7株不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白的差异研究

目的通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异,筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法用PCR扩增并获得CORE基因,扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中,重组质粒用IPTG诱导表达,聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物,并经Western blot验证。结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中,SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异,其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达,以pTrc-CKS-CORE表达量高,表达产物经Western blot验证表达成功。结论成功构建7株不同CORE原核表达质粒,各融合质粒表达CORE存在较大差异,筛选出高表达CORE质粒,为下一步研究奠定基础。     

巨噬细胞移动抑制因子与支气管哮喘的关系

目的了解巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)与支气管哮喘的关系。方法应用ELISA法检测了67名支气管哮喘患者和40名健康对照自愿者血清MIF含量并进行比较,同时进行了支气管哮喘患者不同临床分期MIF含量的比较。结果支气管哮喘组血清MIF含量明显高于健康对照组(P0.05),而在不同临床分期中的含量差异不明显(P0.05)。结论MIF与支气管哮喘密切相关,与支气管哮喘临床分期无明显关系。     

浙江地区幽门螺杆菌cagA、vacA、iceA基因型别分析

据初步统计 ,全世界超过 5 0 %的人群有幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)感染。其中西方国家的感染率为 2 5 %～ 5 0 % ,发展中国家有的高达 90 % 〔1〕。然而 ,只有少数感染者发展成消化性溃疡或胃癌 ,其中的原因尚不清楚。有研究表明 ,Ｈｐ的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因可能与疾病的发生有关。有关ｃａｇＡ、ｖａｃＡ与疾病的关系我国也有报道〔2〕。本文研究了浙江地区Ｈｐ菌株的ｃａｇＡ、ｖａｃＡ、ｉｃｅＡ基因型别并分析了与疾病的关系。材料和方法Ｈｐ菌株的来源 :Ｈｐ菌株分离自 60例胃、十二指肠疾…     

B7-CD28/CTLA- 4协同刺激通路与支气管哮喘

Ｔ细胞的激活需要两个不可或缺的刺激信号[1] :即由Ｔ细胞受体 (ＴＣＲ)与抗原提呈细胞 (ＡＰＣ)提呈的ＭＨＣ 抗原多肽复合物相结合所产生的第一信号 (识别信号 ) ,和由ＡＰＣ表面协同刺激分子与Ｔ细胞表面对应受体分子相结合所产生的第二信号 (协同刺激信号 /激活信号 )。识别信号有抗原特异性、受ＭＨＣ的限制 ,而激活信号无抗原特异性、不受ＭＨＣ的限制。Ｔ细胞只有同时识别这两个刺激信号 ,才能活化、增殖并发挥免疫效应。相反 ,若缺乏识别信号 ,则为无效刺激 ;若缺乏激活信号 ,则Ｔ细胞不能充分活化 ,甚至可诱导免疫无反应性 (ａｎｅ…     

荧光定量 PCR与半定量PCR检测HBV DNA的对比分析

目的：对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBV DNA的载量，为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。 方法： 取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测，结果作统计学分析。 结果: 两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异（χ2 =1.75，P>0.05）。 结论: 临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量 PCR法检测血清HBV DNA的载量。     

三氧化二砷对哮喘小鼠肺内树突状细胞作用的研究

目的:研究哮喘小鼠肺内树突状细胞(DC)分布、募集的特点及三氧化二砷(As_2O_3)对其的影响。方法:将 BALB/c 小鼠30只随机分为3组,即对照组、模型组和 As_2O_3组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道 DC;计算机图像分析技术对 DC 进行定量检测。结果:对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个非淋巴样树突状细胞(NLDC)-145~+DC 网络,NLDC-145~+DC 密度从大气道到小气道分别为(500±50)个/mm~2到(60±10)个/mm~2上皮面积(P<0.05);模型组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与对照组相似,但密度较对照组显著增加(P<0.01);As_2O_3组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与模型组相似,但密度显著下降(P<0.01)。结论:树突状细胞在整个肺组织构成了一个完整的 NLDC-145~+DC网络;下调肺内 DC 密度,而不影响其肺内分布,可能是 As_2O_3治疗哮喘的一个重要机制。     

胃镜消毒后乙型肝炎病毒、幽门螺杆菌的检测分析

随着胃镜在临床诊断和治疗上的广泛应用，胃镜污染而引起的医源性感染已引起人们的重视。其中，乙型肝炎病毒(HBV)和幽门螺杆菌(Hp)是两种最常见的感染病原体。为此，笔者对我院常规消毒后的胃镜进行了HBV DNA，HBsAg和Hp DNA的检测，以了解消毒后胃镜HBV和Hp的污染情况。     

葛根素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症和TSLP介导的Th2免疫作用的研究

目的：研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法：将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性哮喘小鼠模型。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测4组小鼠血清总 IgE和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中Th2细胞因子(白介素-4、白介素-13)水平。Western blot观察肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的蛋白表达。结果：与正常组比较,葛根素组、布地奈德组、 哮喘组气道阻力、气道炎症,血清总IgE,BALF中白介素-4、白介素-13以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P ＜ 0.05)。与哮喘组比较,葛根素组、布地奈德组各项观测指标均明显降低(P ＜ 0.05)。葛根素组和布地奈德组气道PAS阳性上皮细胞数/支气管较哮喘组下降(P ＜ 0.05)。结论：葛根素抑制慢性哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性和Th2免疫,这可能与抑制TSLP的表达有关。     

柯萨奇病毒A组16型病毒株VP1基因序列测定及进化分析研究

目的　通过检测分析2015年杭州市柯萨奇病毒A组16型（CA16）病毒株VP1区核苷酸序列,掌握杭州市CA16的流行情况及种系进化关系,为手足口病的预防和治疗提供支持,同时为CA16疫苗株的选择提供依据。方法　收集2015年杭州市儿童医院256例临床资料齐全且临床诊断为手足口病患儿的粪便或咽拭子,利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增CA16病毒株VP1区核苷酸序列（约1 020 bp）,测序后利用DNASTAR和Primer Premier 5.0进行序列比对分析,并用Mega 3.1软件建立检测样本VP1区序列与GenBank上CA16参考毒株VP1核苷酸序列的系统发育树。结果　共分离到80株CA16阳性病毒。序列比对分析结果显示,CA16分离株的核苷酸同源性为90.8%～100.0%,氨基酸同源性为99.5%～100.0%。系统发育树分析结果显示,17株CA16全部属于B1基因亚型,并且同时存在B1a和B1b两个进化分支,其中4株属于B1a亚型,13株属于B1b亚型。结论　2015年杭州市CA16病毒株属于B1基因亚型,与国内外某些地区手足口病病原学及分子进化研究结果一致,有望成为疫苗候选株作进一步研究。