TP免疫细胞化学法在浆膜腔积液细胞学诊断中的应用

目的：探讨薄层细胞涂片法（TP）免疫细胞化学对浆膜腔积液中细胞学诊断的应用价值、方法：对73例浆膜腔积液进行常规HE染色,采用TP免疫细胞化学检测癌胚抗原（CEA）、上皮抗原（EA）、间皮细胞（MC）、钙结合蛋白（Cal）、角蛋白（CK）、CD56、白细胞共同抗原（LCA）、CD68等的检测。、结果：42例腺癌中90．5％CEA表达阳性。95,2％EA表达阳性,4．8％MC表达阳性,4．8％Cal表达阳性。5例鳞癌中100％CK表达阳性,CEA表达阴性。2例淋巴瘤中100％LCA表达阳性,CD68表达阴性。l例小细胞癌l00％CD56阳性。在23例反应性间皮细胞中,反应性间皮细胞（0／23）CEA和EA全部呈阴性表达,91．3％Mc表达阳性,87．0％Cal表达阳性。CEA和EA在腺癌细胞中特异性为100％。MC和Cal在良性反应性间皮细胞中特异性为95．2％。结论：通过TP免疫细胞化学方法,选择性地联合使用数种抗体可以对浆膜腔积液中恶性肿瘤细胞与反应性间皮细胞进行诊断与鉴别诊断。     

单方绿豆粉干预哮喘小鼠肺组织中自三烯C4和5-脂氧合酶及其激活蛋白的变化效应

目的：探讨压热解毒单方绿豆粉对哮喘肺小鼠组织中白三烯及5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白含量的影响。方法：实验于2002—10／2003—04在广东医学院呼吸疾病研究所完成。32只清洁级雄性昆明种纯白小鼠，随机分为4组：生理盐水对照组、卵蛋白哮喘模型组、地塞米松治疗组、绿豆粉治疗组，每组8只。参照文献[1]建立小鼠卵蛋白哮喘模型。除对照组小鼠予生理盐水处理外，其余各组小鼠于第1，7，14天给予鸡卵白蛋白抗原液0．5mL（含氢氧化铝凝胶2mg和鸡卵白蛋白15μg）腹腔注射，第21天始用1％鸡卵白蛋白雾化吸人来激发小鼠哮喘发作，2次／d，每次1h，连续3d。每次雾化前30min．生理盐水对照组和卵蛋白哮喘模型组给予生理盐水10mL／kg，地塞米松治疗组给予地塞米松2mg／kg，绿豆粉治疗组给予绿豆粉液10mL/kg，灌胃。肺组织匀浆中白三烯B4、白三烯C4含量检测应用ELISA方法；各组肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达应用免疫组化方法检测。结果：实验所用32只小鼠均进人结果分析。①小鼠肺组织中白三烯B。比较：生理盐水对照组明显低于卵蛋白哮喘模型组[（0．151&;#177;0．055，0．293&;#177;0．058）mg／L，（P〈0．01）]。②小鼠肺组织中白三烯C4比较：绿豆粉治疗组明显低于哮喘模型组[（2．091&;#177;0．273，2．482&;#177;0．278）mg／L，（P〈0．01）]。③小鼠肺组织中5-脂氧合酶的活性比较：免疫组化法检测结果显示绿豆粉组明显低于哮喘模型组[（12．3&;#177;4．9,25．0&;#177;6．6），（P〈0．01）]。④小鼠肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达：绿豆粉治疗组、地塞米松治疗组与生理盐水对照组比较无显著性变化（P〉0.05）。结论：白三烯B4、白三烯C4在肺组织中的高水平，5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白表达的增加在鸡卵白蛋白致敏小鼠的哮喘发病中起重要作用。单方绿豆可显著降低哮喘小鼠肺组织中自三烯C4含量，抑制哮喘小鼠肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达，从而表现出抗哮喘的活性。     

胆囊腺癌pAKT、VEGF、微血管和微淋巴生成的检测及其临床意义

目的研究胆囊腺癌组织中磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（pAKT）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达、微血管密度（MVD）和微淋巴管密度（MLD）及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测46例胆囊腺癌pAKT、VEGF、微血管和微淋巴管密度。结果胆囊腺癌pAKT和VEGF的阳性表达率分别为87.0%（40/46）和91.3%（42/46）。pAKT的阳性表达与临床分期和淋巴结转移显著相关,统计学有显著性差异（P〈0.05）。MVD与肿瘤生长方式和临床分期显著相关;MLD与肿瘤生长方式和淋巴结转移有非常显著差异（P〈0.01）。pAKT和VEGF阳性组的MVD明显高于其阴性组,Spearman相关分析表明pAKT和VEGF表达与MVD呈正相关。pAKT阳性组的MLD明显高于阴性组,Spearman相关分析揭示pAKT表达与MLD呈正相关,而VEGF阳性组的MLD与阴性组之间无显著性差异。结论 pAKT和VEGF与胆囊腺癌发生发展和转移密切相关,这提示阻断PI3K/AKT信号传导通路将对胆囊腺癌的治疗提供新的靶点。     

EB病毒miRNAs在鼻咽癌细胞株C666-1和CNE-2Z中的差异性表达分析

目的:探讨ebv-miRNA在低分化NPC细胞株C666-1(EBV+)和CNE-2Z(EBV表达水平随传代次数增加而逐渐降低)中的差异性表达进而分析其功能.方法:常规培养NPC细胞株C666-1和CNE-2Z,分别提取总RNA并进行质检;RT-PCR检测LMP-1和LMP-2A mRNA的表达以判断EBV的感染情况;miRNA芯片技术检测EBV miRNAs的表达并对其表达谱进行差异性分析;荧光定量RT-PCR进行验证;复习文献了解ebv-miRNA调控的靶基因以了解其功能.结果:从C666-1和CNE-2Z两株细胞抽提的总RNA纯度高,A260/A280>2.0,A260/A230>2.1,RNA完整性好.C666-1具有比CNE-2Z更高的LMP-1和LMP-2A mRNA表达.ebv-miRNA表达谱的差异分析表明39个ebv-miRNAs中19个在两株细胞显著差异性表达;荧光定量RT-PCR结果证实ebv-miR-BHRF1-1和ebv-miR-BART14*在C666-1中表达升高而ebv-miR-BART8*表达降低,与芯片结果趋势一致;复习文献,EBV miRNAs功能远不清楚,少数已知的靶基因涉及信号转导、转录调控、细胞凋亡、增殖、免疫反应和病毒DNA复制等方面.结论:ebv-miRNA在低分化NPC中具有差异性表达并广泛参与基因调控.不同NPC细胞中EBV miRNA表达差异预示着基于ebv-miRNA的NPC个性化治疗的可能性.     

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤转移及其机制的研究进展

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤的发生发展关系密切,本文概述PI3K、AKT的结构特征、PI3K/AKT信号转导通路的活化及其与恶性肿瘤转移的关系及机制。     

肺鳞癌及淋巴结转移灶中CD44V6和E—钙粘素的表达及意义

目的：探讨CD44V6和E－钙粘素（E-cd)在肺鳞癌及淋巴结转移灶中的表达及其预后意义,方法应用免疫组织化学S－P法检测20例正常肺组织、72例肺鳞癌原发灶及淋巴结转移灶中CD44V6和E-cd表达,结果CD44V6在正常肺组织、肺鳞癌原发灶及淋巴结转移灶中阳性表达率分别为15．00％（3／20）、66．67％（48／72）和87．50％（63／72）。三者间有非常显著性差异（P＜0．01）。而E-cd的异常表达率分别为0（0／20）51．39％（37／72）和68．065（49／72）,三者间有非显著性差异（P＜0．01）。CD44V6阳性及E-cd异常表达率同肺鳞癌体积大小无关（P＞0．05）,与临床病理分期、癌分化程度及预后显著相关（P＜0．05）。结论CD44V6和E-cd可反映肺鳞癌的生物学特性,是预测其侵袭转移潜能和预后有价值的指标。     

PI3K/Akt通路与肿瘤的化疗耐药关系研究

肿瘤细胞耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要因素,其产生的机制尚未完全清楚。研究发现,PI3K/Akt通路不仅与细胞的增殖、凋亡有关,而且在肿瘤的生长、对化疗的反应方面都扮演着重要角色。特异性抑制PI3K/Akt通路的活性可减少肿瘤细胞的化疗耐药性,通路抑制剂联合化疗可增强化疗效果,这提示了PI3K/Akt通路可作为肿瘤治疗的潜在靶点。     

颈部恶性肿瘤887例临床病理分析

目的探讨以淋巴结肿大为首发症状的颈部恶性肿瘤的临床病理特征。方法对1998年1月至2003年12月我院887例颈部恶性肿瘤患者的临床资料、组织学类型和转移癌的原发部位进行综合分析。结果颈部淋巴结转移癌以51～60岁年龄组最多见(182/837,21.74%),男性明显多于女性。原发部位以鼻咽、肺、甲状腺、胃和食管多见(591/671,88.08%)。组织学类型以鳞癌多见(407/671,60.66%),多发生于鼻咽、肺和食管(380/407,93.37%)。淋巴瘤以非霍奇金淋巴瘤为主(184/216,85.19%)。转移癌与淋巴瘤相比,在淋巴结的部位、大小、数量、质地、外观及病程、临床表现等方面均有差异。结论广东地区颈部淋巴结转移癌患者的原发部位主要来源于鼻咽。某些特异性免疫组化抗体及CT、MRI和超声技术对诊断淋巴瘤和确定转移癌的原发部位具有重要意义。     

意外电击致死16例尸检病理分析

目的 探讨电击致死的诊断依据.方法 收集2001年1月-2008年7月受理的16例意外电击致死法医尸检案例.采用大体观察和HE镜下观察.结果 16例意外电击致死尸检肉眼具典型电流斑者仅5例,光镜下典型电流斑11例.非典型电流斑形态多样化,以单纯性表皮剥脱和颜色改变多见.体内器官病理变化主要为心肌纤维排列紊乱、断裂较明显和部分案例心肌间质灶性出血和血管内皮细胞极性化改变.结论 光镜下皮肤电流损伤是诊断电击致死的主要依据;而心肌的病理改变具有一定的辅助诊断意义.     

HIF-1α过表达慢病毒载体的构建及对心肌细胞Notch配体Jagged1表达的影响

目的构建低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1 mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×10~8TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1 mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。