hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的表达和纯化

目的:构建hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的表达质粒,进行诱导表达,纯化和鉴定。方法:合成hClock-(35-47)_Bax-(55-77)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株。IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:成功构建了hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的表达载体,插入片断为128bp,表达产物相对分子质量约为23kD,经Western blotting鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应。结论:hClock-(35-47)_Bax-(55-77)融合蛋白可以用原核表达的方法大量获得,并通过亲和层析纯化达到较好的纯度,为下一步的研究提供基础。     

肌萎缩侧索硬化患者认知功能改变与脑皮层厚度分析

目的: 通过MRI皮层厚度分析法，探讨肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)患者脑结构变化，并分析其与认知功能改变的相关性。方法: 纳入ALS患者18例，以及性别、年龄、教育程度匹配的正常对照者18例，对所有研究对象进行3D磁化准备快速递度回波(magnetization prepared rapid gradient echo imaging, MPRAGE)序列MRI扫描，进行皮层厚度分析，同时对所有ALS患者进行神经心理学测评，包括简易精神状态检查(mini-mental state examination，MMSE)、言语流畅性试验、Stroop色词试验、前瞻性记忆、情绪图片感知及再认、失言识别测验。结果: 经过认知评估，2例ALS患者存在认知功能障碍。比较18例ALS患者和18例正常对照的顶点水平全脑皮层厚度，ALS组左侧大脑半球内侧眶额叶后部、颞叶内侧皮层厚度明显减低(P < 0.05)；区域水平比较，ALS组左内嗅区、左颞下回、左内侧眶额叶、左岛叶皮层厚度明显减低(P < 0.05)。认知功能正常的16例ALS患者与正常对照相比较，两组间顶点水平和区域水平的皮层厚度差异均无统计学意义(P>0.05)。前瞻性记忆、情绪图片感知及再认、失言识别测验评分与对应脑区皮层厚度值存在相关性(P < 0.05)。结论: ALS患者皮层厚度与神经心理学检查具有相关性，可能反映认知测评所对应的脑区皮层结构改变，可能为ALS患者认知改变的早期诊断提供帮助。