HPLC-PDA联合Box-Behnken响应面法优选五苓散低极性部位提取工艺

目的 应用HPLC-PDA联合响应曲面法,筛选五苓散低极性部位乙醇提取最佳工艺。方法 采用多波长切换定量测定,以23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、麦角甾醇、茯苓酸、白术内酯I、白术内酯II、白术内酯III、肉桂酸、桂皮醛9种有效成分为评价指标,采用Box-Behnken响应曲面法考察提取乙醇体积分数、料液比、提取时间对提取工艺的影响,确定最佳工艺。结果 色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C₁₈柱（100 mm×4.6 mm,2.7 μm）,体积流量为0.8 mL/min,柱温为40℃。流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱：0~10 min,37%~60%乙腈;10~20 min,60%乙腈;20~23 min,60%~95%乙腈;23~36 min,95%乙腈;36~37 min,95%~37%乙腈;37~42 min,37%乙腈。检测波长为280、247、220、208 nm多波长切换。最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取2次,每次1.5 h。结论 建立的HPLC-PDA法稳定可行,适合多种成分同时测定。响应曲面法所建模型准确,可以较好地预测9种成分含量综合评分;优选的提取工艺方法重现性良好,稳定可行,为五苓散临床应用、药效物质基础研究和新药开发提供技术参考。     

RNA干扰作用机制及其在中医药研究中的应用前景

RNA干扰首先由Su Guo博士于1995年在秀丽新小杆线虫体内发现,而后发现这一现象广泛存在于自然界各级生物体当中。RNAi作用机制涉及siRNAs及miRNAs的产生、RISC的装配、RISC的功能三个过程从而沉默目的基因的表达。在中医药研究中,RNAi这一复杂现象的作用机制完全可以用中医理论的阴阳学说来解释,而且它在证候-基因组研究、中药作用的靶标或阐明中药的作用机制、中药的毒性研究等方面都有重要的应用前景。     

生地黄与熟地黄中地黄苷A、D的比较分析

目的：建立生地黄和熟地黄中地黄苷A、D的分析方法，比较不同来源药材之间的差异。方法：采用TLC法对生地黄和熟地黄药材进行定性鉴别；用高效液相色谱法测定地黄苷A和D的含量。结果：在TLC色谱中生地黄和熟地黄斑点清晰；地黄苷A和地黄苷D范围进样量分别在0．192-0．160mg／mL，0．132-0．660mg／mL范围内线性关系良好，r值分别为0．9993和0．9999，平均加样回收率分别为96．1％和97．4％。结论：所建立的方法可准确地进行定性、定量检测，生地黄中的地黄苷A、D的含量比熟地黄高。     

光叶菝葜抗炎有效部位筛选

目的:筛选黔产光叶菝葜根茎抗炎有效部位,并探索其抗炎的作用机制。方法:光叶菝葜药材用60%乙醇提取后再分极性提取各部位,通过二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验(急性渗出性炎症)、小鼠棉球肉芽肿试验(慢性增殖性炎症)对光叶菝葜抗炎有效部位进行了药效学筛选;对筛选出的抗炎有效部位再通过大鼠急性炎症试验中的血清一氧化氮(NO)3天动态释放量探索其抗炎的作用机制。结果:二甲苯致小鼠腹部毛细血管通透性影响试验中,光叶菝葜醇提物(7g/kg)及其乙酸乙酯部位(7g/kg)均能显著减少染料的渗出量,抑制率分别为29%和34%。而在小鼠棉球肉芽肿试验中,光叶菝葜醇提物(7g/kg)及其乙酸乙酯部位(7g/kg)均能显著减少肉芽肿的增生,抑制率分别为43%和52%。在大鼠急性炎症试验中,光叶菝葜醇提物(7g/kg)及其乙酸乙酯部位高(0.4g/kg)、中(0.2g/kg)、低(0.1g/kg)剂量在致炎后的72h中均能抑制大鼠致炎足肿胀度,显著降低血清中一氧化氮(NO)的含量。结论:黔产光叶菝葜的抗炎有效部位为乙酸乙酯部位,其作用机制可能是通过抑制机体中一氧化氮(NO)的释放。     

开心散对慢性应激抑郁模型大鼠学习记忆的影响

目的:研究经典古方开心散对慢性应激抑郁模型(CMS)大鼠学习记忆能力的影响及可能的作用机制。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(盐酸氟西汀10 mg.kg-1)、开心散各剂量组(1 000,500,250,125 mg.kg-1),建立CMS大鼠模型,连续灌胃21 d;采用糖水消耗试验、旷场试验评价开心散抗抑郁行为学活性,采用Morris水迷宫评价开心散对CMS大鼠学习记忆能力的影响,并测定各组大鼠全脑中单胺类递质、乙酰胆碱(Ach)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和海马中脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白水平。结果:行为学测试结果表明开心散能明显提高CMS大鼠的糖水偏嗜度和旷场试验总路程,明显缩短Morris水迷宫定位导航的潜伏期,增加空间探索中的穿越平台次数、原平台所在象限游泳距离和时间;增加动物全脑中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)和Ach的含量,并提高海马内BDNF的水平,减少AchE。结论:开心散可明显改善CMS大鼠的抑郁行为,增强CMS大鼠学习记忆的能力,其作用的机制可能与增加全脑中单胺递质和Ach含量,提高海马神经营养能力有关。     

二氢石蒜碱对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用

目的:探讨二氢石蒜碱(DL)对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法:用H2O2(200μmol.L-1)处理PC12细胞建立氧化应激模型,并加入二氢石蒜碱预处理作为保护。噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞存活率和细胞损伤程度,利用荧光探针DCFH-DA和JC-1分别检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位。结果:H2O2作用于PC12细胞后,细胞存活率下降,LDH活性和ROS含量增高,线粒体膜电位降低,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.01);10-7～10-5mol.L-1DL预处理后,细胞存活率提高,LDH和ROS变低,线粒体膜电位回升,且在一定范围呈剂量依赖性。结论:DL对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与减少ROS产生和稳定线粒体膜电位有关。     

黑骨藤镇痛抗炎作用活性部位筛选

目的 研究苗药黑骨藤镇痛抗炎作用的活性部位。方法 小鼠随机分为空白组、阿司匹林组及黑骨藤水、正丁醇、氯仿、醋酸乙酯、石油醚提取部位的低、高剂量组。除空白组外,各组ig给药,空白组ig生理盐水。采用扭体法观察记录给药后15 min内小鼠扭体次数。采用热板法测定小鼠的痛觉反应时间。采用耳廓肿胀法检测小鼠耳廓肿胀度。采用棉球肉芽肿法：观测小鼠肉芽湿质量和干质量。结果 黑骨藤各提取部位对醋酸诱发小鼠扭体反应有显著的镇痛作用,其中黑骨藤正丁醇提取部位高剂量组效果最好,其疼痛抑制率为80.2%。黑骨藤正丁醇提取部位对热板法致痛有显著的镇痛作用,与空白组比较,能显著提高小鼠的痛阈值（P<0.05、0.01）。黑骨藤水、醋酸乙酯、石油醚提取部位对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的急性炎症有显著的抗炎作用,能明显减少小鼠耳廓肿胀度。黑骨藤各提取部位对小鼠肉芽湿质量和干质量均有抑制作用,其中正丁醇提取部位效果最好。结论 黑骨藤具有良好的镇痛抗炎作用。其中,正丁醇部位镇痛作用最好。     

MMP-2、TIMP-2、Ki-67在库肯勃氏瘤中的表达及意义

目的 :探讨MMP 2、TIMP 2、Ki 67表达与库肯勃氏瘤病理生物学行为的关系。方法 :采用免疫组化SP法对 32例库肯勃氏瘤组织和 10例正常卵巢组织进行MMP 2、TIMP 2和Ki 67表达的检测。结果 :MMP 2、TIMP 2、Ki 67在库肯勃氏瘤组织中的表达量显著高于正常卵巢组织 (P <0 .0 1)。有合并转移的库肯勃氏瘤中MMP 2、Ki 67高于无合并转移者 (P <0 .0 5 ) ,TIMP 2低于无合并转移者 (P <0 .0 5 )。MMP 2、Ki 67与术后生存时间呈负相关 (P <0 .0 1) ,TIMP 2与术后生存时间呈正相关 (P <0 .0 1)。结论 :MMP 2、TIMP 2、Ki 67在库肯勃氏瘤发生、发展中起重要作用 ,可作为判断卵巢转移癌恶性程度、临床分期和评估预后的临床参考指标     

脱氧葡萄糖-正电子发射计算机断层显像对颈淋巴结转移癌的诊断价值

目的：探讨脱氧葡萄糖-正电子发射计算机断层[^18F-FDG-PET／CT（PET／CT）]融合显像对颈淋巴结转移癌的诊断价值。方法：对照颈淋巴结清扫术后病理结果,回顾性对比分析20例头颈癌患者颈部正电子发射断层（PET）、CT及PET／CT资料。结果：PET对颈淋巴结转移癌的诊断敏感性、特异性及准确度分别为92.3％、85.7％、90.0％,CT分别为77.0％、57.1％、70.0％,PET／CT分别为92.3％、100.0％、95.0％,PET／CT的诊断准确度显著高于CT（P〈0．05）、略优于PET。13例鼻咽癌放疗后患者,CT诊断正确7例,PET／CT诊断正确12例。7例N。患者颈淋巴结清扫术后病理证实4例存在颈淋巴结转移,术前PET／CT均诊断正确。结论：PET／CT融合显像对颈淋巴结转移癌的诊断价值优于单独的PET及CT,尤其对于治疗后的患者,其诊断优势更加突出,有望作为是否需行颈淋巴结清扫术的指征。     

经皮椎弓根钉内固定治疗高龄患者腰椎退变性滑脱所致腰痛的临床研究

目的观察经皮椎弓根钉治疗高龄老人腰椎退变性滑脱所致腰痛的临床疗效。方法201O年4月～2013年8月28例腰椎退变性滑脱所致腰痛的高龄老人,采用经皮椎弓根钉内固定实施治疗,对比术前、术后1周、术后6个月视觉模拟评分（VAS）和功能障碍指数（ODI）,记录手术时间及术中出血量,评价临床疗效。结果本组28例患者,术前视觉模拟评分（VAS）为（7．61±1．22）分,功能障碍指数（OO!）为（53．12±3．32）分：采用经皮椎弓根钉内固定治疗,术后1周内均带护腰支具下地活动,下地后术前腰痛症状消失或明显缓解,术后2周伤口甲级愈合并拆线。术后1周VAS为（2．30±0．98）分,0DI为（7．64±1．23）分;平均手术时间130分钟,平均出血量110ml。所有患者均获得随访,随访时间6个月,随访时VAS为（2．12±1．33）分,ODI为（8．46±2．20）分。结论经皮椎弓根钉内固定治疗高龄老人腰椎退变性滑脱所致腰痛疗效确切。