单克隆抗体技术进展及上市药物分析

自二十世纪八十年代杂交瘤技术建立以来,抗体制备技术取得了长足的发展。抗体是由B淋巴细胞分泌的一种免疫球蛋白,因其能与受体特异性结合而产生许多生物学活性,如经典阻断作用、中和活性、激活补体、通过Fc受体对靶细胞产生杀伤作用和调节机体免疫活性等,在临床治疗中广泛应用。抗体技术的发展经历了鼠源性单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源单克隆抗体的漫长历程。从鼠源性抗体到全人源抗体的过渡中,实现了多种生物技术的突破,如抗体库技术、人源化小鼠技术和B细胞克隆技术等。如今,抗体药物在整个药物市场中拥有举足轻重的地位。十年来(2011年1月～2021年11月),已有78种单克隆抗体药物被FDA批准上市使用,广泛分布于肿瘤领域、免疫性疾病领域、抗病原体感染领域、神经系统和代谢性疾病领域。文章就单克隆抗体技术进展和抗体药物上市情况进行综述,为新型抗体的制备和药物靶点的选择提供了思路。     

脑利钠肽对急性心肌梗死介入术后心力衰竭患者心功能及预后的影响

目的 观察重组脑利钠肽(新活素)对急性前壁心肌梗死急症介入术后心力衰竭患者的心功能恢复情况及预后的影响.方法 将急性前壁心肌梗死接受急症介入治疗后出现心力衰竭的患者随机分为脑利钠肽组和对照组,脑利钠肽组给予脑利钠肽静脉滴注治疗3 d,对照组给予硝酸甘油静脉滴注3 d,观察两组患者心肌酶峰值、室壁运动积分、NT-proBNP水平变化情况.治疗前及治疗后6 h测定血管紧张肽Ⅱ和醛固酮水平,观察脑利钠肽对血浆内分泌激素水平的影响.随诊12周,观察两组患者的预后.结果 两组患者基础临床情况和冠状动脉造影治疗情况比较差异均无统计学意义.脑利钠肽组心肌酶峰值明显低于对照组[CK:(1235.67±821.26)U/L vs.(1677.76±957.63)U/L,P<0.05;CK-MB:(118.94±75.61)U/L vs.(175.45±93.67)U/L,P<0.05],室壁运动积分优于对照组(1.17±0.11 vs. 1.30±0.15,P<0.05),术后随访NT-proBNP水平明显低于对照组(P<0.05).治疗后6 h,脑利钠肽组血管紧张肽Ⅱ和醛固酮水平明显低于治疗前及对照组(P<0.05).12周后脑利钠肽组主要心脏不良事件(MACE)发生率明显低于对照组(P<0.01).结论 脑利钠肽可以改善心肌灌注,减轻神经内分泌激活,减少梗死范围,改善心功能及预后.     

肝源性腹泻50例分析

腹泻为胃肠道诸疾的常见症状之一，但肝源性腹泻少为人知。鉴此，将本院１９９６年至１９９７年５０例肝源性腹泻作一报道。１临床资料１）一般资料：本组５０例均系住院患者，诊断均按１９９５年全国病毒性肝炎会议分型标准，其中急性黄疸型肝炎２５例，慢性肝炎１５例，...     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对正常参考血管重构的影响

目的 观察血管成形术后,病变近端正常参考血管重构的发生以及与病变部位血管重构的关系,并观察了粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对血管重构的影响.方法 健康新西兰大白兔28只随机分为GM-CSF组和单纯损伤组.GM-CSF组皮下注射GM-CSF10 μg·kg-1·d-1,单纯损伤组皮下注射同等量生理盐水.7 d后球囊扩张损伤髂动脉.分别于术前、术后4周耳缘静脉采血检测一氧化氮(NO)浓度;4周后提取损伤动脉标本,观察内膜增生情况并测定病理形态学参数.结果 术后4周GM-CSF组N0浓度(98±10)μmol/L高于单纯损伤组(83±12)μLmol/L.单纯损伤组球囊损伤处血管残余管腔面积(LA)小于GM-CSF组[(0.87±0.40)mm2 vs(1.34±0.52)mm2,P＜0.05],损伤处内膜+中膜面积(I+M)大于单纯损伤组[(2.62±0.48)mm2 vs(2.26±0.43)mm2,P＜0.05],两组损伤处外弹力膜环绕面积(EELA)差异无统计学意义[(3.48±0.80)min2 vs(3.60±0.91)mm2,P＞0.05].单纯损伤组参考血管LA小于GM-CSF组[(1.60±0.48)mm2 vs(1.99±0.54)mm2,P＜0.05],两组参考血管I+M无明显差异,LA与I+M之间不存在相关性,而参考血管EELA与LA及I+M之间有明显的相关性(r=0.91,P＜0.001;r=0.685,P＜0.001).两组参考血管LA、EELA与损伤处血管LA、EELA也明显相关(r=0.919,P＜0.001;r=0.909,P＜0.001).结论 血管重构不仅发生在病变血管,同时也发生在近端参考血管.GM-CSF可以促进受损内皮细胞修复,改善负性血管重构.     

成纤维生长因子(FGF) 23基因沉默对甲状旁腺激素(PTH)促成骨细胞分化作用的影响

 目的  研究内源性成纤维生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,应用小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术(RNAi)沉默成骨细胞FGF23表达,应用MTT法和PNPP法检测细胞增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)活性,应用real-time RT-PCR法检测其FGF23、ALP和骨钙素(osteocalcin,OCN)等基因mRNA水平,研究PTH对培养成骨细胞和FGF23基因沉默细胞的作用。结果  rhPTH1-34对培养成骨细胞增殖促进作用明显,分化促进作用弱。1×10-10~1×10-8 mol/L rhPTH1-34 作用3天,细胞增殖率增加31.6%~50.5% (P<0.05),而细胞比活性未见明显改变。同时其ALP和OCN转录水平轻度上调,分别较对照组增加35%(P<0.05)和16%(P>0.05)。rhPTH1-34上调成骨细胞FGF23 mRNA水平(4倍),该作用可被针对FGF23特异的shRNA转染所抑制。FGF23基因沉默后PTH促分化作用明显增强,其ALP和OCN mRNA水平分别较对照组增加1.8倍(P<0.05)和5.8倍(P<0.05),显示内源性FGF23对PTH促分化的干扰作用。结论  内源性FGF23可能参与PTH促分化作用的调节,FGF23上调可干扰PTH的促成骨细胞分化作用。     

雌激素水平对大豆苷原(DAI)促大鼠成骨细胞分化作用的影响

 目的  观察基础雌激素(estrogen)水平对大豆苷原(daizein,DAI)促成骨细胞分化作用的影响。方法  采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,通过培养液中添加17β-雌二醇改变培养微环境(包括空白对照)雌激素水平,应用MTT法和对硝基苯磷酸盐(p-nitropheny-phosate,PNPP)法检测细胞增殖率和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用real-time PCR法检测其雌激素受体α(ERa)、雌激素受体β(ERβ)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)γ的mRNA水平变化,研究雌激素基础水平变化对DAI促成骨细胞分化作用的影响。结果  培养环境中雌二醇水平升高致DAI的促分化作用减弱。其中100 nmol/L DAI组ALP比活性较对照组的增幅由雌激素补充前的23%分别降至8%(17β-雌二醇为100 pmol/L)和-11%(17β-雌二醇为1 000 pmol/L),显示基础雌激素水平对DAI促分化的拮抗作用。为避免培养液中血清雌激素的可能影响,进一步采用去激素血清培养(含2%去激素胎牛血清)。此时补充17β-雌二醇至100 pmol/L,DAI各剂量组细胞ALP比活性较对照组明显增加(16%~21%,P<0.05)。继续补充雌激素至1 000和10 000 pmol/L 时,其作用反而减弱。该结果显示,DAI促成骨细胞分化作用与雌激素基础水平有关,低雌激素状态(≤100 pmol/L)可增强其作用。为进一步探索其作用机制,我们初步观察了雌激素(100 pmol/L)和DAI(100 nmol/L)单独或联合作用下成骨细胞ERa、ERβ和PPARγ受体表达变化。结果显示,100 pmol/L 17β-雌二醇明显上调ERβ表达,并部分抵抗DAI下调ERβ的作用。结论  DAI的促成骨分化作用与基础雌激素水平有关,低雌激素(≤100 pmol/L)状态有利于DAI的促分化作用,而雌激素水平升高可减弱其促分化作用。     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

2504例新生儿听力筛查结果分析

目的 了解新生儿听力障碍的发病情况,以便早诊断、早干预.方法 应用快速脑干诱发电位听力筛查仪(AABR)对2 504例新生儿进行听力筛查初筛、复筛,对筛查2次未通过者,进行听力诱发电位检查(ABR)确诊,并比较不同分娩方式、胎龄、产妇年龄、性别及有无听力损伤高危因素者筛查的通过率.结果 2 504例新生儿听力初筛未通过196例(7.83%),复筛未通过10例(13.0%),确诊听力障碍9例(0.36%);高危组初筛、复筛通过率明显低于正常组(P＜0.05).结论 普及新生儿听力筛查,加强孕期保健,预防早产、新生儿窒息,及时治疗,是降低听力残疾发生率的重要措施.     

原发性气管腺样囊性癌

本文报告6例原发性气管腺样囊性癌,其中男1例,女5例,发病年龄29～61岁,平均37岁。肿瘤发生于气管中段4例,气管上、下端各1例。重点观察其病理形态,并对其临床诊断、治疗和预后等进行了讨论。