红外热像扫描技术在组织工程皮肤移植修复中的应用

目的　探索红外热像扫描技术在组织工程皮肤移植修复中应用的可能性。方法　在组织工程皮肤对大面积皮肤缺损动物 (裸鼠 )进行移植修复的不同时间 ,应用红外热像扫描仪对移植修复区进行动态观察。结果　在移植术后第 7天 ,热像图上移植区与正常皮肤温差明显 (>0 7℃ ) ;在移植的第 14天 ,移植区与周围正常皮肤的温差变小(<0 3℃ ) ;在移植的第 2 1天 ,移植区与正常皮肤无明显区别 ,温度几乎没有差别 (<0 1℃ )。预示着移植区的血运、代谢情况与正常皮肤差别不大 ,移植区有毛细血管长入、营养供应充足。结论　在应用组织工程皮肤进行皮肤缺损的移植修复时 ,可以应用红外热像扫描技术对移植修复的效果进行动态观察 ,监测毛细血管的生成情况、血运状况以及移植的组织工程皮肤与宿主皮肤的融合情况。     

应用改性聚乳酸构建复层组织工程皮肤的可行性研究

目的：以改性聚乳酸为细胞外基质网架,探索利用其构建复层组织工程皮肤的可行性。方法：取出生24 h以内的Wistar大鼠背部皮肤,以Dispase-trypsin双酶消化分离培养表皮角质形成细胞;以Ⅰ型胶原酶消化分离培养真皮成纤维细胞。采用盐析法制备机械性能得到部分改进的聚乳酸多孔泡沫支架,向支架接种真皮成纤维细胞（密度为3.0×10⁵cell•mL^-1）和表皮角质形成细胞（密度为5.0×10⁵cell•mL^-1）,体外培养1周,构建复层组织工程皮肤,并取培养的皮肤进行切片检测。结果：复层组织工程皮肤在结构上与正常皮肤相似,具有真皮、表皮双层结构。改性聚乳酸网架上有双层细胞生长,生长的细胞与网架接触,并且在其表面形成较为明显而连续的细胞层。结论：双醛淀粉作为良好的增柔剂在改善聚乳酸网架机械性能的同时,也使其具有良好的细胞相容性,不影响细胞的生长增殖和代谢,可以进一步用作组织工程皮肤的支架材料。     

高原环境对大鼠血压的影响

目的 探讨高原缺氧对大鼠血压的影响.方法 将30只Wistar大鼠从低海拔运输至海拔3658米的高原,随机分为高原缺氧组和吸氧组,用无创尾动脉测量法测量进入高原后1个月内血压.结果 缺氧组进入高原后第1天(136.15±4.58 vs 130.25±5.49,P＜0.05)、第7天(139.44±3.75 vs 132...     

应用转BMP7基因软骨细胞构建组织工程软骨

目的:利用转BMP7基因软骨细胞构建组织工程软骨,测定BMP7基因在构建的组织工程软骨中的表达,探讨与未转BMP7基因软骨细胞构建的组织工程软骨的生物学差异。方法:实验于2004-06/2005-01在哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所完成。应用转染重组pcDNA3.1-BMP7真核表达载体质粒并用G418筛选14d的阳性克隆软骨细胞,以胶原-纤维蛋白凝胶为支架,构建转BMP7基因组织工程软骨。以未转BMP7基因组织工程软骨作为对照,软骨细胞的接种密度为5×109L-1。用甲苯胺蓝、苏木精-伊红染色对组织工程软骨培养物组织学分析;原位杂交法检测Ⅱ型胶原mRNA的表达;透射电镜观察组织工程软骨培养物的超微结构;原位杂交和免疫组化法测定体外培养物BMP7mRNA和蛋白的表达。结果:①BMP7基因转染软骨细胞情况:G418筛选7d时大量细胞死亡,约30%的细胞存活,且贴壁生长。G418连续筛选14,28d均有阳性克隆细胞生成,贴壁生长率100%,存活的阳性克隆细胞为转染成功的软骨细胞。②组织工程软骨培养物大体形态及显微镜观察结果:构建的组织工程软骨培养物呈浅粉红色胶冻样圆盘状,透明,体积约为16mm×16mm×3mm。显微镜下只能观察到呈圆形的浅层细胞。③组织工程软骨培养物组织学分析结果:组织工程软骨培养物体外培养7,14,28d,细胞周围有丰富的细胞外基质,转BMP7基因组织工程软骨培养物细胞基质较多,体外培养14d软骨细胞合成和分泌最为活跃。④组织工程软骨培养物Ⅱ型胶原表达mRNA原位杂交检测结果:软骨细胞核周围呈棕黄色,有mRNA表达。⑤不同培养时间下组织工程软骨培养物DNA含量的测定情况:DNA含量随着培养时间的推移逐渐增加,21d时达到高峰,转BMP7基因比未转染BMP7基因的组织工程软骨培养物DNA含量高(P<0.05)。⑥不同培养时间下组织工程软骨培养物糖胺多糖含量的测定情况:转BMP7基因组织工程软骨培养物体外培养14d时糖胺多糖含量最高,且各时间点糖胺多糖含量均高于未转BMP7基因组织软骨培养物(P<0.05)。⑦组织工程软骨培养物的超微结构观察:与未转BMP7基因组织工程软骨培养物比较,体外培养7d,转BMP7基因组软骨培养物内软骨细胞细胞器发达,内质网、线粒体和高尔基体相对较丰富,细胞基质合成较旺盛;体外培养21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物中软骨细胞粗面内质网仍较发达,线粒体和高尔基体相对减少,细胞基质合成能力减弱。⑧BMP7mRNA表达原位杂交测定结果:体外培养7,14,21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物软骨细胞中均有BMP7mRNA表达,而未转BMP7基因组织工程软骨培养物未见软骨细胞表达BMP7mRNA。⑨BMP7蛋白表达免疫组化测定结果:体外培养7,14,21d,转BMP7基因组织工程软骨培养物软骨细胞中均有BMP7蛋白表达,而未转BMP7基因组织工程软骨培养物未见软骨细胞表达BMP7蛋白。结论:成功构建转BMP7基因组织工程软骨,其生物学特性优于未转BMP7基因软骨细胞构建的组织工程软骨,作为移植物修复软骨组织缺损具有一定的可行性和优越性。     

壳多糖基质网架复层组织工程皮肤的动物移植实验

背景治疗由烧伤或疾病等引起的大面积全层皮肤缺失最为常见的和有效的方法就是皮肤移植修复,但目前面临的最大障碍是皮肤供体不足.以自体皮肤细胞作为种子细胞构建的组织工程皮肤是解决这一矛盾的最理想途径.目的探讨组织工程皮肤动物移植实验的效果.设计随机对照实验.单位一所大学再生医学科学研究所及皮肤科.材料实验于1998-09/2001-07在吉林大学细胞工程研究室完成.选用新生Wistar大鼠20只;8周龄雄性裸鼠24只.方法应用以壳多糖为基质网架构建的组织工程化复层人工皮肤,对裸鼠大面积(直径20mm)全层皮肤缺损模型进行移植修复.24只8周龄裸鼠分为组织工程皮肤移植(artificial skin,AS)组、壳多糖膜覆盖物(chitosan,CH)组及对照组(control group,CG),术后进行大体观察,并在3,7,14和21 d应用组织学、红外热像扫描分析等手段对修复组织进行动态监测.主要观察指标①实验动物大体观察情况.②修复区血供情况的红外热像观察.③组织学观察.结果AS组在移植第3天,移植的组织工程皮肤与自体皮肤能够很好地融合,有少量毛细血管长入移植物,皮肤移植物颜色与自体皮肤颜色接近;随着时间的延长,移植物中毛细血管的数量逐渐增多,表皮层清晰可见基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层,角化现象加强,有角化物脱落;真皮层细胞数量增多,网架逐渐降解,分泌的细胞外基质成份增多;第14天,创面基本愈合;修复区皮肤颜色与正常皮肤颜色非常接近,瘢痕很小,无需进行二次植皮.至移植的第14天,CH组结痂未完全脱落,创面未愈合,颜色较AS组深.对照组的结痂脱落,创面大而深,颜色深红.结论以壳多糖为基质网架构建的组织工程皮肤具有良好的组织相容性,可应用于皮肤缺损的移植修复.     

牛脑垂体提取物是角朊细胞无血清培养的重要添加成分

目的：探讨牛脑垂体提取物对维持角朊细胞生长的重要性。方法：采用无血清培养技术,以添加各种生物因子的ＭＣＤＢ１５３培养基为培养液,在体外培养成人包皮角朊细胞。结果：在本实验条件下,牛脑垂体提取物是维持皮肤表皮角朊细胞增殖不可缺少的添加成分。结论：牛脑垂体提取物是角朊细胞无血清培养的重要添加成分。     

大骨节病病区主食糖中VE及Se含量的研究

为进一步探明缺Ｓｅ缺ＶＥ因素对大骨节病的作用，本文对陕西、吉林不同大骨节病区主食粮小麦和玉米中ＶＥ（ａ－Ｔｏｃｏ，ｒ－Ｔｏｃｏ），Ｓｅ含进行了测定分析。首次证明，大骨节病区主食小麦和玉米的Ｓｅ低的同时，ａ－Ｔｏｃｏ亦显著低于其非病区对照。提示：病区居民从主食中摄取的Ｓｅ和ａ－Ｔｏｃｏ的最都低于非病区人群对照，其体内在缺Ｓｅ的同时，很可能伴随着ＶＥ的缺乏或处于ＶＥ的相对缺乏状态。     

菜籽油对饲克山病病区粮大鼠肝肾T_45’－脱单碘酶活力的影响

菜籽油对饲克山病病区粮大鼠肝肾Ｔ＿４５’－脱单碘酶活力的影响姜熙岁，周余来，刘忠英，李恩民，安汝国，王凡（白求恩医科大学地方病研究所长春１３００２１）关键词莱籽油，Ｌ４５′脱单碘酶，克山病ＥｆｆｅｃｔｏｆＲａｐｅｓｅｅｄＯｉｌｏｎＴｈｖｒｏｘｉｎｅＴ...     

脂质体介导人端粒酶逆转录酶基因构建永生化软骨细胞方法的建立及评价

目的：探索将人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因转入兔软骨细胞以获取大量种子细胞的方法和技术。方法：分离培养原代兔软骨细胞,以pcDNA3.1/Zeo(+)-hTERT载体进行基因转染,对照组则为空载体pcDNA3.1/Zeo(+),筛选并挑选出阳性克隆后扩增,以逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测转染hTERT基因后的软骨细胞hTERT mRNA表达;甲苯胺蓝染色判断转染hTERT基因后的软骨细胞是否具有软骨细胞的生物学特性;流式细胞术检测细胞周期及核型;裸鼠致瘤实验观察成瘤情况。结果:RT-PCR检测RNA水平上hTERT在细胞中的表达情况,hTERT转入兔软骨细胞后细胞形态未发生变化,长满单层后仍然呈现出多角形,与正常体外培养的软骨细胞形态基本一致。甲苯胺蓝染色后可见多糖染成蓝紫色,呈现较小蓝紫色颗粒,蛋白多糖等基质分布均匀,即转染hTERT基因后的软骨细胞具有合成和分泌软骨相关基质的功能。细胞周期测定转染hTERT的兔软骨细胞的增殖能力明显上升,细胞分裂基本以整数二倍体方式进行,保持了核型的基本稳定。裸鼠接种不致瘤。结论：转染hTERT的软骨细胞表型未发生转化,具有作为种子细胞和研究正常软骨细胞的生理、生化工具细胞的可行性。     

以壳多糖为基质网架构建大鼠组织工程皮肤

目的 探索以壳多糖为基质网架构建组织工程皮肤的可能性。方法 将体外传代培养的大鼠表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞，分别接种在预先制备的多孔三维壳多糖基质网架的两侧，经液—气界面培养，构建出复层人工皮肤。分别用光镜和电镜观测该复层人工皮肤的组织形态及超微结构的动态变化。结果 光镜下可见，本实验构建的组织工程皮肤由表皮和真皮构成。随着培养时间的推移，表皮逐渐成熟、分化，真皮逐渐形成，基质网架逐渐降解、被吸收，并由真皮细胞所分泌的细胞外基质所取代。结论 以壳多糖为基质网架构建的组织工程皮肤，在组织结构和代谢功能上与天然皮肤极为相似。