A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究

目的通过分析A族链球菌(GAS)感染巨噬细胞后TLR2及TLR4的活化情况,以此来研究GAS感染后产生炎症反应的信号通路,为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。方法 GAS及热灭活GAS以感染复数(MOI)为100∶1感染小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞后1,2,4,6 h,提取总RNA采用real-time PCR技术检测TLR2/4的表达情况;同时GAS及热灭活的GAS注射C57小鼠腹腔,24 h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白,利用Western blot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进行分析。结果巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后1 h活化不明显,但作用2 h后TLR2及TLR4表达明显升高(P<0.05),4 h时达到高峰,6 h后开始降低。热灭活GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与GAS感染比较未见到统计学差异(P>0.05),但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异(P<0.05)。结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2及TLR4受体,其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活,TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。     

预防老年患者全髋关节置换术后早期脱位的护理

<正>自2006-01～2010-12笔者所在科收治全髋关节置换术后老年患者早期脱位9例。现将脱位原因及护理对策总结如下。1临床资料本组9例。男5例,女4例;年龄62～88岁,平均75岁。术前诊断股骨颈骨折5例,股骨头坏死3例,髋关节退行性     

老年2型糖尿病患者糖化血红蛋白与超敏C反应蛋白及血脂的关系

目的探讨老年2型糖尿病患者糖化血红蛋白（HbA1c）与超敏C反应蛋白（hs-CRP）及血脂之间的关系。方法选取本院2009年2月至2011年2月68例老年2型糖尿病患者,按HbA1c水平分为正常组（24例）和升高组（44例）及健康体检无糖尿病者26例为对照组,测定HbA1c、hs-CRP及总胆固醇（Tch）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）并进行分析。结果 HbA1c正常组和HbA1c升高组的hs-CRP明显高于正常对照组（P均〈0.05）;与HbA1c正常组比较,HbA1c升高组hs-CRP升高更明显（P〈0.05）;HbA1c升高组的TG明显高于HbA1c正常组及正常对照组（P均〈0.05）。结论检测老年2型糖尿病患者的HbA1c可反映hs-CRP和TG的水平,有利于糖尿病并发症的早期发现和预防。     

婴幼儿轮状病毒VP7基因cDNA文库构建

[目的]分离与培养婴幼儿轮状病毒,并克隆婴幼儿轮状病毒外壳蛋白VP7基因,导入pMD18-T载体,成功构建VP7基因cDNA文库,为构建轮状病毒基因工程疫苗奠定基础. [方法]提取婴幼儿轮状病毒总RNA,通过RT-PCR扩增,获得目的基因片段VP7,进行分离纯化与回收,最后纯化的VP7基因与pMD18-T载体进行连接,进行质粒抽提与鉴定. [结果]提取的婴幼儿轮状病毒总RNA比较完整,28S、18S,5S条带清晰可见,成功扩增VP7基固,连接pMD18-T载体,转化感受态菌(DH5α),通过蓝白斑筛选得到DNA阳性重组子(载体+VP7基因片段).[结论]通过对婴幼儿轮状病毒培养、VP7基因扩增、基因片段回收、连接、转化、鉴定等一系列技术,初步确定婴幼儿轮状病毒外过壳蛋白VP7基因已导入pMD18-T载体,成功构建VP7基因cDNA文库,为进一步研制轮状病毒基因工程疫苗奠定了基础.     

铜绿假单胞菌β-内酰胺耐药基因与蛋白表达的研究

目的 通过分析β内酰胺耐药铜绿假单胞菌耐药基因与蛋白质表达情况,以此来研究铜绿假单胞菌发生耐药的机制.方法 利用PCR技术扩增β内酰胺耐药铜绿假单胞菌耐药基因,通过双向电泳和质谱技术,分析β内酰胺耐药铜绿假单胞菌蛋白质表达的差异,并对差异显著的蛋白斑点进行分析.结果 β内酰胺耐药铜绿假单胞菌可检测到VIM基因和TEM基因,但膜孔蛋白基因OPRD2则缺失,同时经过蛋白组学和指纹图谱分析,可见膜孔蛋白oprD2与vim和tem蛋白的点差异显著,与基因检测结果相一致.结论 β内酰胺耐药铜绿假单胞菌中出现耐药基因VIM和TEM,同时高表达vim及tem蛋白;但OPRD2基因缺失,同时膜孔蛋白D2低表达,为进一步研究铜绿假单胞菌的耐药机制奠定基础.     

动静脉桥接手指离体组织块再植一例

动静脉桥接手指离体组织块再植一例曾剑文吴景华唐道峰患者男，３６岁，１９９６年５月因右示指被机器齿轮轧伤致右示指中节带指间关节缺如，伤后半小时送我院。查体见右示指近节指间关节及皮肤软组织缺损约３．５ｃｍ×０．５ｃｍ×１．０ｃｍ，仅尺侧约１／５皮肤软组织...     

石膏综合征43例防治体会

石膏综合征（castsyndrome）最由于石膏固定后，腹部受凉及潮湿引起的胃肠功能紊乱，或由于胸段、胸腰段脊柱过伸位五青或其它器具固定，肠系膜上动脉及十二指肠横部受压，引起的机械性肠梗阻等一系列临床症状。此综合征多见于行髋穗形石膏或石膏背心固定后的患者，在脊柱侧弯行矫形手术后也可发生，我｛fJ3所医院共观察治疗43例，均收到良好效果，现报告如下。至临床资料1．1一般情况本组男19例，女24例，年龄16～54岁，其中行髋穗形石膏32例，行石膏背心11例。1．2典型病例女性，35岁，系有髋关节结核，在硬膜外麻醉下行髋关节病灶清除术…     

Toll样受体2对口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Toll样受体2(TLR2)在人舌鳞癌细胞Tca8113的表达情况及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法通过流式细胞术检测人舌癌Tca8113细胞中TLR2的表达情况;实验细胞分为实验组(加入TLR2阻断剂)及对照组(加入IgG抗体),实验组及对照组细胞培养24 h及48 h后,应用MTT及Western blot方法检测其增殖及凋亡情况,采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验。结果流式细胞检测Tca8113细胞可见TLR2的表达;实验组经TLR2阻断24 h、48 h后其增殖较之对照组明显增加(P<0.05),但24 h与48 h比较,其增殖的变化不明显(P>0.05);同时经Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加(P<0.05)。结论人舌鳞癌细胞Tca8113细胞表达TLR2受体并对肿瘤细胞呈现明显的抑制作用。     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中miR-194-5p和MagT1表达水平检测及其意义

目的：检测慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-194-5p和镁离子（Mg²⁺）转运蛋白1（MagT1）表达水平,阐明其可能的临床意义。方法：收集40例健康体检者（健康对照组）、40例HBV携带者（HBV携带组）、40例轻中度慢性乙型肝炎（轻中度CHB组）和40例重度慢性乙型肝炎（重度CHB组）患者的临床资料。采集各组研究对象外周血并利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMCs,采用RT-PCR法检测各组研究对象PBMCs中miR-194-5p及MagT1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象PBMCs中MagT1蛋白表达水平,检测各组研究对象外周血和PBMCs中Mg⁺水平,流式细胞术检测各组研究对象PBMCs中CD8+T淋巴细胞表面分子程序性死亡受体1（PD-1）和自然杀伤细胞受体2群D分子（NKG2D）表达水平。在293T细胞中分别转染miR-194-5p mimic质粒（miR-194-5p mimic组）和miR-NC质粒（miR-NC组）,应用双荧光素酶报告基因实验检测2组293T细胞中荧光素酶活性。结果：与健康对照组比较,HBV携带组、轻中度CHB组和重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均明显降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。与HBV携带组和轻中度CHB组比较,重度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平均降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T细胞表面分子PD-1表达水平降低（P<0.05）。与HBV携带组比较,轻中度CHB组患者PBMCs中MagT1 mRNA和蛋白表达水平、Mg²⁺水平及CD8+T淋巴细胞表面分子NKG2D表达水平降低（P<0.05）,miR-194-5p mRNA及CD8+T淋巴细胞表面分子PD-1表达水平升高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验,MagT1是miR-194-5p靶基因。结论：miR-194-5p可能通过靶向下调MagT1表达,引起MagT1介导的Mg²⁺内流障碍,造成CD8+T淋巴细胞免疫活性降低,导致乙型肝炎慢性发展。