AGEs对肾小管上皮细胞转分化、1型胶原合成及smad信号通路的影响

目的:观察终末期糖基化终产物(AGEs)对正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E ）转分化、collagenⅠ合成及Smads信号通路的影响。 方法:应用自制的AGEs（AGE-BSA）刺激NRK52E细胞，采用免疫细胞化学方法检测pmad2/3核表达情况；ELISA方法检测细胞培养上清TGF-β₁的浓度；RT-PCR检测TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；Western印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、E-钙粘着糖蛋白（cadherin）和1型胶原（collagenⅠ）蛋白的表达。 结果: AGE-BSA刺激15 min后pSmad2/3核表达明显增加，于30 min（68%）和24 h（76%）出现两个高峰，与刺激前及时间匹配的BSA对照组比较均有显著差异（P<0.05）；AGE-BSA以时间依赖方式上调TGF-β₁、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达；NRK52E细胞α-SMA和collagenⅠ蛋白表达高于对照组（P<0.01），E-cadherin蛋白表达低于对照组（P<0.01），细胞上清液TGF-β₁的浓度高于对照组（P<0.01）。 结论:AGEs可诱导肾小管上皮细胞Smads信号通路活化，促进肾小管上皮细胞转分化和细胞外基质collagenⅠ的合成。     

Akt/NF-κB信号途径在免疫复合物诱导肾系膜细胞增殖中的作用

目的 :观察免疫复合物 (IC)能否诱导体外培养的肾小球系膜细胞 (MC)增殖及其Akt/NF κB信号在其中的作用。方法 :实验设对照组、刺激组及Akt1正义 (SODN)、错义 (MSODN)与反义寡核苷酸 (ASODN)组。寡核苷酸组 :以lipofectin分别介导Akt1SODN、MSODN、ASODN转染MC 8h ;对照组和刺激组 :以lipofectin作用MC 8h。然后刺激组和寡核苷酸组均用聚合IgG(aggregatedIgG ,AIgG ,一种标准的IC模型 )刺激 ,对照组用等量的单体IgG刺激。用MTT比色法检测细胞的增殖 ,流式细胞术分析MC的细胞周期 ,RT PCR分析mRNA的表达 ,Westernblot检测蛋白的表达 ,电泳迁移率变动实验 (EMSA)检测NF κB的活性。结果 :IC可诱导MC中NF κB的活化 ,上调细胞周期蛋白cyclinD1的mRNA及蛋白表达 ,促进MC进入S期。Akt1ASODN可抑制Akt1蛋白的表达 ,抑制IC诱导的MC中NF κB活性 ,抑制cyclinD1mRNA及其蛋白的表达 ,进而抑制IC促进MC进入S期和增殖。Akt1SODN、MSODN则无上述抑制作用。结论 :IC可通过Akt/NF κB信号途径 ,介导体外培养的MC增殖。提示Akt/NF κB信号途径 ,可作为干预IC诱导MC过度增生的一个新的治疗靶点。     

上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的： 探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Smad7对TGF-β₁作用下大鼠腹膜间皮细胞Smad2表达的影响。 方法： 通过脂质体介导的方法，将表达Smad7的重组质粒（PCDNA3-Smad7）转染培养的大鼠腹膜间皮细胞，分别培养于不同浓度TGF-β₁培养液(0、1.25、2.5和10 μg/L)，用RT-PCR及Western blotting的方法检测不同时间（0、5、15、30、60和120 min）Smad2、Smad7表达的水平。 结果： 正常间皮细胞Smad2 mRNA和蛋白在TGF-β₁刺激后5 min开始表达，呈时间依赖性，在30 min达到高峰，而后逐渐减弱；Smad7 mRNA和蛋白也在TGF-β₁刺激后5 min可见表达，但此后逐渐减弱，30 min达到最低，60 min又开始逐渐增强。Smad2 和Smad7 mRNA和蛋白，随TGF-β₁浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Smad7 mRNA和蛋白表达显著上调，并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β₁刺激下，Smad2 mRNA及蛋白的表达均低下，刺激0、5、15、30、60 和120 min后Smad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%（P<0.05）。Smad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%（P<0.05）。 结论： 上调表达抑制性信号蛋白Smad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Smad2的表达和活性，提示Smad7可能对TGF-β₁起反向调控作用。     

IL-4及CD40 mAb对肾小管上皮细胞RANTES表达的影响

目的:观察小鼠肾小管上皮细胞(TEC)在IL-4及CD40激活状态下激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)分泌的变化。方法:刺激原代培养的小鼠肾小管上皮细胞,检测RANTES的表达,流式细胞仪检测CD40表达。结果:(1)常规培养下,小鼠TEC可表达一定量的CD40,用IL-4刺激TEC 24 h,细胞表面CD40 MFI 显著高于对照组(P<0.01)。(2)常规培养下,小管上皮细胞仅分泌极少量的RANTES(14.78 ng/L±2.20 ng/L),在IL-4刺激或CD40mAb激活后TEC RANTES蛋白分泌分别为43.61±13.73和73.77±4.28,显著高于对照组(P<0.01)。用IL-4刺激肾小管细胞CD40表达的同时,加入纯化的CD40mAb激活CD40受体,TEC RANTES 的合成、分泌显著高于对照组(131.77±41.87,P<0.01),与单纯IL-4刺激组及CD40mAb刺激组比较差异显著(均P<0.01)。(3)用IL-4、CD40mAb及 IL-4+CD40mAb刺激TEC细胞24 h,各刺激组RANTES mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:IL-4及CD40-CD40L共刺激信号可调控RANTES合成及分泌,参与TEC炎症过程。     

狼疮肾炎PBMC高表达抗ds-DNA抗体和IL-6由MAPKERK1/2通路介导

目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶-细胞外调节激酶1/2（MAPKERK1/2）信号通路在系统性红斑狼疮合并肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）中自发高水平表达白细胞介素6（IL-6）和抗双链DNA抗体（抗ds-DNA抗体）中的作用。 方法： 分离培养患者PBMC，利用蛋白免疫印迹法、逆转录PCR 法和酶联免疫吸附法分别检测MAPKERK1/2磷酸化活化程度、IL-6表达和抗ds-DNA抗体水平，并与正常对照组比较。 结果： 26例LN患者与21例健康对照者比较，体外培养LN患者PBMC MAPKERK1/2信号通路呈高度活化状态，并自发表达高水平IL-6和抗ds-DNA抗体，组间有显著差异(P<0.05)。应用特异性阻断剂PD98059阻断LN患者PBMC MAPKERK1/2信号通路活化可显著抑制IL-6 和抗ds-DNA抗体的自发高表达。 结论： LN患者PBMC中MAPKERK1/2信号通路异常活化，并介导PBMC自发高水平表达IL-6 和抗ds-DNA抗体。     

透析患者甲状旁腺机能亢进与左心室肥厚的关系

目的　了解透析患者甲状旁腺机能亢进与左心室肥厚 (L VH)的相关关系。方法　分别测量我院 46例腹膜透析 (CAPD)患者、73例血液透析 (HD)患者、18例透析前慢性肾衰竭患者及 16例健康人的超声心动图 ,以了解左心室肥厚的发生率 ,并分别检查血甲状旁腺素 (i PTH)、钙、磷水平 ,分析血钙、磷、i PTH与 L VH之间的关系。结果　CAPD组、HD组、肾衰竭组的 i PTH较对照组明显增高 (P<0 .0 0 1) ,以肾衰竭组升高明显 ,并且与 L VH呈显著正相关 (r=0 .70 5 ,P<0 .0 0 1)。 CAPD组、HD组的血钙值、血磷值与对照组无明显差别 ,而慢性肾衰竭组则血钙明显低下、血磷明显升高。结论　尿毒症患者普遍存在甲状旁腺机能亢进 ,是导致透析患者心血管疾病发病率增高的原因之一     

特发性膜性肾病的治疗

膜性肾病 (membranousnephropathy)是成人肾病综合征(NS)的常见病因 (约占 2 5 %～ 40 % )。临床表现几乎都有蛋白尿 ,70 %～ 85 %表现为肾病综合征型蛋白尿。由于本病进展缓慢 ,有自发缓解倾向 ,且药物治疗时间长 ,敏感性较低 ,副作用多 ,临床治疗方案有较大的争议。现结合近几年国内外的文献报告及本单位的临床实践经验 ,就膜性肾病的治疗问题作一简要的阐述。特发性膜性肾病的治疗主要包括 :①免疫抑制治疗 ;②以减少蛋白尿为主的非特异性治疗 ;③并发症的预防和治疗。1　免疫抑制治疗近 3 0年来 ,国内外学者提出了特发性膜性肾病的各种…     

狼疮肾炎并发高血压729例相关因素分析

目的探讨影响狼疮肾炎(LN)高血压发生的相关因素。方法对729例LN患者完整临床病理资料进行回顾性分析，比较LN并发高血压组与LN不伴高血压组患者临床表现、实验室检查和病理学改变等方面的差别，利用单因素及多因素分析探讨LN并发高血压的危险因素。结果本组高血压发生率为34．3％，高血压发生率随着患者年龄增加、病程延长和肾功能恶化而逐渐增加，组间差异存在统计学意义；单因素分析提示男性，年龄≥45岁，病程≥3年，高血压家族史，尿蛋白≥2．0g／d，血肌酐≥133μmol／L，高胆固醇血症，肾小管间质指数≥5，新月体指数≥2，肾小球硬化指数≥2等是LN患者并发高血压的危险因素；多因素Logistic回归分析结果显示性别、年龄、血肌酐水平、肾小球硬化程度是LN高血压发生的独立影响因素。结论高血压是LN常见并发症。发生率高，其发生与家族史、性别、病程长短、蛋白尿程度、血肌酐水平等因素有关，应及时有效地控制血压水平。     

Smad7对终末期糖基化产物介导大鼠肾小管上皮细胞转分化及Ⅰ型胶原合成的影响

目的 探讨Smad7对终末期糖基化产物(AGE)介导肾小管上皮细胞转分化及Ⅰ型胶原合成的影响.方法 Tet-on质粒系统构建表达Smad7的正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)株,通过强力霉素(Dox)上调Smad7的表达,以细胞免疫化学、RT-PCR或Western印迹技术观察Smad7对AGE介导NRK52E细胞磷酸化(P)Smad2/3核转位、及α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、E-钙黏着糖蛋白(cadherin)和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响.结果 Smad7转染的NRK52E细胞以剂量依赖方式受Dox调控.Smad7的高表达可抑制AGE介导的30 min(68.3%vs31.2%,P＜0.01)和24h(69.8%vs28.7%,P＜0.01)P-Smad2/3的核转位水平;明显下调α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达,上调E-钙黏着糖蛋白mRNA和蛋白的表达.结论 Smad7通过抑制Smad信号通路活化,阻抑AGE介导的肾小管上皮细胞向肌成纤维母细胞转分化和Ⅰ型胶原的合成.     

血管活性肽在双肾双夹高血压动物模型中的动态变化

以双肾双夹（2K2C）动物高血压模型为基础,在高血压不同时期观察内皮素（ET）,心钠素（ANP）和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的改变。实验分手术组和对照组,各40只SD大鼠,每周测尾动脉血压一次,手术后1,4,8,12周取血浆和肾组织用放免法测定ET、ANP、Ang Ⅱ浓度。结果发现,手术组术后第1周血压开始上升,第4周显著升高并趋稳定。血浆ET（PET）第1周开始升高,第4周显著升高（11.02±2.04υs7.25±1.82P<0.01）,第8周则明显下降（P<0.05）,肾组织ET（TET）与血浆ET明显正相关（r=0.68,P<0.05）。ANP在第1周开始上升,第4周后持续显著升高（328.7±42.5υs 162.5±28.6,P<0.01）。Ang Ⅱ也在第1周显著升高（415.2±52.4,υs 95.3±32.7,P<0.01）以后持续在一较高水平。结果表明ET、ANP、Ang Ⅱ在双肾双夹高血压动物模型的发病机理中可能起重要作用。