HUMAN UMBILICAL CORD BLOOD TRANSPLANTATION IN 4 CASES WITH ADVANCED SOLID TUMORS

Four patients with solid tumors were treated by means of highdose chemotherapy and HLA-mismatched multi-cord blood transplantation.Ofthem,3 reached complete remission,1 got fair response with tolerant side-effects.No or a little graft-versus-host reaction(GVHR)were observed.Donor cellengraftments were documented in 2 patients by cytogenetic analysis and deter-mination of hemoglobin F of the peripheral blood.Recurrent diseases wereconfirmed clinically on day 210(4 year-old girl with liposarcoma)and day 90(11 year old boy with Non-Hodgkin′s Lymphoma).These results demonstratedthat HLA-mismatched multicord blood transfusion could rescue the marrowsuppression of patients treated with myeloablative chemotherapy with no or a littleGVHR,and suggested that muIticord blood stem cells might be engrafted in asingle patient without consideration of HLA-identical.Therefore,cord blood mayprovide a rich hematopoietic resources.Further studies are needed to confirmour observation.     

HLA-DRB1等位基因与儿童特发性血小板减少性紫癜

目的：研究人类白细胞抗原（LA）DRB1等位基因与儿童特发性血小板减少性紫癜（ITP）的关系。方法：用PCR－SSO法对42例ITP患儿进行HLA－DRB1等位基因分型，同时用改良的血小板抗原单抗特异性固相化法（MAIPA）检测其中36例ITP患儿血清中的抗GPⅡb/Ⅲa和GPⅠb/Ⅸ自身抗体。结果：（1）与健康对照相比，ITP患儿HLA－DRB1＊17基因型显著升高（P＜0．05，RR＝2．76，EF＝0．1064），而HLA－DRB1＊1202基因型显著降低（P＜0．025，RR＝0．20，PF＝0．7616）。（2）慢性难治性ITP患儿与非难治性患儿相比，HLA－DRB1＊11基因型显著升高（P＜0．025），且具有DRB1＊11的患儿主要（5／6）为女性年长患儿；（3）抗GPⅡb/Ⅲa及抗GPⅠb/Ⅸ自身抗体的阳性率都与HLA－DRB1＊02（15／16）基因型显著相关（P分别为0．02和0．01），但难治性和非难治性ITP患儿间抗体阳性差异无显著性（P＞0．1）。结论：（1）DRB1＊17可能与儿童ITP的易感性有关，而DRB1＊1202则可能对儿童ITP的发病具有保护作用；（2）具有DRB1＊11基因型的患儿易发展为慢性难治性ITP；（3）血小板自身抗体与抗原表位的反应可能受DRB1＊02限制，但自身抗体阳性与否并不能预示ITP患儿的预后。     

HLA新等位基因B*5827核苷酸序列的分析

目的 确认人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)新等位基因B*5827并分析其核苷酸序列.方法 用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针对1份HLA分型反应异常的血样进行基因分型,并用基因克隆测序技术正反向测定DNA序列.结果 测序结果显示HLA-B位点有1个与已知HLA等位基因序列均不同的新等位基因,该等位基因与HLA-B*5820序列同源性最高.但在第3外显子存在8个碱基的差异,分别为nt 290(G＞C)、nt 346(T＞A)、nt 390(A＞C)、nt 404(G＞C)、nt 413(C＞G)、nt 471(A＞G)、nt 486(A＞G)和nt 487(C＞A).碱基的不同导致了氨基酸不同nt 97(ser＞arg)、nt115(phe＞tyr)、nt 130(ser＞arg)、nt 157(thr＞ala)和nt 162(thr＞glu),其中nt 404和nt 413是同义突变.结论 该等位基因为HLA新等位基因,基因序列已提交至GenBank数据库,提交号为GU071234,于2010年1月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*5827.

Abstract：

Objective To investigate the molecular basis for a novel human leukocyte antigen(HLA)allele B * 5827. Methods DNA from the proband was analyzed by polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide (PCR-SSO) typing. The amplified product was sequenced bidirectionally. Results Abnormal HLA-B locus was observed and its nucleotide sequence was different from the known HLA-B allele sequences, with highest homology to HLA-B * 5820 allele. It differs from HLA-B * 5820 by 8 nucleotide substitutions in exon 3, i. e. , nt 290 (G＞C), nt 346 (T＞A), nt 390 (A＞C), nt 404 (G＞C),nt 413 (C＞G), nt 471 (A＞G), nt 486 (A＞G) and nt 487 (C＞A), resulting in an amino acid change from ser＞arg at nt 97, phe＞tyr at nt 115, ser＞arg at nt 130, thr＞ala at nt 157 and thr＞glu at nt 162.Nucleotide differences of nt 404(G＞C) and nt 413(C＞G) did not change amino acid. Conclusion The sequences of the novel allele have been submitted to GenBank (access No. GU071234). A novel HLA class Ⅰ allele B * 5827 has been officially assigned by the WHO HLA Nomenclature Committee in Jan 2010.     

SUCCESSFUL CORD BLOOD TRANSPLANTATION IN A CHILD WITH ADVANCED LIPOSARCOMA

A case with advanced liposarcoma was successfully treated byusing high-dose combination chemotherapy following cryopreserved cord bloodstem cell(CBSC)transplantation.The results showed that CBSC could be areplacement of bone marrow to rescue the haematopoietic suppression ofablative chemotheray.In contrast with allogeneous bone marrow transplanta-tion,CBSC infusion showed shorter duration of pancytopenia and less graft-versus-host reaction.     

脐血巨核系造血祖细胞的初步研究

用甲基纤维素法培养１５例新生儿脐血巨核系造血祖细胞（ＣＦＵ－Ｍｅｇ），观察了ＣＦＵ－Ｍｅｇ的生长特性、集落产率与接种细胞数的相关性，并与成人骨髓及外周血ＣＦＵ－Ｍｅｇ的数量进行了比较。结果表明，脐血中富含ＣＦＵ－Ｍｅｇ，且分裂快、子代细胞多，形成集落早呈现活跃的增殖状态，其数量低于成人骨髓但个体间差异明显，２６．７％的样本ＣＦＵ－Ｍｅｇ产率高于骨髓。接种细胞数量与ＣＦＵ－Ｍｅｇ的产率在一定范围内呈良好的线性关系。     

儿童急性淋巴细胞白血病microRNA表达的研究

微小RNA(micro RNA,miRNA)被认为是一类对基因表达起负调节作用的基因产物[1].参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞死亡等.miRNA在正常细胞和肿瘤细胞中的表达不同,我们通过基因芯片对儿童早前B细胞急性淋巴细胞白血病(pre-B-ALL)患者和非血液病患者的miRNA进行对照分析,并通过实时定量PCR进行验证,目的是发现某些特异性miRNA在调控白血病发生中的作用,为白血病的基因治疗提供依据.     

白芍总苷对骨关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的 观察骨关节炎（OA）成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养时生长增殖特性，以及白芍总苷（TGP）对其增殖能力的影响。探讨白芍总苷的抗炎机制。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTF）法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察OA和正常对照（Ns）膝关节滑膜组织体外培养时FLS增殖能力和c-fos表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测培养上清中的肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），用流式细胞仪测定FLS细胞周期的变化。结果 OA和NS的FLS在体外培养时的细胞倍增时间差异无统计学意义。加入高剂量TGP对OA-FLS细胞存活分数（SF）的抑制作用较NS-FLS组更显著（P〈0，05），2000mg／L和400mg／LTGP降低培养液上清中TNF-α和bFGF的水平，升高IFN-γ含量（P〈0．05），并抑制FLS的c-fos mRNA表达（P〈0．05）。OA-FLS细胞周期测定表明加入2000mg／L的TGP可延长G1期而缩短S期，但与不加药对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 高浓度TGP对OA-FLS的增殖能力、细胞因子分泌及原癌基因表达的抑制程度大于对正常滑膜FLS的作用，表明TGP调节FLS增殖特性．有抑制OA滑膜炎的作用。     

原代骨髓基质细胞联合细胞因子体外诱导ES-D3细胞造血分化的研究

目的：研究原代骨髓基质细胞联合细胞因子（VEGF，SCF和TPO）体外诱导ES-D3细胞造血分化的效率，探讨体外高效诱导胚胎干细胞生成造血干／祖细胞的方法。方法：取6～8周昆明鼠骨髓制备小鼠骨髓基质细胞（BMSC）饲养层。采用二步诱导法，先将ES-D3细胞诱导分化为拟胚体（EB），再将EB置于4种体系下诱导分化造血干／祖细胞；第1组：自发分化对照组；第2组：细胞因子组（VEGF加SCF加TPO）；第3组：BMSC饲养层组；第4组：BMSC饲养层加细胞因子组（BMSC加VEGF加SCF加TPO）。诱导分化1周的部分细胞行造血祖细胞集落培养。流式细胞仪检测诱导培养7d和14d的各组细胞中干细胞特异抗原（CD34）、祖细胞特异抗原（c-kit）、粒细胞表面抗原（CD11b）、红系细胞特异抗原（Ter119）阳性表达率。间接免疫荧光染色法显示CD34、c-kit、CD11b、Te〉119阳性细胞。RT-PCR检测造血转录因子GATA-2、FIk-1、SCL、p-H1和p-major珠蛋白的表达。结果：诱导7d生成的细胞均表达造血CD34和Pkit，诱导14d生成的细胞表达单核巨噬细胞、CD11b和Te〉119，且诱导细胞表达造血转录因子（GATA-2、SCL、β-H1、β-major）基因mRNA，培养在特定条件下可形成造血祖细胞集落。从生成造血细胞和造血集落的数量分析，骨髓基质细胞饲养层与细胞因子合用时诱导效率明显高于单用组和对照组（P〈0．05或0．01）。结论：骨髓基质细胞饲养层与细胞因子合用，体外可以促进ES-D3细胞的早期造血分化，产生的造血前体细胞可进一步形成造血集落并分化成熟，表达与造血转录和早期造血分化相关的基因。     

大鼠胎血与骨髓非造血成体干细胞体外分化能力的比较

为了比较大鼠胎血和骨髓中非造血成体干细胞（non—hematopoietic adult stem cells，NASC）体外培养过程中的生长特性及体外诱导两者向神经元样细胞分化的异同，在无菌条件下采集孕大鼠的胎血和成年大鼠的骨髓，用Ficoll—hypague分离液分离出单个核细胞（MNC）后，种植于含10％胎牛血清的DMEM／LG培养液内。收获的NASC传代培养，用流式细胞仪检测细胞的免疫表型。β-巯基乙醇（β-ME）、二甲亚砜（DMSO）和叔丁基对羟基茴香醚（BHA）诱导NASC向神经元分化．用免疫细胞化学染色检测其特异性标志巢蛋白（nesfin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果发现：传代培养后的两种NASC的形态相似，皆呈均一的梭形；流式细胞仪检测结果示两种NASC的免疫表型无明显差异，表达CD44、CD54，不表达CD11b、CIM5；定向诱导的两种NASC具典型神经元形态，免疫细胞化学染色显示nesfin和NSE为阳性，但GFAP为阴性。结论：大鼠胎血和骨髓非造血成体干细胞的细胞形态、生物学特性无明显差别；两者都可被诱导分化为神经元样细胞；血胎应是NASC的又一来源。