高尔基体驻膜糖蛋白73的研究进展及其与肝癌等疾病的联系

高尔基体驻膜糖蛋白73( GP73)是定位于高尔基体的Ⅱ型跨膜蛋白,在肝癌组织中高表达,并分泌入血.研究表明,GP73作为血清标志物检测肝癌的特异性和灵敏度均优于AFP.另外,GP73在前列腺肿瘤、肾脏肿瘤、肺癌、食道肿瘤、精原细胞瘤等疾病中的表达也有增高,因此,GP73也可能成为这些疾病辅助诊断的新型指标.但是,目前GP73的生理功能和表达调控机制尚不清楚.文中将从理化性质、细胞内分布、表达调节、与疾病相关性和临床应用等方面对GP73的迄今研究状况作一较为全面的综述.     

呼吸导引操在稳定期慢性阻塞性肺疾病康复中的价值

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种死亡率呈上升趋势的慢性疾病。尽管抗炎、联合和靶向治疗取得了重要进展,但COPD药物治疗仍是治标不治本。肺康复是COPD管理过程的核心,运动训练则是肺康复的基石。传统导引术具有防病和治病的双重功效。现有研究表明,呼吸导引操可使稳定期COPD患者临床获益。本文将对COPD治疗现状、呼吸导引操在COPD患者康复中的价值作一综述。     

IL-4、IL-13单核苷酸多态性与中国东南方汉族人群哮喘关系的研究

目的探讨IL-4、IL-13单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与中国东南方汉族人群支气管哮喘(简称哮喘)发病危险性和哮喘相关表型的关系。方法挑选位于IL-4起动子区SNPs rs2243250(-589T/C),IL-13第四外显子区的非同义突变SNPs rs20541(+2044C/T)和启动子区SNPs rs1800925(-1112C>T)。连续性招募哮喘患者318例,正常对照352例。采用多重PCR结合标签阵列单碱基延伸技术进行基因分型。通过病例——对照研究分析这些位点与哮喘及哮喘表型的关系。结果 IL-4 rs2243250、IL-13 rs20541、rs1800925的等位基因及基因型分布频率在哮喘组与对照组差异无统计学意义(P>0.05),该3个位点共生成8种主要单倍型,在哮喘组和对照组中的分布亦无统计学差异,该3个位点SNPs与哮喘发病危险度无相关性。该3个位点SNPs与哮喘患者的外周血嗜酸粒细胞、肺功能、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆总IgE、哮喘严重度分级均无相关性。结论 IL-4、IL-13 SNPs与哮喘发病危险性和哮喘相关表型无相关性。     

致耐受性树突状细胞和调节性T细胞在支气管哮喘中的作用

支气管哮喘是树突状细胞(dendritic cells,DC)介导的以辅助性T细胞2(T-helper type2,Th2)优势免疫为特征的气道炎症性疾病,DC在变应原触发哮喘的始动环节中发挥中心作用.调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)是一种特殊的T细胞,能够通过多种机制影响DC和效应性T细胞,从而发挥免疫抑制作用.DC不仅对入侵病原体产生免疫应答,而且对无害物质维持免疫耐受.这些具有致耐受性的DC通过多种不同的路径诱导Treg,上调Treg数目和(或)功能,从而抑制免疫应答.应用致耐受性DC作为靶点,有望为哮喘免疫治疗开辟新的途径.     

鸭乙型肝炎病毒聚合酶结合模拟肽真核表达载体的构建

目的：构建与鸭乙型肝炎病毒聚合酶(DHBV P)特异性结合的模拟肽的重组真核表达质粒，为进一步将重组质粒转染原代培养鸭肝细胞研究模拟肽的作用奠定基础。方法：以噬菌体肽库中筛选出来的能特异性结合DHBV P的模拟肽基因为模板，扩增模拟肽基因片段，并应用基因重组技术构建其真核表达载体pEGFP-N1-模拟肽基因(pEGFP-N1-M)。结果：经鉴定，目的基因片段以正确的方向插入载体pEGFP-N1中，序列正确，对码正确。结论：成功构建了重组真核表达质粒pEGFP-N1-M。     

EV71、CA16及通用型肠道病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研发

目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RNA抽提效果与QIAGEN公司QIAamp Viral RNAmini Kit抽提效果相当,但具有更低的试剂成本.优化引物探针浓度分别为0.2μmol/L的上下游引物浓度、0.06 μmol/L的通用探针浓度、0.08 μmol/L的EV71分型探针浓度和0.08μmol/L的CA16分型探针浓度.产品具有较好的稳定性和良好的准确度、精密度,CA16、EV71和肠道病毒通用型对引物的扩增效率分别是106％、101％和105％,线性检测范围是109拷贝/μl ～ 102拷贝/μl.结论 采用四重荧光定量PCR技术开发的能同时检测EV71、CA16、其他肠道病毒和内标的手足口病诊断试剂盒具有良好的准确性、稳定性、精密度和扩增效率等,具有很好的临床应用价值.     

幽门螺杆菌全长cagA基因和霍乱毒素B亚单位基因的克隆与表达

目的：构建表达幽门螺杆菌（Hp)细胞毒素相关蛋白（CagA)及粘膜免疫佐剂量霍乱毒素B亚单位（CTB）的重组质粒，并在大肠杆菌中表达获得基因重组蛋白。方法：用PCR方法从幽门螺杆菌扩增CagA基因片段，从霍乱弧菌扩增CTB基因片段，将它们转入原核载体质粒pGEMEX-1，在大肠杆菌DH5α中克隆，并在JM109DE3中表达。结果：重组质粒pEGEMEX-CTB的全长序列经分析与GenBank公布的序列相符；各表达蛋白经SDS－PAGE分析，相对分子量与文献相符；重组蛋白经Westem blot检测有较强的抗原性。结论：基因重组菌表达的融合蛋白有可能作为有效抗原用于幽门螺杆菌疫苗的研制及检测试剂盒的制备。     

靶向Th17细胞免疫治疗中重度哮喘的作用

支气管哮喘（简称哮喘）是多种炎症细胞和炎性介质参与的慢性气道炎症性疾病。Thl/Th2免疫反应失衡是哮喘主要的发病机制,而嗜酸粒细胞性气道炎症和气道高反应性为哮喘的显著临床特征。Th17细胞通过活化和募集中性粒细胞,促进气道炎症发生发展,尤其与中重度哮喘密切相关。Th17细胞为中重度哮喘提供了潜在的治疗靶点。深入研究Th17细胞分化调控机制,有望为治疗中性粒细胞性哮喘带来新的愿景。     

呼吸训练器在社区稳定期慢性阻塞性肺疾病患者呼吸康复中的应用及疗效评价

目的:研究应用呼吸训练器进行呼吸康复训练对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺功能、血气分析、运动能力、临床症状及生活质量的影响.方法:将80例COPD患者随机分为对照组和干预组各40例.除常规药物治疗外,对照组给予常规呼吸训练(缩唇腹式呼吸);干预组给予呼吸训练器进行呼吸训练.对比2组干预前后肺功能、血气分析、运...     

编码N端截短的IκBα突变体重组腺病毒的构建与鉴定

目的：通过去除N端丝氨酸32/36磷酸化位点，获得人胎盘组织IκBα突变体（IκBαM）基因，构建其复制缺陷型重组腺病毒（AdIκBαM），并进行体外表达和活性检测。方法:PCR定点克隆IκBαM基因（203-1 003 bp），亚克隆至pShuttle和pGEM-T，进行PCR、双酶切、DNA测序和同源性分析。将重组质粒pShuttle-IκBαM中含CMV启动子、IκBαM cDNA和PolyA信号的表达单元定向插入Ad5腺病毒载体，构建成重组腺病毒AdIκBαM，再经脂质体介导共转染293细胞进行包装。Western blotting检测AdIκBαM在293细胞中蛋白表达情况，电泳迁移率实验观察AdIκBαM抑制佛波酯诱导的ECV304细胞核因子κB（NF-κB）激活的作用。结果:成功克隆长801 bp的新型IκBαM基因，与GenBank中登陆的IκBα基因（接受号M69043）相应核苷酸序列一致。所制备的AdIκBαM滴度为4.0×1012 pfu/L。AdIκBαM介导IκBαM基因在293细胞中表达，并以剂量依赖性方式显著抑制佛波酯诱导的ECV304细胞NF-κB活化 。结论：AdIκBαM有效介导IκBαM基因表达并特异性抑制NF-κB活性，有望应用于哮喘的基因治疗。