血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞生成CD34+细胞的研究

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ES-D3生成CD34 细胞的能力.方法:将ES-D3形成拟胚体,将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF 干细胞因子(stem cellfactor,SCF)的培养基中.实验分6组,分别为VEGF 5μg/L组、VEGF 10 μg/L组、VEGF 20μg/L组、VEGF 5μg/L SCF组、VEGF 10μg/L SCF组、VEGF20μg/L SCF组,同时设不加因子的自发分化对照组.RT-PCR检测CD34 mRNA的表达,流式细胞仪检测CD34 细胞的比例,甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力.结果:经过1周的诱导培养,实验组生成的细胞可以表达CD34 mRNA,CD34 细胞的比例也升高,并可形成造血祖细胞的集落.从CD34 mRNA的表达水平、诱导生成CD34 细胞的比例和生成的集落数量看,VEGFμg/L SCF组和VEGF 10μg/L SCF组的诱导效率最高.结论:VEGF能够促进ESC生成CD34 细胞,尤以与SCF合用时,其诱导效率更高.     

乳腺癌患者肿瘤细胞HLA表达及机体免疫状态的研究

目的 :探讨乳腺癌患者免疫状态和癌细胞组织相容性抗原 (HLA)Ⅰ类分子、Ⅱ类分子表达在肿瘤发生、发展和转移中的变化。方法 :于术前检测乳腺癌和乳腺纤维腺瘤患者外周血T淋巴细胞亚群比例 ,并应用流式细胞术检测癌组织和纤维腺瘤组织的HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子的表达情况。结果 :HLAⅠ类分子、HLAⅡ类分子在乳腺癌组织的表达均显著低于乳腺纤维腺瘤组织 ;HLAⅠ类分子在淋巴结转移组表达显著低于未转移组 ,更显著低于乳腺纤维腺瘤组 ;HLAⅠ类分子表达乳腺癌Ⅰ期显著高于Ⅱ期 ,Ⅱ期显著高于Ⅲ期 ;HLAⅡ类分子表达由I期到Ⅲ期呈降低趋势但在各期间差别不显著。乳腺癌患者外周血CD4 CD8 比值低于正常对照组 ,差异显著 ;CD4 CD8 I期显著高于Ⅲ期 ;但与Ⅱ期无显著差异 ;乳腺癌患者外周血CD3 、CD4 、CD8 淋巴细胞所占比例在各组、各期间均无显著差异。结论 :HLA分子的低表达与乳腺癌的发展、转移、预后有关 ;CD4 CD8 比值、HLAⅡ类分子可作为判断肿瘤预后的参考指标 ;HLAⅠ类分子表达降低程度和肿瘤恶化程度相一致 ,可作为反映肿瘤转移的参考指标。     

两种分离胎盘间充质干细胞方法的比较

目的：寻找从胎盘组织中分离培养间充质干细胞的最佳方法。方法：分别采用外植块贴壁法和酶消化法从胎盘组织中分离间充质干细胞,并对其形态、免疫表型、生长动力检测和多向分化能力进行检测。结果：流式细胞术和诱导分化实验表明酶液消化法分离得到的贴壁细胞表型符合间充质多能干细胞特征,且在合适诱导条件下能向造骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化,而外植块贴壁法获得的贴壁细胞弱表达CD29和CD105,仅能向脂肪细胞分化。结论：酶消化法可有效的从胎盘组织中分离间充质干细胞,增殖能力强,具备多向分化能力。     

脐血巨核系造血细胞的初步研究

用甲基纤维素法培养１５例新生儿脐血巨核系造血祖细胞（ＣＦＵ－Ｍｅｇ），观察了ＣＦＵ－Ｍｅｇ的生长特性、集落产率与接种细胞数的相关性，并与成人骨髓及外周血ＣＦＵ－Ｍｅｇ的数量进行了比较。结果表明，脐血中富含ＣＦＵ－Ｍｅｇ，且分裂快、子代细胞多，形成集落早呈现活跃的增殖状态，其数量低于成人骨髓但个体间差异明显，２６．７％的样本ＣＦ－Ｍｅｇ产率高于骨髓。接种细胞数量与ＣＦＵ－Ｍｅｇ的产率在一定范围内呈良     

骨髓间充质干细胞体外诱导和端粒酶活性的研究

目的:建立骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离、培养、纯化的方法,探讨其体外诱导条件和端粒酶活性。方法:取正常成人骨髓用含10%小牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增。流式细胞仪行细胞表面抗原检测,细胞化学染色鉴定其生物学特性,在特定培养条件下检测其向成骨和脂肪细胞分化的能力,采用TRAP(Telomerase repeat amplification protocol assay)-银染法测定其端粒酶的活性。结果:分离培养获得的贴壁细胞,碱性磷酸酶染色阳性。流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44、CD115、CD166表达阳性。经向成骨和脂肪细胞诱导3周后,可得到成骨和脂肪细胞,经茜素红染色、油红O染色得到证实。TRAP-银染法证实MSCs表达一定的端粒酶活性。结论:体外分离培养的MSCs可以向成骨、脂肪诱导分化,表达一定的端粒酶活性,具有干细胞的生物学特性。     

TPO和TGFβ1在儿童ITP发病中的意义

目的 :研究调控特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患儿巨核细胞和 (或 )血小板生成的细胞因子的变化。方法 :采用定量夹心酶联免疫测定技术检测 40例ITP患儿血清中的正向调节因子血小板生成素 (TPO)和负向调节因子转化生长因子 (TGF) β1 水平。结果 :①ITP患儿血清TPO水平与正常儿童相比仅轻度升高 (P =0 .0 65) ,但其中部分患儿 (55 % )的TPO浓度显著高于正常对照 ,其骨髓巨核细胞数较TPO正常组显著降低 (P=0 .0 0 7) ,绝大部分激素治疗效果较差 (P <0 .0 0 1 ) ;②再生障碍性贫血 (AA)患儿的血清TPO水平显著高于ITP患儿 (P <0 .0 0 1 ) ,且两组患儿TPO水平之间没有重叠 ;③ITP患儿血清TGF β1 水平显著高于正常对照(P <0 .0 0 1 ) ,而AA患儿的血清TGF β1 水平与对照组相比差异无显著性意义 (P =0 .51 2 ) ,但显著低于ITP患儿 (P <0 .0 0 1 )。结论 :检测ITP患儿的TPO及TGF β1 水平对其发病机制研究、鉴别诊断及治疗方法的选择均有重要价值     

艾拉莫德对骨关节炎滑膜成纤维样细胞特性的影响

目的观察骨关节炎(OA)滑膜成纤维样细胞(FLS)体外培养时生长、增殖特性,以及艾拉莫德(T-614)对其增殖能力的影响,探讨艾拉莫德的抗炎机制。方法噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪观察OA和滑膜正常者(NS)膝关节滑膜组织体外培养时FLS增殖能力和细胞周期的变化：用反转录-聚合酶链反应测定FLS的c-fos和COX-2表达情况,检测不同浓度T-614作用下FLS的细胞增殖、细胞周期和基因表达。结果OA和NS的FLS在体外培养时的生长活性、分化能力的差异无统计学意义。高剂量T-614对两种FLS的细胞存活分数(SF)的抑制作用差异无统计学意义,但与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0．05)。OA-FLS中加入1000 ml/L T-614可诱导细胞凋亡并抑制c-fos和COX-2表达,200 ml/L T-614延长G_1期而缩短S期。结论无炎症介质激活时,OA-FLS在体外未表现出高增殖潜能：高剂量的艾拉莫德对OA-FLS的增殖分化及表达有直接抑制作用,并通过此机制对OA滑膜炎进行免疫调节。     

红霉素对哮喘患者肺泡巨噬细胞介质释放功能的影响

探讨红霉素的抗哮喘的气道炎症作用。方法：对２６例发作期过敏性哮喘患者肺泡巨噬细胞进行体外分别加红霉素、地塞米松,生理盐水培养,测定培养上清液中血栓素Ｂ２、肿瘤坏死因子－α、白介素－８水平。     

脐血移植治疗难治性儿童白血病

目的：研究用HLA不合多个脐血移植治疗难治性儿童白血病。方法：选择难治性白血病患儿，给予强烈化学治疗杀灭残存白血病细胞，再用多个脐血混合移植解救严重抑制状态的骨髓，从而缓解白血病，延长生命。结果：治疗6例，年龄2．5一16岁，均为男性。用VAC或AV方案化疗后，约11天外周血颗粒细胞降至零。输注脐血后平均13天外周血白细胞升至l．0×109/L。60天内骨髓象正常，全部患者达到完成缓解。随诊I一4年，3例死亡，3例已分别存活36、44、ZO个月。结论：混合脐血移植对难治性白血病有较好疗效，其治疗作用机理值得进一步探讨。