微载体在培养人骨髓间充质干细胞成骨诱导中的作用

目的探讨微载体在培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨诱导中的作用,建立一种大量、快速获得骨组织工程种子细胞的方法.方法将普通培养瓶培养的第3代hMSCs分别应用搅拌式生物反应器和微载体成骨诱导培养,分别于培养的第2、4、6、8、10、12、14天检测诱导细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,并与普通成骨诱导方法进行对比.观察细胞增殖情况,比较两种方法细胞增殖速度(细胞数/d).结果接种24 h后,88%的hMSCs细胞粘附于微载体并铺展,3 d后生长加速,约8～9 d后生长达最大值,最终细胞收获密度为接种时的16～22倍.细胞增殖速度约为普通培养法的3.2倍(P＜0.05).诱导细胞的ALP的活性在第12天达最大值,且微载体成骨诱导培养的细胞ALP活性与普通培养法无显著差异(P＞0.05).结论应用微载体技术可成功地进行hMSCs的成骨诱导培养和快速扩增,能满足骨组织工程的需要.     

VEGF促进骨组织工程血管化的研究进展

组织工程骨的体积越大,结构越复杂,所需的种子细胞数量就越多,因此须有更多的动、静脉及血管网为种子细胞提供营养,可见有效的组织工程血管化是大块工程组织移植的关键.     

同种异体髂骨结合钢板在颈椎前路手术中的应用

[目的]探讨同种异体髂骨块植骨结合前路钢板在颈椎前路椎间植骨融合中的应用效果。[方法]对68例颈椎前路减压植骨融合的患者应用同种异体髂骨块植骨结合前路钢板，记录手术时间、术中出血量及定期X线片等资料，并与同期自体髂骨块植骨结合前路钢板的32例对照组的相关资料进行比较。[结果]同种异体髂骨块植骨结合前路钢板组与同期自体髂骨块植骨结合前路钢板组比较，手术时间以及手术出血量较后者显著减少（P〈0．05），随访1年，两组均成功实现椎体间骨融合，但前者融合时间较后者显著延长（P〈0．05），两组无1例发生钢板断裂或螺钉松动、滑脱。[结论]同种异体髂骨块植骨结合前路钢板，手术时间短，术中出血少，植骨可顺利融合，是颈椎前路手术较好的术式。     

青少年特发性脊柱侧凸疾病候选基因SH3GLl外显子序列比对分析

目的 通过对候选基因SH3GL1的核酸序列进行比对分析,确定其是否为青少年特发性脊柱侧凸(AIS)的致病基因.方法 采取以家系为基础的"病例同胞对"研究方案,提取基因组DNA,根据候选基因SH3GL1核酸序列,以10个外显子为重点设计引物对.进行PCR扩增、克隆和测序,用GeneTool软件对外显子测序结果进行序列比对分析,判断是否存在碱基变异,并进行蛋白质结构预测分析.结果 候选基因SH3GL1中的10个外显子成功地在AIS"同胞对"基因组DNA中得到扩增和克隆,且序列测定均取得阳性结果.通过比对分析,在SH3GL1的10个外显子中共发现12处碱基变异,分别位于第2(3处)、4、5(4处)、6、8和10(2处,非编码区)六个外显子上.其中先证者mRNA第515位碱基如果为T,则形成终止密码子,导致蛋白阅读框发生改变,蛋白质序列预测分析显示编码截短蛋白,从而影响蛋白质的一级结构.结论 SH3GL1是AIS的致病基因之一.     

微创手术治疗尺骨鹰嘴横形或斜形骨折

目的 探讨采用闭合复位双边外固定器固定的微创手术治疗尺骨鹰嘴横形或斜形骨折的临床意义. 方法 透视下行闭合复位后,经闭合穿针微创手术弹性外固定治疗尺骨鹰嘴横形或斜形骨折38例,术后开始康复训练. 结果 38例术后随访12～27个月,均在5～12周内临床愈合,肘关节功能恢复满意,无任何并发症及后遗症,根据Broberg和Morrey评估标准,优26例,良10例,可2例,优良率为94.7%.结论 闭合复位弹性外固定结合康复训练是治疗尺骨鹰嘴横形或斜形骨折可行而有效的微创手术方法.     

手术治疗脊柱结核伴截瘫的疗效分析

目的 评价病灶清除、神经减压及植骨融合等个体化治疗对脊柱结核伴截瘫的疗效.方法 39例患者中颈椎结核6例,颈胸段结核5例,胸椎结核24例,胸腰段结核2例,胸椎、腰椎附件结核各1例.其中36例为活动期病变,3例为静止期病变;其中3例行单纯病灶清除术、13例行前路植骨融合、21例行前路植骨融合内固定;2例附件结核患者行椎板切除减压,1例行后路内固定;术后按3SHRE/9HRE方案化疗,佩戴支具6个月,定期复查神经功能、平片、CT或MRI ,每月监测肝功能、血沉.结果 随访6～46个月,平均27个月,结核病变无复发,后凸角无明显丢失;术前3例严重痉挛性瘫痪患者中2例术前C级,术后无明显好转,1例术前B 级术后为D 级;术前B级、D级各有1例术后为D级;其余34例神经功能于术后7d～3个月恢复E级(87.2%),术前神经功能ASIA分级为B级、C级、D级患者平均恢复正常时间分别为98、48、35d.结论 脊柱结核伴截瘫神经压迫多缓慢产生,预后与创伤性截瘫明显不同;对活动期病变及时减压,预后较好;而静止期病变脊髓长时间受压导致的严重痉挛性截瘫者,术后恢复时间明显延长,恢复程度差,甚至无明显恢复.     

结核分枝杆菌快速培养和常规药敏试验在脊柱结核治疗中的应用

目的 探讨BACT/ALERT 3D系统快速培养和绝对浓度法药敏试验对指导脊柱结核个体化化疗的应用价值,分析研究脊柱结核耐药情况.方法 根据临床表现、影像学表现、病理检查,50例患者诊断为脊柱结核,并接受手术治疗.收集术中所取脓液、干酪样组织.低温避光保存,8 h内送检,常规处理后接种液体培养基,使用BACT/ALERT 3D系统进行分枝杆菌快速培养.培养阳性者接种PNB和TCH培养基进行菌种鉴定,并将细菌接种至含药改良罗氏培养基,按绝对浓度法进行11种常用一线和二线抗结核药物药敏试验.结果 50例标本培养阳性21例(42%),人型结核杆菌19例,牛型结核杆菌2例.结核杆菌培养和药敏试验平均耗时41 d(28～58 d).其中耐药11例(52.4%),异烟肼耐药4例(19.0%),利福平和乙胺丁醇各1例(4.8%),链霉素3例(14.3%),力克肺疾2例(9.5%),左氧氟沙星8例(38.1%).结论 结核分枝杆菌快速培养和常规药敏试验准确度高,费用低,可检测常用一线和二线药物的敏感性,适用于指导脊柱结核个体化化疗方案的制定.异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇或(和)链霉素联合用药方案对多数初治脊柱结核患者有效.     

人羊膜细胞外基质与成纤维细胞体外培养的实验研究

目的通过人羊膜细胞外基质(HA-ECM)与成纤维细胞体外培养,观察成纤维细胞在HA-ECM上的生长特性,以及胶原原纤维产生情况,为使HA-ECM成为皮肤组织工程化的载体打下基础.方法将不同浓度的成纤维细胞种植于HA-ECM上进行体外培养,通过倒置显微镜、光镜及透射电镜,观察细胞在HA-ECM的生长、排列,以及细胞的粘附和胶原原纤维产生情况.结果梭形的成纤维细胞在HA-ECM上生长良好,呈放射状或平行排列;组织切片发现HA-ECM上有较多梭形细胞附着,细胞排列紧密;电镜下见成纤维细胞胞膜基底部向HA-ECM内伸出数个突起,细胞与羊膜基质粘附相当牢固,胞外有较多胶原原纤维堆积. 结论种植于HA-ECM的成纤维细胞有一个最适宜的细胞浓度(3.5×106 个/ml);HA-ECM具有良好的支架和渗透作用,成纤维细胞在其上生长、粘附良好,胶原合成、分泌旺盛,HA-ECM是一种较理想的成纤维细胞载体.     

人羊膜与成纤维细胞的共培养在组织工程中的应用

目的：通过人羊膜与成纤维细胞的共培养，来观察成纤维细胞在HA上的生长特性，以及胶原原纤维产生情况，为使人羊膜成为组织工程皮肤的载体打下基础。方法：将不同浓度的成纤维细胞种植于人羊膜上进行共培养。观察细胞在人羊膜细胞外基质（HA-ECM)的生长、排列以及细胞的粘附和胶原原纤维产生情况。结果：梭形的成纤维细胞在HA-ECM上生长良好，放射状或平行排列；组织切片发现HA-ECM上有较多梭形细胞附着，细胞捧列紧密；电镜下见成纤维细胞胞膜基底部向HA-ECM内伸出数个突起，细胞与羊膜基质粘附相当牢固，胞外有较多胶原原纤维堆积。结论：种植于HA-ECM的成纤维细胞有一个最适宜的细胞浓度3．5&;#215;10^9L^-1；HA-ECM具有支架和渗透作用，成纤维细胞在其上生长、粘附良好，胶原合成、分泌旺盛，HA-ECM是一种较理想的成纤维细胞载体。     

组织工程骨血管化的研究进展

组织工程骨具有巨大的临床需要及应用前景,用组织工程骨（tissue engineering bone,TEB）修复骨缺损的研究方兴未艾.目前大部分的研究都停留在小动物（如鼠、兔）体内原位或异位成骨,修复部位大都为非负重骨缺损,新生的骨组织还不能满足临床应用的需要.目前应用大块TEB修复大段骨缺损时,其核心部位往往发生缺血坏死,使修复归于失败,其主要原因在于未能很好解决TEB的血管化问题。