兔脂肪干细胞的体外分离培养特性

背景：现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致，所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异。 目的：观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成。 材料：健康成年新西兰大白兔6只，由昆明医学院实验动物中心提供。Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品，胰蛋白酶为美国Sigma公司产品。 方法：无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫，采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞，待细胞生长至80%融合时传代。 主要观察指标：倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况，免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达，MTT比色法绘制细胞生长曲线，流式细胞仪测定细胞增殖指数。 结果：自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速，低密度生长时呈三角形或短梭形，核/浆比例较大，接近融合时呈成纤维细胞样外观，长期传代形态无明显改变。第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达，CD34为阴性；细胞生长曲线呈“S”形，在对数生长期其细胞倍增时间为59 h。随传代次数的增加，来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高，至第8代达到最高，以后逐渐降低。 结论：兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞，兔源性脂肪干细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长，表达CD44表面标志物，具有较强的体外增殖能力。 关键词：脂肪干细胞；生物学特性；组织工程；兔     

兔脂肪干细胞的体外分离培养特性

背景:现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致,所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异.目的:观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成.材料:健康成年新西兰大白兔6只,由昆明医学院实验动物中心提供.Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品,胰蛋白酶为美国Sigma公司产品.方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,待细胞生长至80%融合时传代.主要观察指标:倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达,MTT比色法绘制细胞牛长曲线,流式细胞仪测定细胞增殖指数.结果:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,低密度生长时呈三角形或短梭形,核/浆比例较大,接近融合时呈成纤维细胞样外观,长期传代形态无明显改变.第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;细胞生长曲线呈"S"形,在对数生长期其细胞倍增时间为59 h.随传代次数的增加,来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高,至第8代达到最高,以后逐渐降低.结论:兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞,兔源性脂肪十细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,表达CD44表面标志物,具有较强的体外增殖能力.     

上调Shh表达对去势骨质疏松大鼠干预效果及作用机制

目的 研究上调音猬因子(Shh)表达对去势骨质疏松模型大鼠的干预效果及作用机制。方法 选取清洁及健康的雌性昆明大鼠32只，随机选取8只分为正常组，剩余24只建立去势骨质疏松模型，分为模型组、空白组、上调组，各8只。比较各组Shh、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(NTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TPACP)5b、骨密度、核因子KB受体活化因子配体(RANKL)、自噬相关蛋白(Beclin)1、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ、骨保护素(OPG)水平。结果 与模型组、空白组相比，上调组Shh表达、骨密度、OPG水平显著升高(P<0.05),ALP、NTX、TPACP5b、RANKL、Beclin1、LC3-Ⅱ水平显著降低(P<0.05),股骨最大扭矩、股骨最大载荷显著增大(P<0.05)。结论 上调Shh基因可通过调控RANKL、Beclin1、LC3-Ⅱ、OPG蛋白而降低ALP、NTX、TPACP5b水平，增强骨密度，进而降低骨代谢，改善去势骨质疏松大鼠的骨生物力学。