Zacopride增强心肌内向整流钾电流(IK1)效应的受体和信号转导通路

目的: 探讨5-HT₄受体激动剂兼5-HT₃受体阻断剂zacopride增强心肌内向整流钾电流(I_K1)效应的受体和细胞信号转导机制。方法: 应用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞膜I_K1电流,分别观察10 μmol/L 5-HT₄受体阻断剂 RS23597-190、10 μmol/L 5-HT₃受体激动剂间氯苯双胍(m-CPBG)、5 μmol/L PKA 抑制剂 KT5720、5 μmol/L PKC 抑制剂GF109203x 和 5 μmol/L PKG抑制剂 KT5823对zacopride 增强I_K1的影响。结果: 10 μmol/L 5-HT₄受体阻断剂RS23597-190本身可抑制I_K1电流,在预先应用RS23597-190的基础上,1 μmol/L zacopride仍可明显激动I_K1通道,使其内向电流(-100 mV)增强32.5% (P< 0.05)。10 μmol/L 5-HT₃受体激动剂m-CPBG对I_K1电流无明显影响,也不能逆转1 μmol/L zacopride对I_K1的增强效应(P> 0.05)。此外,5 μmol/L PKA 阻断剂 KT5720能显著抑制1 μmol/L zacopride对I_K1的增强效应(P< 0.05),而PKC 阻断剂GF109203x和PKG阻断剂KT5823则对1 μmol/L zacopride的效应无明显影响(P> 0.05)。结论: Zacopride对 I_K1的增强作用可能经由PKA介导的信号转导通路,而不依赖于5-HT₃和5-HT₄受体。     

抗钠一钙交换体α-2（807-844）抗体对Langendorff灌流大鼠离体心功能的影响

目的观察1～103nmo｜／I。抗钠－钙交换体（NCX）α-2（807-844）肽段抗体对离体大鼠心功能的影响。方法化学合成的Ncxa－α-2（807-844）肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,采用Langendorff离体心脏灌流系统观察对大鼠离体心功能的影响。结果主动免疫后免体内抗α-2（807-844）抗血清滴度明显升高,经ProteinA纯化后获得浓度为7．21mg／mL的抗体;与对照组比较,1～10nmol／Lα-2抗体可明显增加大鼠离体心脏左室发展压（LVDP）及左室压最大上升速率（＋dP／dtmax,P〈0．01）,且使左室压最大下降速率（-dP／dtmax）减小（P〈0．01）;然而,102～103nmol／Lα-2抗体则可不同程度地降低正常大鼠离体心脏LVDP、±dP／dtmax（P〈0．01）。结论抗钠一钙交换体α-2（807-844）肽段抗体对离体大鼠心功能的作用与其浓度有关。在低浓度时,α-2抗体可使心肌收缩增强;而较高浓度的α-2抗体可同时抑制心肌收缩和舒张。     

β1肾上腺素受体肽段免疫家兔后心脏形态学的改变

目的:研究β1肾上腺素受体抗体在扩张性心肌病发病中可能的作用.方法:将14只新西兰兔随机分为两组,免疫组和对照组.β1受体肽段作为抗原,给予免疫组家兔每月一次皮下注射,免疫时程为1a.对照组除用生理盐水替代抗原外,注射过程同免疫组.ELISA法测定家兔血清中β1受体抗体效价.1a后取两组动物心肌电镜下观察.结果:免疫前两组动物及免疫后对照组动物β1受体抗体效价均很低,而免疫后免疫组动物效价明显增高.免疫1a后对照组动物心脏电镜下无异常表现;免疫组示心脏有坏死灶、心肌纤维缺失、过度收缩带出现等.结论:β1受体抗体可能在扩张性心肌病发病中起致病作用.     

多巴酚丁胺对大鼠心室肌细胞Na+/Ca2+交换的影响及其受体机制

目的：观察多巴酚丁胺对大鼠心室肌细胞Na^ /Ca^2 交换电流的作用及其肾上腺素能受体机制。方法：用胶原酶消化的成年大鼠心室肌单个细胞及全细胞片钳技术，记录Na^ / Ca^2 交换电流并观察药物对它作用。结果：多巴酚丁胺呈剂量领带性地增加大鼠心室肌细胞N ^ /C^2 交换电流，该作用可分别被β和β1受体阻断剂普萘洛尔和美托洛尔阻断。结论：多巴酚丁胺通过β1－受体途径增加大鼠心室肌细胞Na^ /Ca^2 交换电流，这可能是多巴酚丁胺正性变力作用的一个新的机制。     

抗钠-钙交换体α-1和α-2重复序列抗体的制备和纯化(英文)

目的用人工合成的钠-钙交换体α1和α2重复序列作为抗原,制备并纯化抗α1和α2重复序列抗体。方法通过主动免疫大鼠,获得抗血清。采用酶联免疫吸附测定法(SAELISA)测定抗体滴度,并将高滴度抗血清(≥1∶640)上样至HiTrapProteinGHP进行亲和层析对抗体进行纯化。纯化效果用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并采用Bradford蛋白质定量法对纯化后抗体进行定量。结果大鼠经主动免疫后,抗α1抗血清滴度从免疫前的1∶(25.5±1.5)升高到1∶(905.1±2.2)(P<0.01);抗α2抗血清滴度从免疫前的1∶(26.4±1.5)升高到1∶(1076.3±2.0)(P<0.01)。纯化后的抗α1和抗α2重复序列抗体电泳时都仅有一条带出现,分子量160kDa左右,与IgG标准品相一致。用Bradford蛋白质定量法测得抗α1和α2抗体浓度分别为1.0mg/ml和1.2mg/ml。结论本研究获得了高纯度、高滴度的抗α1抗体,为下一步对其进行功能研究奠定了基础。     

genistein后处理对缺血／再灌注损伤的大鼠心肌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 观测genistein后处理对在体大鼠心脏局部缺血/再灌注模型大鼠心肌细胞凋亡、心肌组织病理形态学及超微结构变化的影响.方法 40只实验动物随机分为5组,分别为假手术组、缺血/再灌注组、genistein 0.1,1.0,5.0 mg/kg后处理给药组.光镜下观察各组心肌组织病理变化,电镜下观察各组心肌组织超微结构变化,DNA原位末端缺口标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡数,观察凋亡指数变化,检测各组心肌组织中caspase-3活性,观察caspase-3的比活性变化.结果 各剂量genistein后处理组的凋亡指数与缺血/再灌注组相比均显著下降,各组caspase-3比活性变化趋势与凋亡指数变化趋势相吻合.心肌组织损伤的病理形态学和超微结构随给药剂量不同而变化,呈现出1.0 mg/kg组损伤最轻,0.1 mg/kg时损伤次之,5.0 mg/kg时损伤又较重.结论 genistein后处理对在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,保护机制与抑制心肌细胞凋亡有关,并且该保护效应与给药剂量相关.     

H-89对大鼠心肌细胞膜电流的影响

目的评估蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89对大鼠心室肌细胞膜主要离子通道和转运体的影响。方法应用全细胞膜片钳技术观察H-89对胶原酶分解的成年SD大鼠心室肌细胞膜离子电流L-型钙电流(ICa-L)、电压门控钠电流(INa)、内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)和钠钙交换体电流(INa/Ca)的影响。结果1～10μmol.L-1H-89可浓度依赖性抑制ICa-L、INa、Ito(P<0.05);对IK1有更强的抑制作用,在较低浓度(5μmol.L-1)时即可完全抑制IK1(P<0.05),与0.5mmol.L-1氯化钡的作用类似。但在1～10μmol.L-1浓度范围内H-89对INa/Ca无明显作用(P>0.05)。结论H-89对心肌细胞膜电流的影响可能是其对通道的直接作用或间接通过抑制PKA所致。     

Dofetilide对成年豚鼠心室肌细胞钠钙交换的影响

目的　研究dofetilide对豚鼠心室肌细胞Na+ /Ca2 + 交换电流的影响。方法　酶法分离成年豚鼠心室肌细胞 ,全细胞膜片钳方式、斜坡电压刺激程序 (从钳制电位 - 4 0mV去极化至 +6 0mV ,然后以 90mV/s的速率超极化至 - 12 0mV)记录Na+ /Ca2 + 交换电流 (INa/Ca)及dofetilide 0 0 3～ 1 0μmol·L-1对该电流的影响。结果　dofetilide 0 0 3～ 1 0μmol·L-1浓度依赖性地增强Na+ /Ca2 + 交换外向及内向电流 ,对外向电流的EC50 (5 0 %最大效应浓度 )为 0 178μmol·L-1(95 %可信限为 0 0 4 0～ 0 787μmol·L-1) ,对内向电流的EC50 为 0 178μmol·L-1(95 %可信限为 0 0 38～ 0 84 2μmol·L-1)。结论　dofetilide对豚鼠心室肌细胞Na+ /Ca2 +交换外向及内向电流均有浓度依赖性的明显增强作用。     

MCI-154对心肌肥厚大鼠离体心脏的正性变力作用及其机制(英文)

目的　探讨钙增敏剂MCI 15 4〔6 [4 (4 吡啶氨基 )苯基 ] 4 ,5 二氢 3(2H)哒嗪酮〕对心肌肥厚心脏与对正常心脏的作用是否不同及有关的机制。方法　利用离体心脏灌流技术观察MCI 15 4对心肌肥厚大鼠心功能的影响 ;应用离子影像学分析系统同步测定心肌细胞钙浓度瞬变和细胞长度。结果　①MCI 15 410 0～ 4 0 0 μmol·L- 1范围内浓度依赖性地提高了心肌肥厚大鼠心功能的各项指标。在 4 0 0μmol·L- 1时 ,左室主动收缩压 (左室收缩峰压与左室舒张末压之差 )及左室压最大上升速率 (+dp/dtmax)与对照值相比显著增加 ,左室压最大下降速率(-dp/dtmax)有增高趋势 ,但无统计学意义 ;②MCI 15 410～ 10 0 μmol·L- 1在钙瞬变无明显改变情况下 ,呈浓度依赖性增加肥厚心肌细胞的缩短程度和钙敏感性 ;③MCI 15 4对肥厚心肌细胞钙瞬变的 5 0 %和90 %恢复时间影响不大。结论　在心肌肥厚大鼠心脏上 ,和在正常大鼠心脏上一样 ,MCI 15 4主要通过钙增敏作用发挥其正性变力作用。