人转化生长因子β1重组腺病毒转染传代髓核细胞对细胞外基质合成的影响

目的探讨人转化生长因子融（transforming growthfactorβ，TGF-β1）对传代羊髓核细胞的细胞外基质（extracellular matrix，ECM）和DNA合成调节因子的作用。方法取1岁龄成年山羊腰椎间盘，体外分离培养羊髓核细胞，传至第3代后以携人TGF-β1（humanTGF-β1，hTGF-β1）或lacZ基因的复制缺陷型腺病毒（Ad／hTGF—β1及Ad／lacZ）感染，分别为实验组和阴性对照组；未加病毒液的细胞为空白对照组；原代髓核细胞为原代组。然后继续单层或藻酸钙凝胶三维（3-D）培养10d。对两种系统培养的细胞分别行DNA荧光定量、Westernblot分析和蛋白多糖（glycosaminoglycan，GAG）定量检测。结果DNA荧光定量显示，单层培养时实验组细胞的DNA合成显著高于两对照组（P〈0．05），藻酸钙凝胶3-D培养各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Western blot检测hTGF—β1、Ⅱ型胶原、Ⅰ型胶原和Aggrecan的表达显示，两种培养系统中，实验组hTGF—β1、Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达均显著高于两对照组（P〈0．05），Ⅰ型胶原的表达显著低于两对照组（P〈0．05），实验组Ⅱ型胶原／Ⅰ型胶原比值较两对照组显著增高（P〈0．05）。GAG定量结果显示，两种培养系统中实验组细胞的GAG合成均显著高于两对照组（P〈0．05）。结论hTGF-β1在很大程度上可起到维持髓核细胞表型，并在细胞传代后仍发挥表型的调节作用。通过基因工程方法使髓核细胞表达hTGF—β1，有望遏制、甚至逆转椎间盘退变；而以Ad／hTGF—β1感染过的髓核细胞，在藻酸钙凝胶3-D培养系统中培养则表现出原始表型。     

前后椎间隙比判断腰椎不稳的可行性分析

目的探讨动力位摄X线片前后椎间隙比判断腰椎不稳的可行性。方法采用前后椎间隙比法对经传统方法诊断为腰椎不稳(18例)和无腰椎不稳患者(18例)的动力位X线片张口状改变角度进行测量。结果腰椎不稳病例中有16例阳性,2例阴性;正常者中有3例阳性,15例阴性。结论前后椎间隙测量比方法可用于腰椎节段不稳的判断。     

髌股关节对合不良的关节镜下双极射频治疗

目的探讨关节镜下应用双极射频治疗髌股关节对合不良的技术及其早期疗效.方法42例(47膝)经X线检查证实有髌股关节对合不良的膝前痛患者接受关节镜下应用双极射频进行的软骨成形术和外侧支持带松解术.术中采用Outerbridge分级法对软骨病变进行分级.术后37个膝获得随访,平均随访18.3个月.手术前后采用Kujala髌股关节评分法比较髌股关节功能恢复情况,并通过MRI测量23个膝关节的髌股关节软骨面的对合角度.结果软骨病变Outerbridge Ⅰ级的6膝,手术前后髌股关节评分为60.83±3.54和82.50±9.22,差异有统计学意义(P＜0.001);Ⅱ级的13膝手术前后评分为61.77±8.40和79.69±10.47,差异有统计学意义(P＜0.001);Ⅲ级的11膝手术前后评分为53.27±7.42和61.09±7.58,差异有统计学意义(P＜0.05);Ⅳ级的7膝手术前后评分为47.29±5.79和52.14±8.30,差异无统计学意义(P＞0.05).手术前后总的评分55.86±9.39和69.41±14.89,髌股关节功能明显改善(P＜0.001).手术前后MRI对比软骨性倾斜角(Tac)为14.07°±3.30°和11.71°±2.29°,软骨性适合角(Cac)为18.51°±10.61°和13.31°±9.17°,软骨性外侧髌股角(LPFac)为8.50°±1.94°和13.59°±2.48°,软骨性外侧移动度(LPDc)为(4.29±2.36)mm和(1.75±1.56)mm,这四项指标差异均有统计学意义(P＜0.001).结论针对不同退变程度的软骨应用适当的双极射频技术,结合关节镜下外侧支持带松解术,可以有效恢复软骨面的平整性并改善髌股关节的对合,从而改进髌股关节的功能.     

人胰岛素样生长因子I基因转染骨髓基质细胞的实验研究

目的检测人胰岛样生长因子Ⅰ基因转染骨髓基质细胞的效果及目的基因的表达情况,寻找一种改良组织工程种子细胞的新方法。方法抽取成年雄性山羊髂嵴骨髓,贴壁分离法接种培养骨髓基质细胞,检测细胞生长特性。取第2代细胞,按3∶1比例用FuGene6转染试剂介导,将重组真核表达质粒pIRES2 EGFP hIGF Ⅰ(EGFP为增强绿色荧光蛋白,hIGF Ⅰ为人胰岛素样生长因子Ⅰ)转染骨髓基质细胞,转染后4~72h和传代后分别用倒置荧光显微镜观察标志基因增强绿荧光蛋白的表达情况,计算转染效率。酶联免疫吸附试验检测培养上清液中hIGF Ⅰ的浓度变化。转染细胞爬片行hIGF Ⅰ免疫组化染色检测hIGF Ⅰ的表达。提取转染后48h的细胞总RNA,RT PCR检测hIGF Ⅰ和内核糖体进入位点(IRES)的表达。收集转染前及转染后48h的细胞行流式细胞仪检测细胞周期分布及荧光表达情况。结果成年山羊骨髓基质细胞在接种后24h开始贴壁,伸展成长梭形,原代细胞呈集簇状分布。在转染后4h即有细胞表达绿色荧光蛋白,荧光强度和表达细胞总数在48h达高峰, 72h时见部分细胞荧光强度下降,传代后仍可观察到EGFP的表达。转染后4~72h转染上清液中分泌hIGF Ⅰ的浓度呈逐渐上升趋势,在72h最高可达34 75ng/ml。转染后部分细胞形态发生变化。hIGF Ⅰ免疫组化染色证实在胞浆中     

单边外固定器治疗骨折并发症分析

外固定器治疗骨折是骨科医生的常用治疗手段之一。具有操作简便，损伤小，有利于开放创面的处理等优点，应用日趋广泛。因随着应用的增加，也出现了一系列的并发症，影响治疗和预后。本文就使用单边外固定支架治疗骨折产生的各种并发症原因进行分析，并提出防治措施。１临...     

椎间盘组织工程研究进展

1999年，Nishida等。报道以携LacZ标志基因的重组腺病毒（Ad-LacZ）注射入兔髓核内，实现了目的基因的表达。此前的研究显示，携hTGF-β1基因的重组腺病毒（AdhTGFβ1）直接椎间盘内注射也可在体内高表达并使椎间盘内的蛋白多糖合成增加。此后，众多的基因转移载体被构建并应用于椎间盘退变的基因治疗研究，其中以腺病毒和逆转录病毒载体最为常用。     

可注射性藻酸钙凝胶修复整合兔膝关节骨软骨缺损实验研究

目的: 使用骨髓基质干细胞 (BMSCs)、藻酸钙及两种生长因子, 修复兔股骨内髁负重区骨软骨缺损, 寻找合适的关节骨软骨缺损修复方法。方法: 将藻酸钙、体外培养扩增的自体BMSCs及IGF I TGF β复合材料注射于兔膝关节股骨内髁负重区上的骨软骨缺损。结果: BMSCs在藻酸钙中能分化为软骨细胞和成骨细胞, 材料无毒副作用; 关节骨软骨缺损后注入BMSCs 藻酸钙 IGF I TGF β复合体, 各期修复较对照组均有统计学意义 (P<0. 05)。结论: 藻酸钙能为BMSCs提供良好三维生长环境并能使之保持正常形态; BMSCs 藻酸钙 IGF I TGF β复合体能用于关节骨软骨急性缺损修复, 形成正常透明软骨样结构, 软骨下骨修复良好。     

关节镜下经皮改良张力带固定治疗髌骨骨折临床研究

目的　研究探讨髌骨骨折在关节镜下复位 ,经皮改良张力带固定的临床应用。方法　 33例新鲜髌骨骨折 ,其中横行骨折 9例 ,纵行骨折 3例 ,下极骨折 6例 ,粉碎性骨折 15例。成功 2 7例 ,失败 6例。手术通过关节镜清理关节腔内血凝块、碎骨块和骨折块之间嵌顿的软组织 ,关节镜直视下观察骨折情况以指导骨折复位固定。在C臂X线透视下帮助骨折复位 ,关节镜观察关节面复位平整后 ,经皮平行打入两枚克氏针固定骨折块 ,皮下导入钢丝行改良张力带固定。结果　平均随访 16 .4个月 ,骨折愈合时间最短 6周 ,最长 10周 ,平均 7.3周。根据胥少汀综合评分法 ,优 2 4例 ,良 3例 ,中、差均无。结论　关节镜下经皮改良张力带固定治疗髌骨骨折为治疗新鲜髌骨骨折提供了一种新的治疗方法。具有手术创伤小 ,生理干扰小 ,可清除关节腔内血凝块、碎骨块 ,手术感染机会小 ,关节面复位好 ,固定坚强 ,早期功能锻练 ,术后功能恢复好等优点     

藻酸钙凝珠复合骨髓基质细胞的体外培养

目的 :藻酸钙凝珠复合骨髓基质细胞经体外培养扩增后行细胞活力、组织形态学和电镜超微结构观察 ,探讨其应用于组织工程软骨修复缺损的可能性。方法 :传代培养的骨髓基质细胞 ,复合藻酸钙制成凝珠 ,细胞密度为 1× 1 0 6 /ml,体外培养 4周后 ,行倒置相差显微镜、台盼蓝染色、甲苯胺蓝染色、透射电镜检查。结果 :骨髓基质细胞培养后大量扩增 ,与藻酸钙复合良好并能在其中保持活性及分裂能力。结论 :藻酸钙复合骨髓基质细胞用于组织工程方法修复软骨缺损 ,具有较强的可行性。