弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及鉴定

目的: 原核表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白(rhoptry proteins, ROPs)18,建立检测和定位虫体ROP18蛋白的方法。方法: 运用PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因,克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中诱导表达,经KCl染色切胶纯化重组ROP18蛋白,并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹技术和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测和定位ROP18在弓形虫速殖子体内的表达。结果: 成功表达重组ROP18蛋白,并获得其多克隆抗体。经蛋白质印迹技术检测出虫体ROP18特异性条带,IFA技术检测出ROP18分布于虫体棒状体。结论: 通过制备多克隆抗体,利用蛋白质印迹技术和IFA技术能检测和定位ROP18蛋白在弓形虫体内表达。     

弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶的表达及鉴定

摘 要：目的 构建刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶（FABZ）原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,建立检测和定位虫体FABZ蛋白表达的方法。方法 运用RT-PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子fabz基因,克隆至pET32a (+)载体,在大肠杆菌Rosetta中诱导表达。Ni-NTA亲合层析柱纯化重组FABZ蛋白并制备其兔多克隆抗体。采用免疫印迹（Western blotting）技术和间接免疫荧光技术（IFA）检测和定位FABZ在虫体内表达。结果 成功表达重组FABZ蛋白,并制备其多克隆抗体。Western blotting技术检测出虫体转运肽型FABZ蛋白（t-FABZ）和成熟型FABZ蛋白（m-FABZ）,IFA技术检测出分布于核周内质网和顶质体的FABZ蛋白。结论 通过制备多克隆抗体,用Western blotting技术和IFA技术能检测和定位FABZ蛋白在虫体内表达,该方法在顶质体蛋白研究中具有较高的应用价值。     

大鼠MCAO再灌注后不同皮质区HMGB1、NF-κB的时程表达及其意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同皮质区HMGB1、NF-κB的动态变化及其意义.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为缺血后2、6、24、48、72h组以及假手术组(Sham).线栓法制备大脑中动脉闭塞(MACO)再灌注模型,缺血时间2h.各时间点处死动物取脑,免疫组化染色检测不同时间点皮质核心区(CI)和皮质半暗带区(IP)中HMGB1、NF-κB的蛋白水平,并对两者进行相关分析,RT-PCR法检测上述两区相应时间点的HMGB1mRNA表达.结果 Sham组HMGB1的表达主要位于胞核,而NF-κB主要位于胞质.早在缺血后2h CI区即可见部分HMGB1胞质阳性的神经元,HMGB1胞质阳性表达在IP区数量较多,CI区相对较少.随着再灌注时间的延长,IP区HMGB1mRNA、HMGB1胞质阳性表达和NF-κB胞核阳性表达均呈先上升后下降的趋势,于24h达峰,且HMGB1的胞质阳性表达和NF-κB的胞核阳性表达呈明显正相关(r=0.742,P＜0.001).但在CI区,HMGB1mRNA、HMGB的胞质阳性表达呈先下降再上升,于24h降至最低,而NF-κB的胞核阳性表达于脑缺血后6h达峰,之后逐渐下降,72h又有上升趋势.结论 HMGB1/NF-κB通路可能参与了局灶性脑缺血再灌注后早期炎症介导的脑组织损伤,特别是在IP区,而针对此通路的靶向性治疗有望挽救半暗带.     

温郁金SRAP-PCR反应体系建立及条件优化

目的研究温郁金Curcuma wenyujin的SRAP-PCR扩增体系最适宜的条件。方法以提取纯化温郁金基因组DNA为模板,利用PCR扩增技术,对SRAP反应中主要影响因素Mg2+浓度、d NTP浓度、模板DNA质量浓度、引物浓度、Taq聚合酶浓度进行优化。结果根据实验确定的最佳体系为25μL SRAP反应体系,其中Mg2+2.0 mmol/L,Taq聚合酶2.0 U,引物浓度1.6μmol/L,模板DNA 0.4 ng/μL,d NTP 2.0 mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。结论通过扩增条件优化实验,扩增的产物条带清晰明亮、重复性好,确定的反应体系及反应程序适用于温郁金的SRAP分子标记,为今后温郁金的遗传多样性研究奠定了基础。     

每搏输出量变异对脓毒症患者预后的预测作用

目的 探讨每搏输出量变异(SVV)对早期目标指导治疗(EGDT)达标的严重脓毒症患者的预后预测价值.方法 38例EGDT达标后的机械通气严重脓毒症患者,根据脉搏波指示连续心排血量(PiCCO)技术测定的数据分为高SVV组(SVV≥10%)和低SVV组(SVV<10%);比较两组患者28d生存率、ICU住院时间、机械通气时间、合并新感染情况的差异;采用Kaplan-Meier生存分析法分析患者累积生存情况;采用Logistic回归分析SVV与28 d内患者死亡的关系.结果 与低SVV组比较,高SVV组患者28 d生存率明显增高(87.5%vs.57.1%,P=0.032),ICU住院时间明显减少[(27.1±9.2)d vs.(41.6±10.0)d,P=0.004],机械通气时间明显缩短[(20.4±7.3)d vs.(28.5±8.3)d,P=0.038);高SVV组累积生存率显著高于低SVV组;Logistic回归分析显示,SVV<10%使患者28 d死亡风险显著增高(OR=3.97;95%CI:1.63～9.21,P=0.014).结论 SVV可以作为EGDT达标后严重脓毒症患者的预后预测指标.     

运动康复和适应性身体活动对痉挛性脑性瘫痪儿童青少年心理运动功能、运动功能和动作发展的效益：基于ICF的循证研究

目的 系统评价运动康复和适应性身体活动对痉挛性脑瘫儿童心理运动功能、运动功能和动作发展影响的相关证据。方法 在PubMed、Embase、Web of Science和中国知网检索相关文献,时间范围为2010年1月至2023年6月。基于《国际疾病分类第十一次修订本》和《国际功能、残疾和健康分类》对文献内容进行解析和编码,并进行循证证据研究。结果 共纳入9篇文献,来自丹麦、韩国、澳大利亚、沙特阿拉伯、加纳、印度、日本,发表时间2015年至2022年。干预类型主要涉及运动康复(包括物理治疗)和适应性身体活动。运动康复包括上肢力量训练、下肢力量训练、平衡和协调训练、步态训练、功能性有氧运动、伸展和柔韧性练习、灵活性训练、肌肉放松技术;每次10～50 min,每周2～6次,身体活动强度为低～高,持续6～20周。适应性身体活动主要涉及适应性跑步训练、虚拟游戏;每次60 min,每周2～4次,身体活动强度为中至高强度,持续6～12周。干预场所主要为医疗和康复机构、学校、家庭社区。干预人员主要包括职业物理治疗师、大学研究人员、社区卫生人员和教师。干预结局主要体现在4个方面：心理运动功能、运动功能、动...     

眼表活体染色剂及混合染色剂的染色效果评价

荧光素钠、虎红、丽丝胺绿三种活体染料是目前临床诊断、评估眼表损伤状况的重要染色剂,尤其是对具有干眼症状的患者.近年来于眼症患者呈逐年上升的趋势,眼表的活体染色可以帮助临床医生进行快速诊断.本文就荧光素钠、虎红、丽丝胺绿及其混合的活体染色剂在控制剂量和浓度情况下的眼表角结膜染色效果、刺激性评价等进行综述.     

锁骨下动脉或无名动脉狭窄经皮血管内成形和支架术前后彩色多普勒超声的应用价值

目的 探讨彩色多普勒超声在经皮血管内成形和支架(percutaneous transluminal angioplasty and stent,PTAS)术前诊断锁骨下动脉或无名动脉(subclavian or innominate artery,SIA)狭窄和术后监测中的价值.方法 选择45例SIA狭窄患者,应用彩色多普勒超声观察其颅外段椎动脉和锁骨下动脉.对其中36例单侧SIA狭窄患者进行椎动脉血流方向和频谱形态分析,根据椎动脉频谱形态变化进行盗血分级,并与定量血管造影对比.45例SIA狭窄患者中成功进行PTAS治疗36例(植入36个支架),测量支架植入术后支架处峰值流速(PSV)和术后随访速率比(VR)等血流动力学参数,观察支架有无术后再狭窄.结果 36例单侧SIA狭窄患者中,彩色多普勒超声检测的盗血分级与定量血管造影检测的血管狭窄率呈显著性正相关性(r=0.752,P<0.01).36例支架植入患者随访至术后8～12月,4例发生再狭窄,其术后支架处PSV和VR明显高于未狭窄组(P<0.01).结论 彩色多普勒超声是PTAS术前诊断SIA狭窄及术后监测的有效影像学手段.     

中西药治疗呼吸道病毒感染63例报告

小儿呼吸道感染是儿科最常见的疾病。而肺炎为３岁以下小儿发病率及死亡率最高的疾病。为了探讨兰州地区呼吸道感染病原及中西药治疗情况,自 １９９３年 １２月至 １９９４年 ４月共检测 １２７例,资料完整者６３例,现报告如下。１资料来源 １９９３年１２月－１９９４年４月冬春季节,住院的呼吸道感染患儿,皆符合１９８７年卫生部颁布的《肺炎防治方案诊断标准及分类》中肺炎的诊断标准。２实验方法 试剂由北京二六二医院实验室提供,取患儿鼻咽部分泌物,将脱落细胞浓集涂片,采用桥联酶标法快速诊断方法,用已知病毒抗体同时检测病…