重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程，原核表达载体pBlue-BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切，重组成BMP7的腺病毒载体，并转染293细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno-BMP7经限制性内切酶PI-SeeⅠ和Ⅰ-CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段，PCR扩增得到特异的扩增片段，表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功，其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno-Lac-Z的体外转染骨髓基质干细胞(BMSCs)，染色表明转染率可达90％以上；RT-PCR、免疫组化证明Adeno-BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达；转染Adeno-BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后，X光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成，与没转染Adeno-BMP7的BMSCs有显著差异。     

绿色荧光蛋白－逆转录病毒的包装、筛选及克隆技术

绿色荧光蛋白—逆转录病毒(GFP-RV)基因载体,可用于组织工程研究中的细胞标记,具有良好的效果。由于GFP-RV是个假病毒,需要经过一系列     

地塞米松与TGFβ1对骨髓基质细胞增殖、分化及代谢的影响

目的　明确地塞米松与转化生长因子 β1对骨髓基质细胞增殖代谢及向软骨细胞分化的影响 ,为应用骨髓基质细胞构建组织工程化软骨提供技术参数。方法　抽取猪股骨骨髓 ,分离有核细胞 ,体外培养扩增并分别加入地塞米松 (40ng/ml)或地塞米松 (40ng/ml)与转化生长因子β1(10ng/ml)联合诱导。通过细胞计数及MTT法检测不同诱导因子对骨髓基质细胞增殖的影响 ,透射电镜观察不同诱导组细胞代谢功能的变化 ,免疫组化、原位杂交、RT -PCR及Northernblott等检测Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达量的差异。结果　加入地塞米松后细胞增殖能力受到轻度抑制 ,而同时加入地塞米松与转化生长因子 β1后 ,细胞生长明显受抑制。电镜下可见随诱导因子的增加 ,细胞变得肥大 ,细胞器丰富 ,功能活跃。Ⅱ型胶原及蛋白聚糖的表达在联合诱导组明显增强 ,且随诱导时间的延长 ,Ⅱ型胶原mRNA表达量也显著增加 (P <0 .0 1)。结论　地塞米松与转化生长因子β1能有效地诱导骨髓基质细胞表达软骨细胞特征性蛋白 ,但对细胞的增殖及代谢也产生明显的影响 ,在骨髓基质细胞构建组织工程化软骨时 ,应充分调整好诱导与增殖的关系