HCG—β亚单位单价抗血清的制备

人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由垂体和胎盘分泌的具有刺激性腺活动和维持早期妊娠功能的一种糖蛋白激素。主要用于诊断早孕,病理妊娠,滋养层细胞肿瘤。HCG是由分子量分别为18,000和30,000的α、β两个亚单位组成的一条多肽链。其中α亚单位与LH有相同的分子结构,而β亚单位C末端33个氨基酸是其本身所特有的,因而HCG-β亚单位抗血清是检测HCG的重要手段,应用HCG-β     

纤维连接蛋白--一种创伤修复剂制备方法的研究

对制备纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)的试验方法进行研究,筛选出加样量小,收得率高的最佳试验方法。用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱,对从健康男性“O”型血浆提纯FN进行研究。采用不同的加样量与样品在柱内不同的停留时间进行筛选。在明胶亲和柱体积不变的条件下,制备FN的量与血浆加样量及血浆在柱内停留时间有密切关系。该柱的最佳加样量为150ml血浆,每次血浆在柱内停留时间应为20min。该法制备的FN,加样量小,收得率高。     

少加样高收效制备创伤修复剂纤维粘连蛋白的方法

背景纤维粘连蛋白不仅对细胞起支架作用,而且是细胞间重要的连结因子,具有类似调理素作用,可促进单核吞噬细胞系的吞噬功能,在炎症和创伤中起修复作用.目的以新鲜健康男性"O"型血浆为原料,为制备纤维蛋白结合素筛选出加样量小,方法简便、收得率高的纯化方法.设计开放性实验.单位广州市红十字会医院暨南大学第四附属医院创伤外科研究所.材料实验于2000-07/2002-07在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成.材料主要包括新鲜健康男性"O"型血浆、明胶、CNBr-activatedSepharose 4B、交联葡聚糖G-25、尿素、三羟甲基氨基甲烷等.方法用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱对纤维蛋白结合素进行纯化.①加人血浆取新鲜健康男性O型血浆150 mL,每次向柱内加入25 mL,停留20 min,流速3.5 mL/min.②去杂蛋白用pH 7.5的Tris-柠檬酸钠平衡液洗柱,洗至流出液280nm下吸光度值＜0.02,再用含1 mol/L NaCl的Tris-柠檬酸钠洗去其他杂蛋白.③收集纤维蛋白结合素用3 mol/L脲-Tris洗脱液洗柱,收集纤维蛋白结合素.④纤维蛋白结合素收集液去尿素取纤维蛋白结合素的收集液,过SephadeG-25,去除尿素.⑤除菌用0.22μm滤菌器过滤除菌.主要观察指标①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果.②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响.③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响.结果①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分离胶浓度为7%,浓缩胶浓度为3%,纤维蛋白结合素电泳结果为单一蛋白区带.②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响血浆加样量为150 mL,柱内不停留和停留时间为10,20,30 min时纤维蛋白结合素收得率分别是(65.24±3.45)%,(74.77±4.05)%,(86.99±4.10)%,(80.47±3.75)%.③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响柱内停留时间为20min时,血浆加样量为100,130,150,180mL时纤维蛋白结合素收得率分别是(72.56±3.63)%,(77.61±3.14)%,(86.99±4.12)%,(74.67±3.05)%.结论在明胶亲和柱体积不变的条件下,制备纤维蛋白结合素的量与血浆加样量、血浆在柱内停留时间密切相关.明胶亲和柱的血浆最佳加样量为150 mL,每次血浆在柱内停留时间应为20 min,此法制备的纤维蛋白结合素加样量小,收得率高.     

瘢痕增生与烧伤患者血清纤维连接蛋白明胶结合活性的相关性

目的:检测烧伤患者血清纤维连接蛋白(Fn)结合明胶活性,并探讨其与烧伤面积、深度和感染等因素的关系。方法:采用ELISA法平行检测345例烧伤患者、32例瘢痕患者和37例正常人对照血清Fn结合明胶活性。结果:随着烧伤面积和深度的增加,Fn结合明胶活性降低,特重度烧伤患者Fn活性显著低(P<0.05),瘢痕患者Fn活性显著高于正常对照(P<0.05)。烧伤患者Fn结合明胶活性与年龄、性别和血型无关。感染及吸入性损伤患者血清Fn结合明胶活性下降。同一烧伤程度不同性别Fn活性在中度和特重度烧伤组男性显著高于女性(P<0.05),瘢痕患者Fn活性男性显著高于女性(P<0.05);特重度烧伤Fn活性女性显著低于正常对照(P<0.05),瘢痕患者Fn活性女性显著高于正常对照(P<0.05)。结论:Fn活性降低与烧伤程度、吸入性损伤和机体感染有关。瘢痕患者血清Fn活性增加可能与其发病机制有关。Fn活性检测与含量测定具有不同病理生理意义。     

人血浆纤维连结蛋白在治疗顽固性角膜上皮缺损中的应用

在广州市内５间医院,用纤维连结蛋白（ＦＮ）对３８３眼顽固性角膜上皮缺损病人进行临床研究,其中ＦＮ治疗组观察３０９眼,治愈２１６例（６９．９％）,平均治疗天数６．５ｄ,好转８３眼（２６．８％）,平均治疗天数９．６ｄ,无效１０眼（３．２％）;对照组观察７４眼,治愈４３眼（５８．１％）,平均治疗天数为８．７ｄ,好转１１眼（１４．９％）,平均治疗天数１２．１ｄ,无效２０眼（２．７％）。两组比较,ＦＮ组疗效     

人血浆纤维连结蛋白对角膜上皮缺损愈合的作用

对角膜损伤的家兔应用纤维连结蛋白（ＦＮ）与生理盐水进行对照试验，结果显示ＦＮ治疗兔角膜损伤愈合速度较快。对３８３眼顽固性角膜上皮缺损病进行临床研究，结果显示ＦＮ疗效优于对照组（Ｐ〈０．０１）。     

薄层层析法分离鉴定细菌内毒素的研究

一直以来，细菌内毒素的检测方法为兔法或鲎法[1、2]。随着细菌内毒素的分子结构、生物活性等方面研究的进展，有学者开始探讨运用其它方法对细菌内毒素进行检测的可行性。如用酶联免疫法检测内毒素脂多糖LPS[3]，用3-羟基脂肪酸荧光标记物对内毒素进行定量检测等[4]。笔者等曾研究应用亲和层析技术探讨检测细菌内毒素和类脂A，本文则建立了用薄层层析分离鉴定细菌内毒素和类脂A的实验方法，以此作为亲和层析技术分离检测细菌内毒素的鉴定手段。该方法操作简单，灵敏度高，现报告如下。1材料及试剂回．回供试品A：细菌内毒素参考品，广州…     

用单克隆抗体吸附柱纯化HCG

本文报道人绒毛膜促性腺激素(HCG)的制备和纯化方法。取正常早期妊娠妇女尿经苯甲酸吸附,50％乙醇抽提,再用50％乙醇配制的0.3M pH4.8醋酸钠缓冲液反复抽提。抽提液用冷乙醇沉淀得生物学活性约为2000iu/mg的较纯品,再经单克隆抗体亲和层析柱纯化,则可得生物学活性约为1000iu/mg的精制品。     

低强度He-Ne激光对软骨细胞增殖的影响

目的研究低强度HeNe激光对兔软骨细胞增殖和变异的影响。方法选取3周龄新西兰白兔分离培养软骨细胞,分别在浓度为10%,5%,2.5%的新生牛血清(newborncalfserum,NCS)及无血清4种培养媒介中培养。采用波长为632.8nm,功率为6.5mW的HeNe激光照射软骨细胞,每天分别照射2,8,16,30和45min,共6d。在培养至第13天时,用XTT法检测细胞的活性,了解细胞的增殖情况;用吖啶橙标记软骨细胞DNA,激光共聚焦显微镜下观察软骨细胞形态及DNA的表达。结果(1)XTT结果显示,在营养缺乏培养状态中(5%,2.5%NCS),照射时间为16,30和45min的照射组细胞数量明显增加,与无激光照射组的差异有统计学意义(P<0.01),其中最佳照射时间为30min,实际最佳照射能量密度为9.42J/cm2。(2)照射组软骨细胞形态与正常软骨细胞差异无统计学意义;DNA荧光信号较对照组强;未见显著的形态改变。结论低强度HeNe激光能促进兔软骨细胞的生长,使DNA表达明显增强。