抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定,观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin,分别采用Biosep-sec-s 2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5％浓缩胶,12％分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定,将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合,测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400,由两个亚基组成,相对分子质量分别为14400和17000,能显著地延长PT和APTT,对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒,能分离出纯度高的组分acoagulatin,该组分具有抗凝活性。     

环孢菌素A对体外NIT-1胰岛β细胞增殖及其增殖相关基因表达的影响

目的 观察环孢霉素A(CsA)对体外培养的NIT-1胰岛β细胞增殖和pol αl mRNA表达的影响。方法 用MTT法检测不同浓度的CsA(0．05～10μmol／L)作用48和72h后NIT-1胰岛β细胞增殖的情况。利用半定量RT-PCR法检测10μmol／L CsA处理NIT-1胰岛β细胞48h后pol αl在mRNA水平上的表达。结果 CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞的增殖，且与时间、剂量正相关。另外，CsA还下调了pol αl mRNA的表达。结论 CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞增殖．其机制可能与下调pol αl mRNA表达有关。     

HIV-1 CRF07_BC毒株gp41 NHR结构域N51的表达及结构分析

目的对来源于HIV-1中国流行株CRF07_BC的包膜糖蛋白gp41NHR结构域的N51进行表达和结构及抗原性分析。方
法运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,并进行核苷酸序列测定。利用生物
信息学软件、圆二色谱法、免疫印迹法对表达的N51FdFc-BC重组蛋白进行结构和抗原性分析。结果成功构建pFUSE/
N51Fd-BC表达载体,并在真核表达体系实现了目的蛋白的高效表达。免疫印迹结果显示该重组蛋白大小约为35000,可与抗
HIV-1gp41N/C多肽的抗体反应。生物信息学分析显示N51FdFc-BC重组蛋白相对分子质量为34315.1,等电点PI为7.59,且
形成了无规则卷曲结构,易于与抗体反应,可作为抗原。圆二色谱的分析与生物信息学软件预测的结果一致。结论
N51FdFc-BC重组蛋白具有无规则卷曲结构,可适合作为HIV-1亚单位疫苗的免疫原。
     

丙戊酸钠慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞GAT-3及GABA-TmRNA表达的影响

目的通过研究丙戊酸钠(VPA)慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞γ-氨基丁酸转运体-3(GAT-3)和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T) mRNA表达水平的影响,从星形胶质细胞的角度来探讨VPA的停药反跳机制。方法用含50 mg/L VPA的DMEM培养基将C6细胞培养2周后制成VPA慢性作用模型,采用半定量RT-PCR方法检测VPA慢性作用及停药后对C6神经胶质瘤细胞GAT-3和GABA-T mRNA表达水平的变化。结果(1)在VPA慢性作用下,相对灰度值(RV值,即GAT-3、GABA-T电泳条带与相应的β-actin灰度积分的百分比)为(39.1±0.5)%,低于正常对照组的(46±1.3)%;各停药组的RV值均低于VPA慢性作用组,其中停药24 h组的最低,为(11.7±1.6)%,停药30 min组的最高,为(38.9±0.6)%;而停药48 h组又升高到(33.5±1.1)%。(2)VPA慢性作用组[RV值为(71.31±6.91)%]与对照组[RV值为(34.77±3.26)%]相比,GABA-T mRNA表达明显上调;各停药组与VPA慢性作用组相比GABA-T mRNA的表达明显下调,其中停药12 h组[RV值为(25.36±7.68)%]降至最低。结论VPA慢性作用可使GAT-3 mRNA的表达下调,使GABA-T mRNA表达上调。VPA慢性作用后停药造成的GAT-3和GABA-T mRNA表达水平的波动可能与VPA停药反跳有关。     

链脲佐菌素糖尿病模型动物血糖及体征动态变化的研究

目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin)糖尿病模型动物血糖和体征动态变化的特点.方法 链脲佐菌素1次或多次腹腔注射,分别建立大鼠和小鼠糖尿病模型;检测血糖变化,以进食量(g)/体质量(g),饮水量(ml)/体质量(g)计算进食量系数和饮水量系数.结果 雄性大鼠链脲佐菌素60 mg/kg糖尿病成模率为65.0%,血糖在注射后15 d达到高峰,15～25 d保持在较高水平,25d后出现明显的下降.小鼠链脲佐菌素200 mg/kg分5次建立糖尿病成模率为90.0%,血糖的动态变化与大鼠类似,但血糖下降不明显.在这两个糖尿病模型中,动物的饮水量系数变化与血糖水平变化的相关性最高,相关系数r＞0.97.结论 链脲佐菌素糖尿病模型动物的血糖水平在造模开始后的15～25 d维持在较高水平,可作为观察降血糖药物疗效的适宜时段.饮水量系数是反映血糖的水平变化的适宜指标.     

超氧化物歧化酶抑制精液来源的病毒增强因子形成的研究

目的·探究超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)对精液来源的病毒增强因子(semen-derived enhancer of viral infection,SEVI)淀粉样纤维形成的抑制作用.方法·将440μmol/L的前列腺酸性磷酸酶248-286(prostatic acid phos...     

健体I号水煎剂及多糖对运动性疲劳大鼠自由基的影响

目的:通过健体Ⅰ号水煎剂及多糖成分对运动性疲劳大鼠自由基的影响,探讨中药复方健体Ⅰ号对运动性疲劳的预防作用及主要作用部位。方法:30只SD大鼠随机分为对照组、水煎剂组、多糖组。各组大鼠进行3周每天4小时的游泳训练,每日游泳前30分钟水煎剂组按16.8g·kg-1·d-1剂量灌服健体Ⅰ号水煎液;对照组灌服等量生理盐水;多糖组按1.1g·kg-1·d-1剂量灌服健体Ⅰ号多糖水溶液。3周后取样测定血清超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量;取肝组织测肝糖元、取右后肢股四头肌测肌糖元含量。观察运动性疲劳大鼠自由基及糖元的变化及中药复方健体Ⅰ号水煎液及多糖成分对上述指标的影响。结果:水煎剂组较对照组能明显提高血清中SOD活性(P0.01),多糖组无明显差异;而对照组的血清中MDA含量明显高于水煎剂组及多糖组(P0.01),水煎剂组的血清MDA的含量较多糖组低(P0.05);对照组的糖元含量明显低于水煎剂组及多糖组(P0.05,P0.01)。结论:健体Ⅰ号水煎液及多糖成分有明显的抗氧化功能,对运动性疲劳有较好的治疗作用。     

一种新的多糖——链霉菌多糖的分离与结构确证

目的从链霉菌发酵液中分离纯化出一种新的多糖--链霉菌多糖(streptomyces polysaccharide,SMP),并进行结构确证.方法采用乙醇沉淀多糖类大分子物质、Sevage法去蛋白、DEAE-纤维素离子交换层析法及Sephadex G-25 凝胶过滤法纯化多糖.其结构经HPLC、UV、IR、1H-NMR以及高碘酸氧化、Smith降解等方法进行测定.结果分离纯化出的多糖属于中性多糖,相对分子质量约为4855道尔顿;单糖组成以葡萄糖为主,含有少量果糖,二的摩尔比约为22:1(10.96:0.48);糖苷键的链接方式为(1→6)-α-D-吡喃型;命名为SMP.结论从链霉菌发酵液中分离纯化出的多糖SMP是以1→6位键合的α-D-吡喃型多糖.     

抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定。观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析，从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin，分别采用Biosep-sec-S2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5％浓缩胶，12％分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定，将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合，测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400，由两个亚基组成，相对分子质量分别为14400和17000，能显著地延长PT和APTT，对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒，能分离出纯度高的组分acoagulatin，该组分具有抗凝活性。