温州汉族人群短串联重复序列D1S549位点多态性研究

目的:获得D1S549基因座在中国温州汉族群体中基因型及等位基因频率数据,探讨其在法医学中的应用价值.方法:应用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显带技术对温州地区汉族人230名无关个体的D1S549位点进行分型,并检验D1S549基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,计算法医学常用的各种概率,并与其他人群进行了比较.结果:D1S549位点检出7个等位基因,21种基因型.基因型频率的分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=11.5, P＞0.05, df=14),观测杂合度为(75.9±2.0)%,耦合几率为0.087,亲子关系指数为2.07,个体识别率为0.913,期望排除率为0.525,多态信息含量为0.73.不同人群基因频率分布存在一定的差异.结论:所得到的等位基因频率数据可为温州汉族人群法医个体识别,亲子鉴定及遗传学研究提供更多依据.     

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P0.05),Bcl-2表达显著下调(P0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。     

解脲脲原体与宫内感染的相关性研究Ⅰ.解脲脲原体感染与自然流产及药物不全流产

目的研究解脲脲原体（Ｕｕ）与自然流产和药物不全流产的关系，探讨Ｕｕ与宫内感染的可能机制。方法采用分离培养分别对４５例自然流产和２７例药物不全流产（试验组）和３１例人工流产（对照组）的母亲宫颈分泌物及胚胎组织进行Ｕｕ检测，分别对部分试验组和对照组进行超薄切片，并与其培养物负染电镜检查相比较。结果试验组流产组织中Ｕｕ检出率分别为５３．３％和６３％，与对照组相比较，具显著性差异（ｐ＜０．００１，ｐ＜０．００１）；经超薄切片观察，试验组流产组织的绒毛膜下滋养层细胞周围见大量的Ｕｕ颗粒及空泡内增殖的子细胞，并与其流产组织中阳性培养物经负染后的颗粒相似。而对照组胚胎流产组织中无此颗粒。结论绒毛膜下滋养层Ｕｕ增殖这一结果充分证实了Ｕｕ是引起宫内感染的病原体之一。     

温州地区汉族人群 N-乙酰基转移酶2基因多态性分析

目的探讨温州地区汉族人群N-乙酰基转移酶2（NAT2）基因多态性分布规律。方法，应用聚合酶链反应（PCR）及测序技术对174名温州地区汉族健康人群NAT24个突变位点的基因多态性进行检测，并与其它人群进行比较。结果NAT2等位基因频率分别为：Wt（59.77％），M2（21．83％），M3（14．36％），M1（4．02％）。未检测到M4突变等位基因。各基因型频率分别为：Wt／Wt（39．08％），Wt／M2（22．99％），Wt／M3（14．94％），M2／M3（9．20％），M2／M2（4．60％），Wt／M1（3．45％），M1／M2（2．30％），M3／M3（1．72％）M1／M3（1．15％），M1／M1（0．57％）。结论温州地区汉族人群NAT2突变基因中，以M2为主，主要以Wt／M2形式存在，M1突变最少，未发现M4。基因多态分布与日本人接近，与其他地区显著不同。     

16种抗菌药物对致病性大肠杆菌和志贺氏菌的MIC测定

１６种抗菌药物对从小儿腹泻粪便标本中分离到的不同血清型别的１１株肠致病性大肠杆菌（ＥＰＥＣ），９株肠侵袭性大肠杆菌（ＥＩＥＣ）及１５０株志贺氏菌进行最低抑菌浓度（ＭＩＣ）测定。结果显示，各菌株对头孢三嗪、丁胺卡那、头孢哌酮和头孢唑啉均较敏感（ＭＩＣ９０为＜２～３２ｍｇ／Ｌ）；氟哌酸、庆大霉素和氟霉素对两者的ＭＩＣ９０相差较大（对致病性大肠杆菌的ＭＩＣ９０分别是＞２５６、６４和＞１２８ｍｇ／Ｌ，对志贺氏菌的ＭＩＣ９０分别是６４、１０和３０ｍｇ／Ｌ）．而其余９种抗菌药物的抑菌效果都很差（除卡那霉素外，ＭＩＣ９０均大于１００ｍｇ／Ｌ）。     

掌叶半夏总蛋白作用人卵巢癌SKOV3细胞的蛋白质组学研究

目的研究掌叶半夏总蛋白作用于人卵巢癌SKOV3细胞后蛋白质组学的变化。方法体外培养SKOV3细胞,应用CCK-8比色法观察不同时间（24、48、72、96 h）、不同浓度（0、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mg/mL）掌叶半夏总蛋白对SKOV3细胞的生长抑制作用。取对数生长期SKOV3细胞,加入0.296 mg/mL掌叶半夏总蛋白作用于细胞48 h,提取细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）筛选差异表达的蛋白质。结果 0.10～0.50 mg/mL掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,且具有一定的时效和量效关系（P〈0.05,P〈0.01）。经2-DE和质谱分析成功鉴定43个差异蛋白质点（其中21个上调,22个下调）,包括α-烯醇化酶1、真核翻译起始因子3α、亲环素B等。结论掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,并引起SKOV3细胞株蛋白质组学的改变,可能与其抗癌机制相关。     

大肠杆菌质粒解离后致死基因分布及多态性分析

目的 通过对来自不同年份大肠杆菌质粒DNA序列进行高通最测序,从质粒基因组水平分析大肠杆菌质粒DNA所携带的解离后致死基因的种类、数量以及多态性.方法 收集4年临床分离非重复的320株大肠杆菌.菌株分为两个部分,碱裂解法提取全部质粒DNA,Solexa测序获得大规模的短序列.采用比较基因组学方法分析两个样本所含的解离后致死基因类型及丰度的差异,研究解离后致死基因存在的核苷酸多态位点.结果 测序法获得两批数据,E1短序列总数为11 077 768,可以定位到参照序列上为5019(0.045%).E2短序列总数为9 377 792,可以定位到参照序列上是4952(0.053%).两个样本中共有9个解离后致死基因型,其中hok基因丰度最高.5个基因型共发现29个单核苷酸多态性(SNPs)位点,约33%为非同义突变.同一个位点的A、G二核苷酸多态现象常见.结论 已知的大肠杆菌解离后致死基因的9个基因型,在温州地区分离的大肠杆菌质粒上均有发现,其中hok基因出现频率最高,共5个基因型存在多态性.

Abstract：

Objective To investigate the genotypes of host killing genes and their single nucleotide polymorphisms (SNPs). Methods Three hundred and twenty strains of Escherichia coli that collected from the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College were analyzed. The first sample ( E1 ) contains 160 strains isolated during the years from 2002 to 2003. The second sample (E2) contains 160 strains covering the years from 2008 to 2009. The plasmids of Escherichia coli were extracted by alkaline lysis method. Solexa/Illumina sequencing technology was used to sequence plasmids metagenome. Solexa Genome Analysis System and Soap programs were used to analyze gene distribution, SNPs and lineage-specific mutations. Results 11 077 768 reads were generated and 0. 045% of them can map to the reference sequences from El sample. Whereas 9 377 792 reads were generated and 0. 053% of which mapped to the reference from E2 sample. There are nine host killing genes identified in the two samples, of which hok gene is the most prevalent. A total of 29 SNP sites dispersed in five genes of the two samples. Approximately 33% of them were non-synonymous mutations. One position of A and G is the most prevalent polymorphism. Conclusion The known nine genotypes of host killing genes were all identified in plasmids of Escherichia coli in Wenzhou. hok gene showed the highest frequency. There were SNPs in five genotypes.     

温州汉族儿童TLR4基因Asp299Gly、Thr399Ile以及CD14-159C/T多态性分析

目的 研究Toll样受体4(TLR4)和脂多糖受体(CD14)基因多态性在温州地区汉族儿童中的分布特征及其与特应性疾病的关系.方法 2004-02-2006-04,于温州育英儿童医院,利用测序法测定79例健康对照组儿童和113例特应征儿童的TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile的基因序列以及CD14基因序列,寻找多态位点,调查多态位点的分布特征,比较两组儿童多态位点的基因型频率和等位基因频率.结果 79例对照组儿童和113例特应征组儿童均未发现TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性.特应征组和对照组儿童均发现CD14/-159多态性,以TT基因型为主,未发现其他多态位点.其中对照组儿童TT、TC、CC 3种基因型频率分别为57.0%、28.0%和15.0%,特应征组儿童TT、TC、CC 3种基因型频率分别为46.9%、35.4%和17.7%,按Hard-Weiberg平衡吻合度检验,差异无显著性(x2=3.462,P＞0.05).两组的基因型频率和等位基因频率分布差异无显著性(x2=1.918,P＞0.05).结论 未发现TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性,温州地区汉族儿童存在CD14/-159多态性,未发现CD14基因其他多态位点.温州地区汉族儿童CD14/-159基因型以TT为主,未发现CD14/-159基因型和特应征发病的相关性.     

浙南汉族人群18号染色体上三个STR位点的遗传多态性研究

目的研究浙南汉族人群18号染色体上三个STR位点D18S865、D18S1364和D18S535的遗传多态性分布,获得相应的群体遗传学数据.方法应用聚合酶链式反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及银染显带技术对浙南地区汉族184名无关个体的D18S865、D18S1364和D18S535位点进行分型.结果D18S865观察到6个等位基因及17种基因型,D18S1364观察到9个等位基因及35种基因型,D18S535观察到8个等位基因及29种基因型,多态性分布都符合Hardy-Weinberg平衡.各基因座的杂合度(H)分别为:0.723、0.848、0.783;多态性信息含量(PIC):0.72、0.81、0.79.结论三个STR基因座具有较高杂合度和多态性信息含量,在遗传学研究和法医学应用中有较高的价值.     

绍兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmⅠ、Tru9Ⅰ、ApaⅠ位点多态性分布研究

目的:探讨维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因BsmⅠ、Tru9Ⅰ、ApaⅠ位点多态性的分布情况.方法:随机抽取绍兴地区青少年212名作为研究对象,提取其外周血DNA,利用聚合酶链反应(PCR)、基因测序技术检测VDR基因BsmⅠ、Tru9Ⅰ、ApaⅠ位点多态性.结果:BsmⅠ位点基因型bb、Bb和BB的频率分布分别为89.62%、8.49%、1.89%;Tru9Ⅰ位点基因型TT、Tt和tt的频率分布为61.79%、33.96%、4.25%;ApaⅠ位点基因型aa、Aa和AA的频率分布分别为60.38%、30.38%、8.96%.结论:绍兴地区汉族青少年VDR基因BsmⅠ、Tru9Ⅰ、ApaⅠ位点具有多态性.