Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究

目的 用基因工程的方法构建并表达一种由 Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV).方法 采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后.利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达.用纯化后的蛋白免疫nalb/c 小鼠.将小鼠脾细胞用HBsAg 装载的P815细胞在体外刺激5 d后,用流式细胞仪检测IFN-γ 细胞的频率.用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生.结果 由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导 HBV 特异性的 IFN-γ 的淋巴细胞的产生.结论 获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础.     

B超诊断半月板损伤

半月板损伤是常见的膝关节疾病,以往诊断方法主要依靠膝关节造影及膝关节镜,而无创性检查较少。Selby等于1986年首次用高分辩力超声诊断半月板损伤,国内报道较少。 我们自1991年10月至1996年4月用B型超声检查膝关节半月板损伤病人23例(23个半月板),其中男13例。女10例,年龄14—62岁,对其中10例同时应用膝关节镜检查,9例送病理检查证实。     

人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究

目的：探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞（HKC）的同步化方法。方法：将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组，分别采用胎牛血清浓度为0、1、2、3、4、5和100mL／L的DMEM培养液培养24h。根据流式细胞术结果选择的最佳同步化HKC的胎牛血清浓度。将HKC的同步化处理时间分别延长为24h、48h和72h，选择最佳同步化时间。用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响。采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果。结果：选择无血清（0mL／L）和1mL／L为HKC最佳同步化的胎牛血清浓度，选择48h为HKC同步化最佳时间。细胞生长曲线表明采用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h后恢复正常培养的HKC细胞，其生长曲线更接近于正常培养的细胞。Brdu进一步证明，用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h可以使90％以上的HKC细胞处于G0／G1期。结论：用1mL／L胎牛血清的DMEM培养液培养48h可获得90％以上的G0／G1期HKC。     

十堰地区1907例遗传咨询者细胞遗传学分析

染色体病是一种常见的遗传病,可引起先天畸形及智力障碍、不孕不育、反复流产、生长发育等障碍,外周血染色体检查作为常用的细胞遗传学检测手段,具有简单实用的特点.为了探索染色体异常的发病机理和临床意义,以便指导临床工作,现将我们中心1907例外周血染色体检查及结果分析报告如下.     

内源性大麻素系统对丙戊酸诱导的模型鼠孤独症样行为的影响研究

目的 探讨花生四烯酸甘油酯(2-AG)水平改变对VPA鼠孤独症样行为的影响,为进一步明确孤独症谱系障碍(ASD)病因及发病机制提供依据。方法 以VPA诱导ASD模型鼠为研究对象,将实验鼠分为CON组、VPA组、JZL184急性干预组:VPA+40 mg/kg JZL184组(VPA+40AJ)、JZL184慢性干预组:VPA+1 mg/kg JZL184组(VPA+1RJ)、VPA+3 mg/kg JZL184组(VPA+3RJ)和VPA+10 mg/kg JZL184组(VPA+10RJ)。检测各组大鼠的孤独症样行为,采用液相色谱-质谱联用技术检测大鼠海马组织中内源性大麻素(eCBs)水平,采用Western blot检测eCB系统相关受体及代谢酶表达水平。结果 VPA组2-AG、AEA水平显著低于CON组(P<0.05),JZL184 干预后,VPA+3RJ 组和 VPA+10RJ 组 2-AG 水平显著升高(P<0.05)。与CON组相比,VPA组埋珠数量、自梳时间及自发活动明显增多,同时社交能力指数和社交偏好指数降低(P<0.05);JZL184干预后,VPA+40AJ组的埋珠个数、自梳时间、自发活动均减少,社交能力指数和社交偏好指数明显增加;VPA+1RJ组的自梳时间减少;VPA+3RJ组的埋珠个数、自梳时间、自发活动均减少,社交偏好指数明显提高;VPA+10RJ组埋珠个数和自梳时间减少,社交偏好指数明显增加(P<0.05)。VPA组海马组织中CB1R、DAGL、MAGLFAAH蛋白表达显著高于CON组(P<0.05)。JZL184干预后,VPA+3RJ组 DAGL和MAGL的蛋白表达显著下调,VPA+10RJ组MAGL也显著下调(P<0.05)。结论 低eCBs信号与VPA鼠孤独症样行为有关,升高2-AG水平可以改善ASD模型鼠的重复刻板行为、活动过度和社交功能损伤。     

肉桂醛通过PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬促进糖尿病大鼠创面愈合机制

目的 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链尿佐菌素（STZ）及手术制备全层皮肤缺损的方法制备糖尿病大鼠创面模型,观察肉桂醛对糖尿病大鼠创面愈合情况的影响,并基于PTEN诱导假定激酶（PINK）1/帕金森病蛋白（Parkin）信号通路介导的线粒体自噬探讨肉桂醛对糖尿病大鼠创面的治疗机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白组12只,糖尿病组36只,糖尿病组随机分为模型组、肉桂醛组和贝复新组,每组12只,空白组与模型组创面常规消毒后予生理盐水,肉桂醛组创面局部外敷含4 μmol·L^-1肉桂醛的聚乙二醇400（PEG 400）凝胶,贝复新组创面外敷贝复新凝胶,每日换药1次。观察各组创面愈合率,取干预后7、14 d大鼠创面组织,苏木素-伊红（HE）染色观察局部组织病理变化,免疫组化（IHC）检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、胶原纤维的表达情况,免疫荧光（IF）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白和mRNA的表达情况。结果 腹腔注射STZ后,与空白组比较,糖尿病组大鼠随机血糖值显著升高（P<0.01）,均高于16.7 mmol·L^-1,且在造模后一段时间持续保持高血糖状态。与空白组比较,模型组大鼠创面肉芽组织生长、愈合情况较差,创面愈合率显著降低（P<0.01）;干预后7 d,空白组创面已有鳞状上皮覆盖,与空白组比较,模型组大鼠创面仅创缘少量结痂,创面中大量炎细胞浸润,组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）;干预后14 d,空白组创面肉芽组织成熟,愈合良好,与空白组比较,模型组创面炎细胞浸润和红细胞渗出尚未完全消退,组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肉桂醛组和贝复新组大鼠创面愈合情况较好,创面愈合率显著升高（P<0.01）,干预后7 d组织IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,PINK1、Parkin及LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著升高（P<0.01）,干预后14 d组织VEGF、胶原纤维蛋白表达水平显著上升（P<0.01）,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白表达及mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论 肉桂醛能促进糖尿病创面愈合,上调创面愈合率,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,增加VEGF、胶原纤维蛋白的水平,其机制可能是通过调节PINK1/Parkin信号通路表达,激活线粒体自噬,抑制炎症反应,增加血管新生和胶原合成,从而达到促进糖尿病大鼠创面愈合的目的。     

济南市2020年蚊类监测结果及优势蚊种抗药性检测结果分析

目的 了解2020年济南市蚊类种群组成、密度及季节消长规律;了解济南市优势蚊种的抗药性情况,为病媒生物防控工作提供科学依据.方法 蚊虫监测采用诱蚊灯法,监测3至11月份;优势蚊种抗药性检测,采用浸渍法、点滴法等.结果 蚊类,平均密度为6.15只/(灯·夜),以淡色库蚊为主,猪圈的蚊类密度最高;优势蚊种抗药性检测,对常用菊酯类药剂均有不同程度抗药性.结论 掌握了2020年济南市蚊类种群组成、密度及季节消长规律及优势蚊种抗药性情况,为济南市及济南口岸蚊类的防治工作提供理论依据.     

国产万拉法新治疗肠易激综合征的初步临床研究

目的 观察国产新药万拉法新对肠易激综合征（IBS）及其伴随的焦虑和抑郁症状的临床治疗效果。方法 选择48例IBS患者,随机分为治疗组和对照组,分别服用万拉法新及硝苯地平进行为期4周的治疗,通过对IBS各项症状的改善率和总体改善率评定观察治疗效果。同时采用Zung编制的抑郁自评量表和焦虑自评量表进行评分观察治疗前后抑郁和焦虑的改善程度。结果 万拉法新对IBS的治疗总体改善率为80％,对照组为52．17％（P＜0．05）。万拉法新治疗前后焦虑和抑郁的改善程度经检验均有统计学意义（P＜0．01）。结论 单独应用万拉法新对IBS的总体治疗效果优于硝苯地平组,对改善伴随的焦虑和抑郁症状有明显的疗效。     

豚草花粉变应原致过敏性鼻炎豚鼠模型的建立

为了建立豚草花粉变应原致过敏性鼻炎的实验动物模型,将健康豚鼠42只,随机分为致敏组(n=32)和对照组(n=10).致敏组经腹腔、四肢皮下注射豚草花粉变应原免疫4周后,鼻腔滴入豚草花粉变应原;对照组以生理盐水代替变应原.结果致敏组28只出现鼻痒、喷嚏、流清涕等过敏性鼻炎的临床体征(评分》5分),鼻腔分泌物涂片见大量嗜酸性粒细胞,以及鼻粘膜水肿、粘膜嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润等组织学变化,而对照组无上述变化(P《0.001).本实验建立的豚草花粉变应原致过敏性鼻炎的实验动物模型,为过敏性鼻炎,特别是豚草花粉变应原所致的过敏性鼻炎的诊断、治疗及研究工作提供了有力的方法及形态学依据.     

湖南省新生儿先天性甲状腺功能减低症和苯丙酮尿症的筛查分析

目的：了解湖南省新生儿先天性甲状功能减低症（CH）和苯丙酮尿症（PKU）的发病情况,早期诊断和治疗。方法：采用时间分辨荧光免疫法（DELFIA）测定促甲状腺素（TSH）浓度,使用盖塞利细菌抑制法或荧光法测定血苯丙氨酸（Phe)浓度。对TSH≥20μU/L或Phe≥0.26mmol/L(2mg/dl)者,进行确诊检查,确诊后给予治疗并随访。结果：湖南省部分地区46323例新生儿,确诊为CH28例（包括3例TSH延期上升型CH）,PKU患儿1例。经治疗随访患者智能体格发育正常。结论：新生儿筛查能早期发现PKU和CH患儿,及时诊断、治疗和预防智力低下发生,值得大力推广。