hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立

目的建立hPARP-1过表达的HaCaT细胞株,观察过表达该基因后所引起的生物学效应。方法常规提取人皮肤角质细胞HaCaT的总RNA,RT-PCR扩增PARP-1全长cDNA基因片段,构建含PARP-1全长cDNA基因片段的真核表达载体pEGFP-PARP-1,通过BglⅡ、xhoⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pEGFP-N2和pEGFP-PARP-1分别转染人皮肤角质细胞HaCaT,通过G418加压筛选,建立稳定高表达hPARP-1的HaCaT-PARP-1细胞株,并采用Realtime Q-PCR和Western blotting检测其mRNA和蛋白的表达水平。结果 RT-PCR扩增产物经BglⅡ、xhoⅠ双酶切后,与pEGFP-N2连接构建的重组体经酶切和测序,结果与GeneBank报道序列一致。Realtime Q-PCR及Western blotting结果显示,转染pEGFP-PARP-1质粒的细胞其PARP-1在mRNA及蛋白的表达水平均显著高于对照组。结论 PARP-1高表达细胞株成功建立。     

围生期接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠甲状腺功能的影响

目的研究围生期母体接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠甲状腺功能的影响。方法受孕母鼠在受孕第7日起至哺乳期结束每天分别给予磺胺二甲嘧啶0、50、100和200mg/kg,HE染色观察20日龄子代大鼠甲状腺的组织病理学变化,并用免疫组织化学染色观察甲状腺内核增殖抗原的表达。结果各染毒剂量组子代大鼠甲状腺滤泡细胞出现不同程度的增生表现,核增殖抗原表达阳性细胞数显著高于对照组(P0.05)。结论磺胺二甲嘧啶可通过母体干扰子代大鼠甲状腺功能。     

三聚氰胺对大鼠肾组织原癌基因表达水平影响

目的探讨三聚氰胺染毒对大鼠肾组织c-myc,c-fos和N-ras基因mRNA表达水平的影响。方法用三聚氰胺对SD大鼠进行亚急性经口染毒,设1个对照组和3个实验组,每天对动物采用经口灌胃染毒1次,染毒时间28d,试验结束时取大鼠肾组织进行荧光定量PCR检测c-myc,c-fos和N-ras基因mRNA表达水平。结果雄性大鼠三聚氰胺染毒后c-myc、c-fos、N-ras mRNA表达水平分别为1.72～3.39,2.34～4.03,2.92～12.08,与对照组比较明显增强(P0.05,或P0.01);雌性大鼠三聚氰胺染毒后c-myc、c-fos、N-ras mRNA表达水平分别为1.56～2.93,2.03～3.52,2.65～10.87,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05,或P0.01)。结论三聚氰胺亚急性染毒引起大鼠肾组织部分癌基因表达水平升高。     

CYP1A2基因沉默及其对三氯乙烯毒性影响

目的 构建细胞色素氧化酶1A2(CYP1A2)基因沉默载体,转染L02人正常肝细胞(简称“L02细胞”),建立CYP1A2沉默细胞株并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响.方法 设计合成短发卡RNA(shRNA),连接到pLKO.1-puro质粒中构建CYP1 A2 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞.筛选CYP1A2沉默细胞株,采用荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法鉴定.分别采用浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 mmol/L的TCE(设为相应的染毒剂量组)对L02细胞和CYP1A2沉默细胞染毒12h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组(即0.00 mmoL/L染毒剂量组),观察凋亡基因[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9]和癌基因(c-fos、c-myc、K-ras、p53)等基因表达的变化.结果 测序证明插入pLKO.1-puro载体的CYP1A2基因干扰序列与设计的shRNA 序列一致.CYP1A2沉默细胞的CYP1A2mRNA和CYP1A2蛋白相对表达水平分别较L02细胞下降75.9％和82.4％(P＜0.01).TCE染毒后,0.25 ～4.00 mmol/L 4个染毒剂量组CYP1A2沉默细胞Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞(P＜0.01);部分0.25 ～4.00 mmol/L染毒剂量组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和c-fos、c-myc k-ras、p53相对表达水平均低于相应染毒剂量组的L02细胞(P＜0.05或P＜0.01).结论 CYP1A2沉默降低TCE对L02细胞凋亡基因和癌基因的活化作用.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠卵巢病理和超微结构的影响

目的： 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠卵巢病理和超微结构的影响,评价DEHP对雌性大鼠的生殖毒性作用。方法：SPF级5周龄雌性SD大鼠40只,随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)和DEHP高剂量组(1 500 mg/kg),每组10只,每天灌胃1次,每周5次,连续染毒6周。染毒结束后称量大鼠体质量及卵巢质量,计算卵巢脏器系数;光镜下观察大鼠卵巢病理改变;电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构的变化。结果：各染毒组大鼠体质量与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),高剂量组卵巢质量和脏器系数较对照组明显增加(P<0.01);普通光学显微镜检查发现DEHP处理后卵巢组织卵泡结构受损,电镜观察发现DEHP处理后颗粒细胞线粒体肿胀、线粒体嵴减少、胞浆空泡化、核染色质完全凝聚、出现凋亡小体、细胞变性坏死。结论：DEHP对大鼠卵巢毒性明显,影响卵泡发育,引起颗粒细胞凋亡。     

内分泌干扰物与人类健康

早在 1936年 ,Dodds等就发现了羟基联苯化合物具有雌激素活性。 4 0年代 4 ,4′-二羟基二苯烷烃的雌激素活性得到进一步证实。 2 0世纪 80年代 ,人们发现了多种野生动物生殖发育异常 (如日本东西郊多摩川鱼 /贝同时具有精巢和卵巢 ,英国南部泥鳅同具雌雄两套生殖系统 ,美国佛罗里达州出现鳄鱼雌性化、生殖紊乱、种群数量减少等 )。 1995年 ,美国明尼苏达州中学生发现多种畸形青蛙 (3、5、6条腿及独眼 )并将照片公布于网上 ,引起震惊 ,继后在该州三分之二的地区都发现类似的情况。经调查分析认为环境化学性污染物是引起上述生殖发育异常的重…     

pIRES2-EGFP-DAZ3质粒构建及金黄地鼠2-细胞胚中人DAZ基因的复制与表达

背景与目的：人Yq11.2上AZF区 (内含DAZ基因家族) 的缺失是多数男性不育的病因。本研究旨在探讨DAZ3基因导入精子的可能性以及导入基因在2-细胞胚中的功能。材料与方法：构建pIRES2-EGFP-DAZ3质粒,经鉴定无误后将其导入金黄地鼠精子。将携带DAZ3基因的精子与金黄地鼠卵母细胞进行体外受精。用FISH、PCR、RT-PCR技术分别检测DAZ3基因在精子头部、雄原核上的整合以及在2-细胞胚中的复制与表达。结果：构建的pIRES2-EGFP-DAZ3质粒经酶切、PCR和绿色荧光蛋白表达鉴定构建成功。采用FISH在精子头部、单细胞胚雄原核和2-细胞胚两个间期核上观察到阳性杂交信号。采用RT-PCR在2-细胞胚样本中观察到DAZ3 cDNA的特异条带。结论：外源性DAZ3基因能被导入精子基因组。携带DAZ3基因的精子可与卵母细胞完成正常的受精过程。导入的DAZ3基因在早期胚胎细胞中能够随细胞分裂自我复制并表达其功能。本研究结果为DAZ基因缺失所致男性不育的治疗提供了新的线索。     

乙醇对胚胎发育与卵黄囊超微结构的影响

为研究发育敏感期暴露于乙醇不同时间对胚胎发育和胚胎卵黄囊超微结构的影响 .以体外全胚胎培养和电镜技术研究 0 .2g·L- 1乙醇不同时间作用时对胚胎发育影响及胚胎卵黄囊超微结构改变 .结果表明发育异常与乙醇作用存在时间 效应关系 .0 .2g·L- 18h对胚胎发育和形态分化无明显影响 ,随时间延长除胚胎头长 ,体长 ,卵黄囊直径 ,蛋白质和DNA含量等主要发育指标进一步受抑制外 ,胚胎畸形 ,死亡率明显升高 .卵黄囊超微结构变化程度与染毒时间和胚胎发育状况相一致 ,乙醇可导致卵黄囊细胞内微绒毛和溶酶体数量减少 ,线粒体等部分细胞器内膜肿胀 .上述结果提示卵黄囊结构损伤和破坏在乙醇所致的发育异常中起重要作用     

早期复位减压治疗颈椎关节突交锁脱位

目的探讨早期复位减压治疗颈椎关节突交锁脱位的治疗效果。方法颈椎关节突交锁脱位伴截瘫24例,颅骨牵引复位成功19例,复位失败5例。24例均进行早期手术减压治疗,受伤至手术的平均时间为70h。复位成功的19例施行前路减压、植骨内固定;复位失败的5例先行后路切开复位,然后一期前路减压、植骨内固定。结果全部患者均骨性愈合,无并发症发生,除全瘫者神经功能无恢复外,不全瘫者均有不同程度的恢复。结论颈椎关节突交锁脱位患者施行早期复位减压手术治疗可获得满意的疗效。     

老年股骨颈骨折全髋关节置换术的疗效分析

随着社会人口的老年化,有不少股骨颈骨折需施行人工髋关节置换以缓解患髋疼痛,重建髋关节功能.自1997～2003年对36例老年股骨颈骨折患者施行人工全髋关节置换术,疗效满意.现分析如下.