双酚A与苯并[α]芘联合作用对三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应

[目的]观察双酚A(BPA)与苯并[α]芘(BaP)联合作用对三种乳腺上皮细胞DNA损伤的影响. [方法]采用对DNA双链断裂标志pH2AX免疫荧光检测的方法,观察环境相关剂量水平(10-9,10-7 mol/L)BPA、10-9 mol/L17-β-雌二醇(雌激素对照)及其与10-6 mol/L BaP联合作用对人乳腺上皮细胞(HMEC)、人永生化乳腺上皮细胞MCF-10A(CRL-10317)和人乳腺上皮肿瘤细胞MCF-7三种乳腺上皮细胞的DNA损伤效应(以二甲基亚砜作为溶剂对照),并应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测三种细胞雌激素受体α和雌激素受体β的基因ESR1、ESR2mRNA水平的相对表达量.[结果] BPA对三种类型乳腺上皮细胞pH2AX阳性率均无明显影响.BaP可明显增加HMEC和MCF-7两种乳腺上皮细胞pH2AX阳性率:单独染毒时两种细胞pH2AX阳性率分别由(34.7±2.2)％和(3.1±0.3)％增至(63.6±1.2)％和(13.3±0.4)％;与10-7 mol/LBPA、10-9 mol/L 17-β-雌二醇分别联合作用可使MCF-7的pH2AX阳性率增至(15.1±0.2)％、(17.5±1.0)％,与单独染毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).三种细胞内ESR1、ESR2基因表达有差异,其中ESRI基因表达差异明显,在MCF-7中的表达水平最高,为HMEC的1 080倍、MCF-10A的5222倍. [结论]BPA与BaP联合作用与BaP单独作用相比,可引起MCF-7的DNA双链断裂损伤加剧,该作用可能与雌激素受体表达水平相关.     

木尘提取液诱发体外培养BALBA/c-3T3细胞微核和多核

为探讨木尘的诱变性,选择硬木和软木各一种,分别为榉木和桦木,制备成木尘水提取液和有机提取液,进行BALB/c-3T3细胞微核和多核诱导试验.结果显示榉木尘和桦木尘两种提取液均存在细胞毒性,并可引起BALB/c-3T3细胞微核和多核细胞率的明显升高,剂量反应关系成立.说明榉木尘和桦木尘两种提取液均具有诱变性.     

三聚氰胺对大鼠肾组织原癌基因表达水平影响

目的探讨三聚氰胺染毒对大鼠肾组织c-myc,c-fos和N-ras基因mRNA表达水平的影响。方法用三聚氰胺对SD大鼠进行亚急性经口染毒,设1个对照组和3个实验组,每天对动物采用经口灌胃染毒1次,染毒时间28d,试验结束时取大鼠肾组织进行荧光定量PCR检测c-myc,c-fos和N-ras基因mRNA表达水平。结果雄性大鼠三聚氰胺染毒后c-myc、c-fos、N-ras mRNA表达水平分别为1.72～3.39,2.34～4.03,2.92～12.08,与对照组比较明显增强(P<0.05,或P<0.01);雌性大鼠三聚氰胺染毒后c-myc、c-fos、N-ras mRNA表达水平分别为1.56～2.93,2.03～3.52,2.65～10.87,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,或P<0.01)。结论三聚氰胺亚急性染毒引起大鼠肾组织部分癌基因表达水平升高。     

氟他胺对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响

目的研究抗雄激素物质氟他胺（Flu）对胚胎期SD大鼠睾丸发育整体基因表达水平的影响。方法对F0亲代母鼠在孕12～17d时每日皮下注射Flu（6．25mg／kg）,于胚胎期20d解剖孕鼠,取出实验组与对照组雄性胎鼠睾丸,提取mRNA,分别用cy5和cy3探针逆转录标记,与Rat 12KcDNA表达谱芯片杂交,荧光扫描分析;同时迅速取出雄性仔鼠右侧睾丸,做免疫组化检测;另将出生后第2d的雄性子代断颈取血清,用睾酮试剂盒测定激素水平。结果芯片结果显示实验组差异表达基因共31条,其中下调基因14条,已知功能基因9条;上调基因17条,已知功能基因7条;一共16条差异表达基因与睾丸组织功能及发育密切相关;免疫组化结果显示合成睾酮两种关键酶蛋白表达降低;且检测睾酮激素水平下降。结论所有证据表明F0亲代母鼠孕期染毒氟他胺能够影响胚胎期雄性SD大鼠的生殖发育,导致出生后雄性子代性分化和性发育异常。     

铅对大鼠不同脑区IEG表达的影响

为了研究即刻早期基因（ＩＥＧ）在铅的神经毒性机制中的作用,本实验应用ＦＯＳ和ＪＵＮ蛋白免疫组织化学方法对腹腔注射染铅１３ｍｇ／ｋｇ及１３０ｍｇ／ｋｇ的大鼠不同脑区ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达水平进行了观察。图像分析及统计检验结果表明,急性染铅２小时后,大鼠脑组织皮层、海马ＣＡ３区及小脑的ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达的阳性面积比［Ａａ（％）］、平均灰度或阳性细胞个数等参数与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,即染铅组ＩＥＧ表达高于对照组。这一结果提示第三信使ＩＥＧ作为转录调控因子可能参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。这对深入阐明铅神经毒性的分子机制提供了一定的实验依据。     

尿道下裂与环境污染的关系-Poisson回归模型与GM(1,N)模型结合分析

目的：分析我国尿道下裂与环境污染的关系。方法：利用已收集的全国31个省市1988～1992年和1996～2000年的男性尿道下裂监测资料以及1987～1992年和1995～2000年的环境因素监测资料，同时采用收集的各省地理面积资料，建立多元Poisson回归模型和GM(1，N)模型，对1988～2000年尿道下裂的发生与1987～2000年环境监测数据的相关性进行分析。结果：与尿道下裂相关的主要环境污染因素为单位面积废水排放量x1(OR=1．352，P=0．006)和单位面积农药使用量x2(OR=1．378，P=0．001)；对尿道下裂发生率建立的GM(1，N)模型为m(t 1)=(5．8215—0．00068X1-0．1226x2)e^-1.4602t 0．00068x1 0．1226x2。结论：废水排放和农药使用是我国尿道下裂发生的环境危险因素。     

hPARP-1高表达HaCaT细胞株的建立

目的建立hPARP-1过表达的HaCaT细胞株,观察过表达该基因后所引起的生物学效应。方法常规提取人皮肤角质细胞HaCaT的总RNA,RT-PCR扩增PARP-1全长cDNA基因片段,构建含PARP-1全长cDNA基因片段的真核表达载体pEGFP-PARP-1,通过BglⅡ、xhoⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pEGFP-N2和pEGFP-PARP-1分别转染人皮肤角质细胞HaCaT,通过G418加压筛选,建立稳定高表达hPARP-1的HaCaT-PARP-1细胞株,并采用Realtime Q-PCR和Western blotting检测其mRNA和蛋白的表达水平。结果 RT-PCR扩增产物经BglⅡ、xhoⅠ双酶切后,与pEGFP-N2连接构建的重组体经酶切和测序,结果与GeneBank报道序列一致。Realtime Q-PCR及Western blotting结果显示,转染pEGFP-PARP-1质粒的细胞其PARP-1在mRNA及蛋白的表达水平均显著高于对照组。结论 PARP-1高表达细胞株成功建立。     

氟致大鼠胚胎发育毒性及其机理的体外实验研究

为探讨氟的发育毒性及机理 ,孕 9 5d大鼠胚胎于体外培养系统中给予不同剂量的氟化钠 ,培养48h后 ,观察胚胎生长发育和器官形态分化状况 ;应用DTNB直接法测定胚胎组织谷胱甘肽 (GSH)含量 ;以 1,6二苯己三烯为荧光探剂 ,用荧光偏振技术测定卵黄囊细胞膜脂质流动性。结果显示当培养液中 ,氟浓度为10 μg ml时 ,胚胎生长发育和分化明显被抑制 ;同时 ,畸形胚胎发生率明显升高 ,主要有前后神经管闭合不全 ,脑发育不良和体翻转不全等 (P <0 0 5 ) ;氟浓度为 10 μg ml时 ,胚胎组织GSH活性和卵黄囊细胞膜脂质流动性也显著降低 (P <0 0 5 )。上述效应均呈现出一定的剂量 -效应 (反应 )关系。提示氟有潜在的致畸性和胚胎毒性 ,胚胎组织GSH活性和卵黄囊细胞膜流动性降低可能在氟致胚胎发育毒性中起重要作用     

玉米赤霉烯酮对MCF-7和T47D细胞凋亡的抑制作用

玉米赤霉烯酮(ZEA)是一种霉菌毒素，在奶制品及霉变谷类食物中含量较高。据报道，ZEA在结构上与内源性雌激素有相似之处，通过与雌激素受体结合而模拟雌激素效应，增加女性体内雌激素负荷，与乳腺癌发病率的升高有关。本实验室前一阶段的研究表明，ZEA可模拟雌激素作用，促进雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7及T47D细胞增殖，