人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建

[目的]构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C,tyrosine protein kinase C,TrkC)基因重组的腺病毒表达载体.[方法]从人脑组织mRNA中扩增TrkC基因全长cDNA,定向克隆于穿梭质粒pShuttle中,获得一个带有CMV启动子的表达盒.再将表达盒与腺病毒骨架DNA(Adeno-X viral DNA)体外连接,形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC).用pAd-TrkC转染人胚肾293细胞后包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒(Adeno-TrkC).[结果]TrkC基因RT-PCR扩增产物为2 478 bp.Adeno-TrkC经PCR鉴定为正确重组子.[结论]应用体外连接法已构建了人TrkC重组腺病毒表达载体,这为进一步应用NT-3进行基因治疗中枢神经损伤奠定了基础.     

正交设计法优选半夏厚朴泡腾片制备工艺

目的:优化半夏厚朴泡腾片的制备工艺条件。方法:采用正交试验方法,以pH值、崩解时限、口感及硬度作为评价指标对泡腾片中柠檬酸与碳酸氢钠的配比、聚乙二醇6000的用量、甜蜜素的用量进行优化;并用HPLC法测定泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚的含量。结果:确定了泡腾片的制备工艺,即柠檬酸∶碳酸氢钠=0.65∶1,聚乙二醇6000用量为8%,甜蜜素用量为1.0%。结论:该工艺稳定、可靠。     

携带SARS-CoV刺突蛋白N端片段重组腺病毒的构建

[目的]构建携带SARS冠状病毒刺突蛋白N端基因片段的重组腺病毒.[方法]从SARS病毒cDNA扩增刺突蛋白N端基因片段(-45～1469nt,截短的S1区,SN),插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,通过体外连接法构建重组腺病毒Ad-SN.用Ad-SN感染Vero-E6细胞,通过RT-PCR和Western blot法检测SN的表达.[结果]克隆的SN基因序列与文献报道基本一致;Ad-SN基因组结构与预期一致.在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录和分泌型SN蛋白的表达.[结论]体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;重组腺病毒Ad-SN能正确表达分泌型SN蛋白,可用于诱导抗SARS免疫的动物实验研究.     

内皮细胞流动培养模型的建立

目的 促进培养内皮细胞（ＥＣ）分化,增强ＥＣ对流体剪切力的抵抗。方法 利用改进的流室装置,通过精密蠕动泵提供剪切力,同时提供静态培养所需的其它条件,建立体外的ＥＣ流动培养模型,按流动培养增加剪切力的方式分为Ａ组、Ｂ组和Ｃ组,并筛选出最佳的流动培养模式。结果 ＥＣ在流动培养下生长良好,血管ＥＣ被拉长,其长轴方向与注场方向趋于一致。不同流动培养方式作用下,ＥＣ能适应剪切力递增式（Ａ组）和阶跃式（Ｂ组）     

"8"字缝合技术在指(趾)甲撕脱伤中的应用

指端损伤造成的甲床及指甲撕脱较为常见,通常表现为甲板溢出与甲床分离伴或不伴有甲床及指骨的损伤,传统的处理方法大多是拔掉指甲,修补缝合裂伤的甲床后用无菌油纱包扎,但经此处理后新生长的指(趾)甲往往留有后遗症,严重影响了指(趾)甲的美观及愈后的痛苦.目前临床有多种方法修复损伤的指甲,效果各异[1-7].2006至2009年,我院对指(趾)端损伤的甲板重新利用,分别采用不同的"8"字缝合方法原位缝合固定,获得了满意的疗效.     

横“8”字法原位缝合固定甲板修复指(趾)甲撕脱伤

指端损伤造成的甲床及指甲撕脱较为常见,传统的处理方法大多是拔掉指甲,修补缝合裂伤的甲床后用无菌油纱包扎。经此处理新生长的指（趾）甲往往留有后遗症,如甲体粗糙、有纵脊、甲体与甲床附着不完全,严重影响了指（趾）甲的美观及愈后。目前有很多方法修复损伤的指甲,但效果欠佳,我院于2006年至2008年采用横“8”字法将指甲原位缝合固定技术用于伴有指甲撕脱的指端损伤患者中,疗效满意。这项技术简单、安全,初学者容易掌握,预后佳,报告如下。     

逆行桡侧小鱼际皮瓣修复手指软组织缺损

Objective To investigate the therapeutic effect of reverse radial hypothenar flap for finger soft tissue defect. Methods From Mar. 2006 to Mar. 2010, 13 cases (14fingers) with finger soft tissue defects were treated with reverse radial hypothenar flaps pedicled with ulnar palmar digital artery of little finger. The defects were 1.9 cm× 1. 5cm -4. 0 cm× 2. 0 cm in size. The flap size ranged from 1.5cm× 2.0 cm to 4. 0 cm × 2. 0 cm. Results All the flaps survived completely with primary healing both in donor and recipient area. 12 cases(13 fingers)were followed up for 1-3 years. The flaps color was similar to the unaffected fingers. Cicatricial contracture happened in one case due to contracture of palmar fascia.The two-point discrimination distance on flap was 3.2-5. 3mm. The active and passive movement of finger joints was evaluated as excellent in 12 fingers, good in one finger. There was no complaint about the feeling at the donor site. Two months after operation, all patients could go back to work. Conclusions The reverse radial hypothenar flap is very suitable for finger soft tissue defect with less morbidity to donor site.     

TNF—a对内皮细胞白介素—8基因表达的影响

IL-8作为一种趋化细胞因子在炎症反应中具有重要作用,其在内皮细胞内的表达受多种细胞因子的调节。本文用TNF-a孵育培养的人脐静脉内皮细胞不同时间后,用RT-PCR法检测内皮细胞内IL-8mRNA的表达,并用免疫细胞化学染色法检测内皮细胞内NF-kB的激活。结果发现：（1）未用TNF-a孵育的内皮细胞IL-8表达量很少,TNF-a孵育1小时后IL-8表达明显增加,3h进一步增加;6h IL-8表达降低,9h进一步降低至基础水平;（2）未用TND-a孵育的内皮细胞核NF-kB p65免疫细胞化学染色呈阴性,NF-a孵育1,3h后NF-kB p55免疫细胞化学染色呈阳性,6h时后呈弱阳性,9h后呈阴性。提示：TNF-a可诱导内皮细胞表达IL-8并可激活内皮细胞内NF-kB,二者的时相过程基本一致。作者认为TNF-a诱导IL-8在内皮细胞内表达可能与转录因子NF-kB的激活有关。     

脉冲对成骨细胞和内皮细胞增殖的影响

微力超声波脉冲治疗仪（LowEnergyPulsedUltrasound,LEPUS）在临床上用于治疗骨折,并有促进骨折治愈的作用,但是其作用机理并不清楚。在骨折治愈的过程中,新的血管形成起着重要作用,近年的研究证实：多种生长因相g诱导新血管形成,还发现成骨细胞和血管内皮细胞的相互作用对骨形成有影响。据此,本研究采用成骨细胞与血管内皮细胞共存培养系,观察LEPUS作用下对其增殖的影响。结果发现;分别使用1,25－（OH）2D3（VD3）和LEPUS均使培养系中血A＼w,rtt‘ffe生长因子（PDG）和碱性成纤维生长因子（bFGF）含量增加。并用V…     

施万细胞和MK801对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的　观察单独或联合应用施万细胞和MK80 1对大鼠脊髓半横切后受损伤的背核神经元存活及其表达NOS的影响。　方法　应用细胞培养、免疫组织化学、核荧光标记、荧光逆行追踪和酶组织化学等技术。　结果　T11脊髓半横切后 15d ,生理盐水对照组的L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数量比未损伤侧减少 ,其中胞体面积 >4 0 0 μm2 的神经元明显减少 ,而且部分存活的神经元NOS活性增高 ,背核面积及神经元胞体面积缩小。施万细胞组、MK80 1组、施万细胞与MK80 1联合组的L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数量则比术后同期对照大鼠增多 ,胞体面积 >4 0 0 μm2 神经元的存活数量显著增多。施万细胞与MK80 1联合组作用明显。MK80 1组存活的神经元中NOS活性明显减弱 ,且能阻止背核及其神经元胞体的面积的缩小。　结论　施万细胞与MK80 1均可促进轴突被切断的背核神经元的存活 ,两者有协同作用 ,且MK80 1还能防止背核及其神经元胞体缩小