨其机制。方法分离培养小鼠腹腔Mφ,分为：空白对照组,无刺激因素：LPS组,用1μg／mlLPS刺激30min;镧离子（La^3＋）组,用2,5μmol／L La^3＋刺激30min;La^3＋＋LPS组,先后用2,5-μmol／L La^3＋、1μg／ml LPS各刺激30min;La^3＋／L PS组,2．5μmol／L La^3＋刺激30min后,洗涤细胞,再加入1μg／ml LPS刺激30min。采用细胞免疫荧光染色法观察NF-κB在各组细胞中的分布与表达;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测胞核中NF-κB／p65蛋白活性;蛋白质印迹法检测细胞核内NF-κB／p65蛋白及胞质中核因子抑制蛋白α（IκBα）的表达量。ELISA法测定各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。结果 （1）免疫荧光染色显示,空白对照组、La^3＋组、La^3＋＋LPS组和La^3＋／LPS组M小绿色荧光多分布于胞质,胞核荧光强度分别为42±7、73±30、48±11和67±19;LPS组绿色荧光集中于胞核,荧光强度为116±14,明显高于其余4组（P〈0.01）。（2）胞核NF-κB／p65蛋白活性：LPS组吸光度值为0．435±0．066,与空白对照组（0．048±0．027）、La^3＋组（0．062±0．049）、La^3＋＋LPS组（0.066±0.031）、La^3＋／LPS组（0．108±0.017）比较．明显偏高（P〈0．01）。（3）LPS组M由胞核NF-κB／p65蛋白表达水平明显高于其余4组,胞质IκBα蛋白表达水平明显低于其余4组。（4）TNF-α含量：La^3＋组培养上清液中TNF-α含量低于试剂盒检测下限（25pg／m1）及空白对照组（P〈0.05）,La^3＋＋LPS组和La^3＋／LPS组低于LPS组（P〈0．01）,但高于空白对照组。结论 LPS可激活小鼠腹腔M由NF-κB／p65核移位,并使胞核中NF-κB／p65的表达量和活性升高、胞质IκBα蛋白表达下调,导致TNF-α分泌增多。镧可抑制上述效应。     

硒化合物诱导高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡

目的探讨二氧化硒(SeO_2)对高危型HPV亚型宫颈癌细胞凋亡的诱导作用及其分子途径。方法不同浓度SeO_2分别作用于高危型HPV亚型宫颈癌细胞He La(HPV18+)和Caski(HPV16+)24 h,光学显微镜下观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖及活力;流式细胞计量术(FCM)检测细胞凋亡率;Western blot测定细胞内caspase-3和p53蛋白表达;Stem-loop实时定量PCR检测凋亡相关miRNA LET-7a表达。结果 SeO_2作用后宫颈癌细胞变圆、皱缩;SeO_2呈量效依赖关系抑制宫颈癌细胞增殖,其中He La细胞在7.5~30μmol/L组抑制作用显著;Caski细胞在SeO_2低浓度组即有显著抑制作用(P0.05)。宫颈癌细胞凋亡率亦随SeO_2浓度升高而升高,在Caski细胞上升更加明显。SeO_2可明显上调宫颈癌细胞系中caspase-3与p53蛋白水平,在He La细胞中二者均于7.5μmol/L处达到峰值。Caski细胞从7.5μmol/L组开始凋亡蛋白表达量显著性升高(P0.05)。SeO_2还可显著上调两细胞系实验组细胞LET-7a表达水平,且均在7.5μmol/L处出现峰值。结论 SeO_2通过上调高危型HPV亚型宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白p53蛋白及miRNA LET-7a的表达,经caspase-3途径诱导细胞凋亡。对于SeO_2诱导宫颈癌细胞凋亡,HPV16+型较HPV18+型宫颈癌细胞更为敏感。     

miR-210对血管内皮细胞VEGF-Notch信号通路的调控

目的: 观察过表达miR-210对血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-Notch信号通路相关分子表达的影响,探讨miR-210调控血管新生的分子机制。方法: 采用常规方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。通过转染LV- miR-210-GFP重组慢病毒载体上调内皮细胞miR-210表达,实验分为miR-210过表达组(LV- miR-210-GFP)和对照组(LV-GFP)。采用real-time PCR检测miR-210的表达变化,流式细胞术检测ephrin-A3的表达,采用real-time PCR、Western blotting、免疫荧光细胞化学染色法分别检测VEGF-Notch信号通路相关分子VEGF、VEGF 2(VEGFR 2)、Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果: Real-time PCR结果显示,与对照组相比,miR-210过表达组miR-210表达水平上调了(32.10±1.26)倍;流式细胞术结果显示,miR-210过表达组阳性细胞率 较对照组 明显增加(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,miR-210过表达组 VEGF、VEGFR2、Notch1 mRNA分别较对照组上调了(7.40±0.67)、(2.50±0.10)、(9.70±0.72)倍,P<0.05;免疫荧光结果显示,miR-210过表达组VEGF和VEGFR2红色荧光信号均显著强于对照组(P<0.05)。Western blotting 结果显示,miR-210过表达组血管内皮细胞中Notch1的蛋白表达量(4.22±0.60)较对照组明显升高(P<0.05)。结论: miR-210过表达可显著上调VEGF-Notch信号通路分子的表达水平。     

人真皮多能干细胞移植后在缺血性损伤脑组织中的迁移与分布

目的探讨经股静脉移植的大鼠真皮多能干细胞在缺血性损伤脑组织中的存活、迁移及分布情况。方法分离培养人真皮来源的多能干细胞(skin-derived precursors,SKPs),采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h后行再灌注,于再灌注24h后将CM-DiI标记的人真皮来源的SKPs经大鼠股静脉输入动物模型体内,植入后分别在第1、3、5d处死大鼠,作冰冻切片,采用免疫组织荧光染色法,检测SKPs在脑缺血大鼠体内的存活、迁移及分布情况。结果在移植了SKPs后的MCAO大鼠脑组织冰冻切片中,荧光显微镜下可见移植的SKPs。静脉移植的细胞主要分布在缺血灶的周围,健侧脑组织中偶见移植细胞。结论经股静脉移植的SKPs,能够在宿主缺血的脑组织中存活,并向损伤部位迁移。     

大鼠非细菌性前列腺炎模型的复制

目的探讨大鼠非细菌性前列腺炎模型的制备方法,为非细菌性前列腺炎的治疗研究提供组织学依据。方法将弗氏完全佐剂（CFA）直接注射SD（Sprague-Dawley）雄性大鼠前列腺内,手术后3、7、10 d分批解剖,进行外观和组织学观察。结果形成典型的非细菌性前列腺炎动物模型。结论弗氏完全佐剂（CFA）可以成功制做大鼠非细菌性前列腺炎,为本病的治疗提供一种可靠的动物模型,并为本病的进一步研究提供一条实验性途径。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖及Notch1表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖的影响及Notch1表达的变化.方法 用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组.采用免疫荧光细胞染色法检测各组缺血侧室管膜下区Nestin、Ki-67及Noteh1的表达.结果 (1)BMSC移植组缺血侧室管膜下区Nestin和Ki-67阳性细胞数较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高;(2)BMSC移植组缺血侧室管膜下区Notch1的表达明显高于单纯缺血组和假手术对照组.结论 BMSC移植可促进脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖,且可能与促进Notch1表达有关.     

尿道修复材料的研究及应用进展

尿道修复材料是尿道修复重建成败的关键,将尿道的修复材料分为自体组织材料、人工合成材料及组织工程化材料,从实验室和临床2方面对尿道修复材料的研究及应用进展进行综述.     

尿道修复材料的研究及应用进展

尿道修复材料是尿道修复重建成败的关键,将尿道的修复材料分为自体组织材料、人工合成材料及组织工程化材料,从实验室和临床2方面对尿道修复材料的研究及应用进展进行综述.     

骨髓间充质干细胞通过血管内皮细胞生长因子受体2调控神经干细胞的增殖与分化

目的 观察血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)在骨髓间充质干细胞(MSCs)调控神经干细胞(NSCs)增殖与分化中的作用.方法 细胞共培养分为5组:NSCs+MSCs、NSCs+MSCs+SU5416(VEGFR2阻断剂)、NSCs+HMVECs、NSCs+HMVECs+SU5416、NSCs+3T3.共培养6 h后,采用逆转录.聚合酶链反应检测各组NSCs标志物nestin、成熟星形胶质细胞标志物GFAP及Notch信号分子Notchl和hesl的表达.结果 在MSCs及HMVECs共培养组中nestin的表达较高,当VEGFR2信号通路被阻断后,nestin的表达明显下降,而成熟神经细胞GFAP的表达却明显增加.同时,在MSCs及HMVECs共培养组中,Notchl、hesl的表达也明显高于3T3对照组及VEGFR2信号通路阻断剂组.结论 VEGFR2在MSCs调控NSCs增殖与分化过程中可能起重要作用.