雄激素和雄激素受体对肝癌细胞株PEG10表达的作用

目的 探讨雄激素和雄激素受体(AR)对肝癌细胞株PEG10表达的调控作用.方法 设计合成针对人ARsiRNA,并转染HepG2和7404肝癌细胞株.用双氢睾丸酮(DHT)干预HepG2细胞.Western Blot检测AR和PEG10表达水平.结果 从3对AR siRNA中筛选到1对siRNA(AR siRNA-3),它在2种肝癌细胞株中均可有效抑制AR的表达,其抑制作用呈剂量依赖关系.2种肝癌细胞株中,浓度为240 nmol/L的AR siRNA-3在转染后24 h,对AR抑制效率可达80%以上,且抑制效果可持续至72 h.AR siRNA-3转染24h后PEG10表达水平降低,转染48 h后,PEG10表达水平降低非常明显,72 h后PEG10表达有所上升.DHT可促进HepG2细胞PEG10的表达,呈剂量依赖关系.DHT对AR表达未见明显作用.结论 雄激素和AR参与了肝癌细胞株PEG10表达的调控.这可能是男性肝细胞癌发病率较高的原因之一.     

核转录因子E2Fs家族研究进展

核转录因子E2Fs家族(E2F转录因子)是视网膜母细胞瘤相关基因(RB／E2F)通路中调控细胞有丝分裂事件的重要因子，E2F是否进入核内发挥核转录因子作用取决于RB蛋白的磷酸化状态，E2F调控的下游基因分为激活与抑制两种方式，涉及细胞周期调控、生长与凋亡、增殖与分化等重要生命活动。E2F在细胞周期中的功能失调将导致细胞上述机能的改变并有可能与肿瘤发生有关，深入研究无疑将对完整阐述细胞周期调控及肿瘤发生机制乃至寻求新的肿瘤治疗靶点提供帮助。     

低温冻存时间对肿瘤组织生物大分子的影响

目的:探讨低温冻存时间对生物大分子DNA、RNA及蛋白质的影响,观察经长期低温冻存的肿瘤样本是否仍可满足科研的需求。方法:选择上海交通大学医学院附属瑞金医院上海消化外科研究所肿瘤样本库内2002至2006年间收集的手术切除胃癌标本20对(包括肿瘤组织及配对正常组织),用于提取组织总蛋白质和核酸,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度,采用凝胶电泳鉴定RNA、DNA完整性。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测核转录因子-κB(NF-κB)亚单位P65的mRNA表达;蛋白印迹(Western blot)法检测NF-κB蛋白表达。另随机抽取46例胃癌标本,检测其NF-κBP65的单核苷酸多态性(SNP)位点变异。结果:所有抽提DNA的吸光度比值(A260/A280)均在1.7～2.1间,电泳条带清晰,可检测出SNP位点变异。与保存1～2年者相比,储存3年或以上的标本NF-κBP65 mRNA与蛋白表达均有下调(P=0.03,P<0.01)。结论:组织样本低温保存在5年范围内,其DNA分子的完整性与质量均未受影响;RNA与蛋白质分子在低温保存1～2年内尚不影响癌基因表达的分析结果,但低温保存3年或以上的标本中RNA及蛋白质均有不同程度降解。     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因的过表达与胃癌细胞增殖有关

目的探讨胃癌细胞及组织中丝氨酸／苏氨酸激酶15(STK15)mRNA和蛋白质表达与临床病理指标、胃癌细胞增殖的关系。方法采用实时定量PCR及Western blot分别检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株SUN-16、KATOIII、MKN45、AGS、N87及60份新鲜切除的胃癌组织中 STK15基因mRNA及蛋白质表达。RNA干扰技术(RNAi)抑制MKN45、AGS、N87细胞株STK15表达,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖速率变化,数据行秩和检验及t检验。结果 SUN-16、KATOⅢ、MKN45、AGS、N87中STK15基因mRNA及蛋白质表达均明显高于GES-1;60份胃癌组织中STK15 mRNA及蛋白质表达水平中位值分别为3．175×10-3与1．261,明显高于正常组织的0．532×10-3与0．224(P<0．05);胃癌组织中STK15 mRNA水平与胃癌分化及浸润深度有关(P< 0．05);而蛋白质表达水平与胃癌分化有关(P<0．05)。抑制STK15表达后,MKN45、AGS、N87细胞株 G2期DNA含量细胞分别为(26．1±6．1)％、(25．6±7．9)％及(20．6±6．1)％,明显高于对照组的(12．5 ±4．9)％、(10．9±4．4)％及(8．7±3．5)％(P<0．05);细胞增殖速率减慢(P<0．05)。结论 STK15 的过表达可能在胃癌发生发展中起促进作用,可作为胃癌某些生物学行为新的判定指标;STK15的过表达与胃癌细胞增殖有关。     

转导人TIMP—2基因抑制癌浸润转移的实验研究

目的 外源性人ＴＩＭＰ－２基因在人ＬＡＫ细胞中的表达及其对胃癌浸润转移的抑制作用。方法 通过磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀的方法将ＴＩＭＰ－２重组真核表达质粒ｐＬ（ＴＩＭＰ－２）ＳＮ转染兼性包装细胞ＰＡ３１７包装形成病毒颗粒。用病毒液感染人ＬＡＫ细胞,再以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及反向酶谱试验进行表达及活性分析。用转基因ＬＡＫ细胞（ＬＡＫ／ＬＴ）２×１０＾６给胃癌转移模型腹腔内注射。结果 ＴＩ     

转导人TIMP-2基因抑制胃癌浸润转移的实验研究

目的外源性人ＴＩＭＰ－２基因在人ＬＡＫ细胞中的表达及其对胃癌浸润转移的抑制作用。方法通过磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀的方法将ＴＩＭＰ－２重组真核表达质粒ｐＬ（ＴＩＭＰ－２）ＳＮ转染兼性包装细胞ＰＡ３１７包装形成病毒颗粒。用病毒液感染人ＬＡＫ细胞,再以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及反向酶谱试验进行表达及活性分析。用转基因ＬＡＫ细胞（ＬＡＫ／ＬＴ）２×１０６给胃癌转移模型腹腔内注射。结果ＴＩＭＰ－２在ＬＡＫ／ＬＴ中ｍＲＮＡ高度表达,在ＬＡＫ中弱表达。ＬＡＫ／ＬＴ细胞中有相对分子质量２１０００大小的蛋白质表达,具抑制Ⅳ型胶原酶降解明胶的活性。肿瘤种植后１０周,对照组肿瘤体积为（４．００±１．７０）ｃｍ３,肝转移率和腹膜转移率均达１００％,脾脏转移率为７０％（ｎ＝１０）;单用ＬＡＫ细胞治疗组肿瘤体积为（２．７２±１．２０）ｃｍ３,肝及腹膜转移率分别为６０％和７０％;ＴＩＭＰ－２高表达的ＬＡＫ／ＬＴ细胞治疗组肿瘤体积仅（１．２１±１．１６）ｃｍ３,肝转移率与腹膜转移率仅分别为２０％和３０％。肿瘤生长抑制率达７０％,肝及腹膜转移抑制率分别为８０％和７０％。结论ＴＩＭＰ－２对胃癌生长及转移具有抑制作用。     

以树突状细胞为基础的肿瘤疫苗研究进展

树突状细胞作为一种目前已知的功能最强的抗原提呈细胞，可以体内外向Ｔ细胞提呈抗原并诱发ＣＴＬ反应。９０年代开始，ＤＣ在肿瘤免疫治疗中的作用逐渐受到重视。近年来，在ＤＣ的基础和临床应用研究方面取得了一些突破性的进展。     

结肠癌多药耐药性相关基因筛选与鉴定

目的筛选结肠癌多药耐药相关基因,探讨结肠癌多药耐药的机制。方法通过逐步递增氟尿嘧啶（5-FU）浓度孵育结肠癌Lovo细胞,建立耐药细胞株Lovo／5-FU。M1Tr法检测Lovo／5-FU细胞对5-FU和顺铂（CDDP）的敏感性。采用二维电泳-质谱联用技（2DE—MS）术比较Lovo和Lovo／5-FU两株细胞间差异表达蛋白,并采用Western blot法鉴定筛选蛋白。结果与Lovo相比,Lovo／5-FU细胞对5-Fu和CDDP的IC。值分别升高31倍和3倍（均P〈0.01）。通过2DE—MS筛选得到。在耐药株中CAP—G和RhoGD12表达上调,6-PGL、DCI、Prdx-6和Maspin表达下调。Western blot检测显示．Lovo／5-FU细胞中RhoGD12和CAP-G较Lovo增高6．14倍和2．98倍（均P〈0．01）．而Maspin则明显下降至Lovo中的5．2％（P〈0．01）。结论结肠癌耐药性的产生是多基因、多通路改变的结果。CAP—G、RhoGD12、Masoin是潜在的结肠癌多药耐药相关基因。     

胃癌基础与转化研究的热点问题

胃癌的发病率、死亡率均较高,而胃癌的总体疗效不满意。临床上面临的早期诊断率低、肿瘤异质性、缺乏精确分型和精准治疗方案、治疗抵抗、复发与转移等问题是胃癌总体疗效不高的关键所在。为根本解决上述临床问题,需加强胃癌的基础研究,包括肿瘤基因组学、基因编辑、肿瘤微环境、炎症和衰老与肿瘤的关系、细胞分化障碍、细胞自噬与死亡、代谢紊乱、免疫治疗和药物开发等核心命题。本文将概述临床上胃癌治疗所面临的问题,并阐述针对这些临床问题的基础研究重点领域,为胃癌基础及转化研究提供思路。