表达鼠精子Cyritestin蛋白的减毒沙门氏菌疫苗株的构建及其鉴定

目的 构建表达鼠精子eyritestin蛋白的可口服减毒沙让氏菌活疫苗株。方法 应用质粒TAZ83／13，将之进行双酶切获得含有成熟cyritestin蛋白cDNA序列的酶切片段。将其插入表达载体yA3149中，构建重组质粒pCFL。将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株X4632和X4550中，以获得重组菌株X4632（pCFL)和X4550（pCFL)。结果 该两种无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下，可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。X4550(pCFL)在体内可较稳定地害居于Peyer‘s结，肠系膜淋巴结和脾脏；X4632（pCFL)可较稳定地定居于Peyer‘s结。二者均可表达被抗cyritestin单抗（mAb)识别的重组cyritestin蛋白。口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。结论 X4632（pCFL),X4550（pCFL)疫苗株的构建，为研究以cyritestin为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础。     

超声鉴别诊断乳腺黏液癌与纤维腺瘤的价值

目的 探讨乳腺黏液癌(mucinous breast carcinoma,MBC)的超声特征,并与纤维腺瘤(breast fibroadenoma,FA)进行对比分析。方法 回顾性分析2015年3月～2021年7月南京医科大学第一附属医院142例MBC患者和142例FA患者的超声及临床资料。结果 MBC患者发病年龄较大,肿块浅层向脂肪层凸出,直径偏大,多呈低回声或等回声,内部回声不均匀,边缘光整,形态不规则,不伴钙化,峰值流速偏高,阻力指数≤0.7,后方回声增强,淋巴结转移少见。Luminal A型是MBC主要病理分子分型,CK5/6阴性、ki-67阳性居多。结论 MBC在超声上大多无恶性特征,结合患者年龄、形态、后方回声增强等资料,有助于MBC与FA的鉴别诊断。     

甲状腺海绵状血管瘤1例

患者,女,40岁,因左颈前部肿物1周于2005年3月入院,患者于1周前发现左颈前有一鸡蛋大小肿物,伴干咳、无心悸、多汗。既往有乳腺纤维瘤及卵巢囊肿切除史。入院体查,左颈前可触及局限性隆起大小约5 cm×3 cm,质软、边界清、表面光滑、无压痛、随吞咽上下活动。B超示:左甲状腺内见一椭圆形肿物、大小5·3 cm×3·0 cm、边界清、内部呈低回声、周围末见声晕,CD-FI:肿块周边见环形血流信号内部见少量血流信号,右颈甲状腺末见异常、颈区淋巴结不大。入院诊断:左甲状腺肿物性质待查(甲状腺腺瘤)。入院常规检查血常规、心、肺、肝、肾无异常,甲功5…     

短时受精对体外受精结果的影响

目的 了解短时受精对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)结局的影响.方法 选择在本生殖医学中心接受常规IVF治疗的248个周期,通过一定条件限制将其分为短时受精组和过夜受精组,将248个常规IVF周期中的卵子进行配对资料(同一IVF周期同时进行短时受精和过夜受精者,共20个周期)和非配对资料(1个IVF周期只采用1种方式受精者,过夜受精组177个周期,短时受精组51个周期)研究,比较短时受精组和过夜受精组的正常受精(2PN)率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率.结果 无论配对还是非配对资料,短时受精组的正常受精(2PN)率、多精受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率等与过夜受精组比较均无统计学差异(P>0.05);在非配对资料中,短时受精组的移植优胚率(77.33±36.69)%明显高于过夜受精组(64.04±41.85)%(P<0.05),而在配对资料中,用于移植的优质胚胎率短时受精组和过夜受精组无统计学差异(P>0.05).结论 短时受精是一种安全、有效的受精方式,但不能改善胚胎质量和妊娠结局.     

FscB蛋白在鼠精子发生过程中的动态表达和迁移研究

目的:探讨一种新的睾丸特异性蛋白FSCB(Fibrous sheath CABYR binding protein)在精子内的精细动态表达和迁移过程,并研究该蛋白在正常和畸形精子中的形态定位特征.方法:应用过碘酸-希夫氏染色获得鼠睾丸曲精小管上皮中精子发生的时相性背景特征,然后应用间接免疫荧光方法对FSCB蛋白在睾丸和精子内的动态表达和迁移过程进行观察.结果:FSCB最初表达于长精细胞的第11步(时相Ⅺ),呈胞浆内弥漫性染色;随之从第11步(时相Ⅺ)至第15步(时相Ⅵ)表达逐渐加强;在精子形成的第15步(时相Ⅳ至时相Ⅵ)FscB开始向精子鞭毛迁移,最终于第16步(时相Ⅷ)FSCB蛋白整体局限定位于睾丸精子鞭毛上,胞浆内荧光染色消失.进一步研究显示该蛋自在正常精子中定位于鞭毛主段、精子头部、鞭毛颈段、中段和末段均无表达.在畸形精子中,该蛋白表达存在3种异常改变:①鞭毛内无阳性表达;②表达节段前移并缩短,提示这类精子缺乏中段;③呈现间断分布的串珠状改变.结论:FSCB是纤维鞘的重要组成蛋白,在精子纤维鞘形成的后期装配于其表面,可能是纤维鞘生物合成的最后装配步骤.该蛋白在畸形精子中存在明显表达异常,其表达异常与精子运动功能之间的关系有待深入研究.     

FSHR胞外区基因片段的原核表达及多克隆抗体的制备

目的 构建人卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)胞外区的原核表达载体,并用纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备抗血清.方法 采用RT-PCR克隆人FSHR胞外区,将其克降到原核表达载体pET32a(+),并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达,所获得的包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出1 047 bp目的 基因片段,测序证实克隆的基因序列与GenBank中的FSHR序列相符.工程菌pET32 a(+)/FSHR胞外区经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为58 000,与预期的一致.其表达形式为不溶性包涵体,此包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,纯化的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.该蛋白免疫小鼠制备抗血清,抗体效价为1:12 800,Western blot检测证实该抗体能与目的 蛋白发生特异性结合.结论 获得了人FSHR胞外区融合蛋白及特异性多克隆抗体,为进一步研究FSHR蛋白的功能奠定了基础.     

乳腺X线立体穿刺钢丝定位活检术的临床应用

目的:探讨乳腺X线立体穿刺钢丝定位活检术在不能触及乳腺病灶中的临床应用价值。方法:对58例钼靶X片上有可疑病灶而无临床体征的患者,通过X线立体定位穿刺,放入钢丝标记,指导外科切除活检,组织病理学检查明确诊断。结果:58例不能触及乳腺病灶一次定位切检成功,经病理检查证实恶性病变20例,良性病变38例。结论:乳腺X线立体穿刺钢丝定位活检术对不能触及乳腺病灶的定位定性诊断有重要价值,是诊断无体征早期乳腺癌的理想诊断技术。     

Tα146-162-iMDC对实验性自身免疫性重症肌无力中B细胞活化的影响

目的 通过测定B淋巴细胞激活因子（BLyS）及TNF家族B细胞活化因子受体（BAFF-R）在实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）小鼠模型脾脏及淋巴结中的表达,探讨不成熟树突状细胞（iMDC）负载免疫优势肽段Tα146-162对MG中B细胞活化的影响。方法 诱导小鼠骨髓细胞分化为iMDC并以其负载Tα146-162。将C57BL/6J小鼠随机分为发病组（A）、干预组（B）、正常对照组（C）,每30d以电鳗来源的乙酰胆碱受体（TAChR）免疫A组和B组,共3次,每次免疫后3d以Tα146-162-iMDC皮下注射B组。第90天终止实验,用RT-PCR法检测脾脏BLyS、BAFF-R mRNA的表达。结果 （1）A组模型成功率75%,平均临床评分1.67分,B组分别为25%和0.33分,差异有统计学意义（P〈0.01）。（2）脾脏中BLyS mRNA的表达水平A组较C组明显上调（P〈0.01）,B组亦高于C组（P〈0.05）,但相对A组降低（P〈0.01）。（3）脾脏中BAFF-R mRNA的表达水平A组及B组相对C组下调（P〈0.05）,且A组显著低于B组（P〈0.05）。结论 应用Tα146-162-iMDC干预能降低EAMG的发病率及发病程度,其机制可能与BLyS/BAFF-R调控的B细胞活化密切相关。     

子宫内膜厚度与母婴围产结局关系

目的回顾性分析陆军军医大学附属第一医院生殖医学中心1 139例妊娠女性移植前子宫内膜厚度[注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)当天或进行黄体酮转化当天]与胚胎移植术后母婴围产结局的关系。方法收集整理2011年1月至2014年7月该中心采用助孕技术成功妊娠并顺利生产的妊娠女性1 139例,根据注射hCG当天或进行黄体酮转化当天的子宫内膜厚度分为4组,A组(8mm,150例)、B组(8～10mm,489例)、C组(10～14mm,452例)和D组(≥14mm,48例);根据助孕妊娠女性是否合并有子宫病变分为合并子宫病变组和未合并子宫病变组。结果 1 139例妊娠女性中共有239例合并有子宫病变,两组间子宫内膜厚度比较,差异无统计学意义(P0.05),两组间母婴围产期并发症发生率比较,差异无统计学意义(P0.05);A至D组妊娠女性合并有子宫病变的概率分别是22.0%、18.2%、22.3%和33.3%,D组明显高于B组(P0.05);A、B两组发生胎膜早破(PROM)、子痫、产后出血以及母亲入ICU的概率较C、D两组高(P0.05)。结论子宫内膜厚度较薄者(10mm),其母婴围产期并发症可能较高;注射hCG或黄体酮转化当天子宫内膜厚度可作为预测母婴围产结局的指标。