反义磷脂酰肌醇3-激酶寡脱氧核苷酸抑制白介素-1诱导的NF-κB活化

目的　研究反义磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI 3 激酶 )寡脱氧核苷酸 (oligodeoxynucleotides,ODN)对核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　Lipofectin介导反义PI 3 激酶ODN转染HepG2细胞 ,以逆转录PCR法检测PI 3 激酶mRNA表达水平 ,用SandwichELISA法检测NF κB的活化。结果　(1)反义PI 3 激酶ODN抑制PI 3 激酶mRNA表达。 (2 )反义PI 3 激酶ODN呈剂量 (1～ 8μg)和时间 (5～ 2 4h)依赖性地抑制NF κB活化 ,2 μg反义PI 3 激酶ODN与细胞共孵育 8h时抑制效果最好。结论　反义PI 3 激酶ODN通过阻断PI 3 激酶表达抑制NF κB活化 ,预示反义PI 3 激酶ODN可潜在抑制IL 1的炎症活性     

反义白介素-1受体相关激酶-1寡核苷酸抑制白介素-1诱导的NF-κB活化

目的 :研究反义白介素 1受体相关激酶 1(IRAK 1)寡核苷酸对核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法 :Lipofectin介导反义IRAK 1寡核苷酸转染HepG2细胞 ,以逆转录PCR法检测IRAK 1mRNA表达水平 ,用SandwichELISA法检测NF κB的活化。结果 :反义IRAK 1寡核苷酸抑制IRAK 1mRNA表达 ;反义IRAK 1寡核苷酸呈剂量 (1～ 8μg)和时间 (5～ 2 4h)依赖性地抑制NF κB活化 ,反义IRAK 1寡核苷酸 4μg与细胞共孵育 8h时抑制效果最好。结论 :反义IRAK 1寡核苷酸通过阻断IRAK 1表达抑制NF κB活化 ,预示反义IRAK 1寡核苷酸可潜在抑制IL 1的炎症活性。     

IL-1R相关激酶-1和磷脂酰肌醇3-激酶协同调控IL-1诱导的NF-κB活化

为研究IL 1R相关激酶 1(IRAK 1)和磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI 3 激酶 )在IL 1诱导NF κB活化中的作用 ,本文采用Lipo fectin介导反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸转染HEpG2细胞后 ,用Western杂交检测IRAK 1和PI 3 激酶表达水平 ,以SandwichELISA法检测NF κB的活化。结果表明 ,①反义IRAK 1寡核苷酸和反义PI3 激酶寡核苷酸分别抑制IRAK 1和PI3 激酶表达 ;②反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸部分抑制NF κB活化 ;③与反义IRAK 1寡核苷酸或反义PI 3 激酶寡核苷酸单独转染HEpG2细胞相比 ,反义IRAK 1寡核苷酸和反义PI 3 激酶寡核苷酸共转染HEpG2细胞对NF κB的抑制作用明显增强。表明IRAK 1或PI3 激酶调控NF κB活化但不能完全激活NF κB ,IRAK 1和PI3 激酶在调控NF κB活化时协同作用。     

中药杜仲抗HIV作用的实验研究

目的 观察中药杜仲及其单体化合物抗HIV作用,为寻找新的有效治疗艾滋病药物提供实验依据。方法 用植物化学的方法从中药杜仲中提取单体化合物;以HIV病毒感染的MT4细胞为实验模型,以病毒引起合胞体的产生为评价指标,观察药物的作用。结果 从中药杜仲中获得6个单体化合物,其中氯原酸、咖啡酸、表儿茶素、儿茶素等4个单体化合物可有效保护病毒感染的细胞,使其不产生病变。咖啡酸和儿茶素的效果尤为显著,IC50值均为50μg.mL^-1。结论 杜仲提取物及其单体化合物具有抗HIV作用,儿茶素作用为新的发现。     

二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝原代细胞保护作用的研究

目的　采用肝原代细胞培养及四氯化碳损伤法 ,观察 1 ,5 二 O 二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的保护作用 ,并通过体外实验初步探讨二咖啡酰奎宁酸保护肝细胞的作用机制。方法　采用肝细胞消化酶两步灌注法 ,肝细胞消化液消化肝细胞 ,梯度离心分离肝细胞 ,细胞获得量为 (1 - 1 0 )× 1 0 7·ml-1 ,肝细胞活力在 90 %以上 ,以此为靶细胞。并利用四氯化碳损伤方法制造肝细胞损伤模型。分别采用3 H -胸腺嘧啶 (3 H -TdR) ,3 H -脯氨酸 (3 H -Pro)掺入 ,流式细胞术等方法 ,观察二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的增殖、活力、凋亡及细胞周期等的影响 ,并测定天门冬氨酸转移酶活性。结果　二咖啡酰奎宁酸在 7.8～ 2 5 0mg·L-1浓度对肝细胞无明显毒性作用 ,能促进正常及四氯化碳损伤的肝细胞增殖及增强细胞活力 ,降低细胞上清的天门冬氨酸转移酶 (AST)活性 ,抑制四氯化碳引起的肝细胞凋亡以及改变受损细胞周期。结论　二咖啡酰奎宁酸具有显著的肝细胞保护作用 ,其作用机制为促进肝细胞的增殖及活力 ,抑制受损肝细胞的凋亡 ,并可明显降低天门冬氨酸转移酶水平     

苦碟子注射液对大鼠肝纤维化模型肝脏MMP-1、TIMP-1的影响

目的观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1表达,以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系,以及苦碟子注射液和大黄虫丸对它们的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组与苦碟子注射液高剂量组、苦碟子注射液低剂量组和大黄虫丸组,采用40%CC l4橄榄油溶液造模(0.15 mL/100 g),2次/周,并从实验第3周开始给大鼠用20%乙醇灌胃(1 mL/100 g),隔天1次造模。造模结束给予苦碟子注射液高低剂量和大黄虫丸治疗,12周末在股动脉处取血,取肝脏标本。采用HE方法检测模型对照组和各给药组病理变化情况、血清PCⅢ水平变化。免疫组织化学法检测肝组织MMP-1、TIMP-1。结果模型对照组及各给药组与正常对照组比较均呈程度不同的病理损害,MMP-1、TIMP-1表达均显著增高(P均0.05),且TIMP-1表达明显高于MMP-1表达。各给药组与模型对照组比较,MMP-1表达均无显著性差异(P均0.05),TIMP-1表达却均明显减少(P均0.05)。结论肝脏炎症活动及纤维化会出现程度不同的病理损害,可能与MMP-1及TIMP-1表达明显失衡有关。苦碟子注射液及大黄虫丸治疗对其有一定的抑制作用。     

肃肺润肠汤对药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、5-HT变化的实验研究

目的 探讨肃肺润肠汤对药物依赖性便秘大鼠大肠杯状细胞、5-HT的变化.方法 清洁级SD大鼠45只,随机分为正常对照组(n=15),大黄模型组(n=15) 和大黄模型治疗组(n=15)以下分别简称对照组、模型组、治疗组.除对照组外,模型及治疗组先建立大鼠药物依赖性便秘模型,在模型基础上,治疗组大鼠给予肃肺润肠汤灌胃治疗,再采用普通组织学、免疫组织化学SABC法和细胞计数进行研究在给中药复方前后的大鼠大肠杯状细胞、5-HT免疫反应细胞的形态分布及数量的变化.结果 与模型组比较,治疗组大肠杯状细胞、5-HT细胞数量均增加,差异非常显著(P＜0.01),且后者免疫染色强度增强.结论 肃肺润肠汤可以提高药物依赖性便秘大鼠肠道杯状细胞、免疫反应细胞5-HT的形态分布和数量,从而促进胃肠蠕动,改善胃肠道的传输功能.     

鼻针并中药外敷结合功能锻炼治疗肩关节周围炎疗效观察

目的：观察应用鼻针并中药外敷结合功能锻炼治疗肩关节周围炎的治疗效果,以探索治疗肩关节周围炎的新途径。方法：180例肩关节周围炎患者,随机分成两组。A组90例采用鼻针加中药外敷结合功能锻炼。B组90例采用口服美洛昔康片（15mg,2次/日）与痛舒胶囊（1.2g,3次/日）;12天为1疗程。同时结合功能锻炼。3个疗程后观察疗效。结果：A组90例中痊愈80例,占89%;显效10例,占11%;B组90例中痊愈54例占60%,显效36例占40%。两组痊愈率比较,差异有非常显著性（P〈0.01）,A组明显优于B组,说明鼻针加中药外敷结合功能锻炼治疗肩关节周围炎是一种较理想的治疗方法。     

紫外线照射所致的DNA损伤对连接转化的影响

目的探讨DNA经不同波长紫外线照射与经紫外线照射不同时间所致损伤对基因库构建中DNA连接转化效率的影响。方法经改造的质粒DNA使用SfiI酶切过夜,1%琼脂糖凝胶电泳分离,在不同波长不同时间紫外线照射的条件下回收目的片断,并进行目的片断的连接转化,计数菌落数,计算转化效率。结果经302nm波长紫外线照射后,其连接转化的菌落数极少(60个/ngDNA),365nm波长紫外线照射条件下回收的DNA仍可被有效连接转化。在365nm波长紫外线照射下,与未经照射进行比较,当照射时间在30min,其连接转化成功率低于50%,而照射5min、15min的连接转化成功率仍高于70%,可满足大部分分子生物学实验的需要。回收的DNA连接转化的最大效率可超过20000个菌落/1ngDNA。结论在构建大容量基因库回收目的片断时,应避免紫外线的照射;在需要时,应选择在365nm波长紫外线照射条件下进行,且照射时间应尽量缩短,以不超过15min为宜。     

柚皮苷抑制高糖诱导的脐静脉内皮细胞与单核细胞的粘附作用

目的研究柚皮苷对高糖诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)与单核细胞的粘附的抑制作用及机制。方法分离培养HUVECs后,采用不同剂量的柚皮苷预处理HUVECs,然后高糖诱导HUVECs;加入荧光染料标记单核细胞系THP-1细胞与HUVECs共同孵育,荧光显微镜下观察HUVECs与单核细胞的粘附作用并拍照,比较粘附密度;提取总蛋白后,Western blotting检测处理后HUVECs粘附分子的表达;荧光染料结合法检测处理后HUVECs活性氧的产生;提取处理的脐静脉内皮细胞核蛋白后,Western blotting检测核因子-κB在核内的量。结果高糖诱导HUVECs与单核细胞的粘附,柚皮苷可显著抑制高糖诱导的HUVECs与单核细胞的粘附。柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs细胞间粘附分子和血管内皮细胞粘附分子的表达,柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs活性氧产生,柚皮苷抑制高糖诱导的HUVECs核因子-κBp65活化。结论柚皮苷可能通过抑制高糖诱导的HUVECs活性氧产生,从而抑制核因子-κB的活化,进一步抑制细胞间粘附分子和血管内皮细胞粘附分子的表达,影响HUVECs与THP-1细胞的粘附,从而抑制高糖诱导的血管炎症...