原发性胃癌中DCC抑癌基因杂合性丢失的研究

目的：探讨原发性胃癌组织中结直肠癌缺失基因（deleted in colorectal carcinoma.DCC)杂合性丢失（loss of heterozygosity,LOH)的情况及其与胃癌临床病理学间的关系。方法：用多聚酶链反应－单链构相多态性（PCR－SSCP）银染法分析49例原发性胃癌组织中DCC的杂合性丢失。结果：D18S484位点发生LOH的频率为26．6％（12／45），D18S487为23．9％（11／46），DCC发生LOH的频率为36．7％（18／49）。36．8％（7／19）的肠型胃癌发生DCC LOH，24．0％（6／25）的弥漫型胃癌发生DCC LOH，而100％（5／5）的混合型胃癌为DCC LOH（P＜0．05）。在淋巴结有转移的胃癌中，52％（13／25）的原发性胃癌发生DCC LOH，无转移者中为20．8％（5／24）（P＜0．05）；发生远处转移者，原发性胃癌DCC LOH为100％（3／3），而无转移者为32．6％（15／46）（P＜0．05）；在TNM Ⅲ、Ⅳ期中DCC LOH为50．0％（12／24），有高于TNM I、Ⅱ期（24％，6／25）的趋势（P＝0．059）。DCC LOH与病人的性别、年龄、肿瘤发生部位、大小、组织学分级均无统计学意义（P＞0．05）。结论：DCC的杂合性丢失可能在胃癌的发展和转移中起重要作用，是胃癌发展后期的重要分子事件。     

胃癌的病理分型与预后

胃癌是消化系统的常见恶性肿瘤,因其对人类危害极大,发病率与死亡率多年来居高不下,故引起广大科研人员以及各级政府的重视。在胃癌的多学科攻关团队中,病理学工作者担负着对胃癌组织进行准确的病理分型、对候选肿瘤标志物或药物治疗靶点进行组织表达的验证等职责。胃癌的组织构造与细胞形态的异形性是对胃癌进行精细分型与分化程度判断的主要依据。习惯上将与胃组织相似程度高的肿瘤定义为"高分化";相似程度低的肿瘤     

环氧化酶-2表达与胃癌淋巴管生成及淋巴结转移的关系

目的研究环氧化酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理因素间的关系,并评价上述两指标与肿瘤新生淋巴管和淋巴结转移之间的相关性。方法采用免疫组织化学(免疫组化)染色法,检测63例胃癌原发灶标本COX-2与VEGF-C蛋白的表达情况,并用淋巴管内皮细胞特异性抗体LYVE-1行免疫组化染色,观察肿瘤组织淋巴管生成状况。结果所测63例胃癌组织中,COX-2及VEGF-C的表达阳性率分别为66.7%(42/63)和52.4%(33/63),35例标本(55.6%)中可检测到LYVE-1阳性的肿瘤新生淋巴管。COX-2表达与VEGF-C表达、肿瘤新生淋巴管形成及淋巴结转移等临床病理指标间呈明显相关关系(P<0.05);但与患者性别、肿瘤大小、肿瘤部位、Lauren分型及有无浆膜浸润等无明显相关。结论胃癌组织中,COX-2表达与VEGF-C表达状态、肿瘤淋巴管生成和淋巴结转移均呈明显相关。COX-2可能通过上调VEGF-C表达,促进胃癌淋巴管生成,并顺次导致淋巴结转移的发生。     

胃癌细胞株核因子κB组成性激活对细胞增殖的影响

目的探讨胃癌细胞株是否存在核转录因子(NF)-κB组成性激活及对胃癌细胞增殖的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)和蛋白免疫印迹法(Westernblot法)检测4株不同分化程度的胃癌细胞株NF-κB的mRNA和蛋白表达,比较4株胃癌细胞株中NF-κB的转录和蛋白质表达水平的差异,并利用TransAMTMNF-κBP65试剂盒比较不同胃癌细胞株中P65亚基的蛋白活性差异。采用噻唑蓝(MTT)比色法观察NF-κB活性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对胃癌细胞增殖的影响。结果4株胃癌细胞株中均存在NF-κB的组成性激活,且存在蛋白表达和活性差异。活化的P65亚基在MKN28、MKN45细胞株中表达较低,在AGS、SGC-7901细胞株中表达较高。经PDTC处理的实验组胃癌细胞的增殖明显受到抑制,对照组呈正常生长。结论胃癌细胞株中存在NF-κB组成性激活及P65蛋白表达差异。抑制NF-κB的活性可明显抑制胃癌细胞的增殖。     

亚砷酸钠诱导HSP 72在大鼠肝脏热缺血–再灌注损伤中的保护作用

目的:观察亚砷酸钠(SA)诱导大鼠肝脏产生热休克蛋白72(HSP72)的过程及其抗肝脏热缺血-再灌注损伤的作用。材料与方法:将24只SD大鼠随机分成SA组(预先给予SA6mg/kg)和对照组(预先给予生理盐水)。24h后,两组均阻断肝脏中、左叶血供60min,再灌注3、6h;分别用Westernblot检测肝脏中的HSP72表达;外周血测定ALT、AST、LDH;组织学作HE染色、免疫组化测定HSP72。结果:注射SA6mg/kg后12h肝脏开始产生HSP72,24h达到高峰,并持续至60h。肝脏热缺血60min再灌注3、6h后,SA组HSP72显著表达,血清ALT、AST、LDH显著下降(P<0.05),组织学检查显示肝脏损伤明显减轻。结论:SA可诱导大鼠肝脏产生HSP72;SA预先诱导肝脏产生对HSP72可使肝脏抵御热缺血鄄再灌注损伤。     

IRX1真核表达载体的构建及在胃癌细胞SGC-7901中的定位

目的 构建pEGFP-IRX1真核表达载体,体外转导至SGC-7901胃癌细胞株,观察IRX1基因转染后蛋白表达与细胞内定位.方法 PCR扩增IRX1全长1443 bp编码序列,将PCR扩增产物连接人pGEM-Teasy载体,经测序确认序列无误后,亚克隆入pEGFP-N1载体,构建pEG-FP-IRX1真核表达载体.采用Lipofectamine 2000转染SGC-7901胃癌细胞株,在荧光显微镜下观察外源性IRX1基因导入后在胃癌细胞内的表达与亚细胞定位.结果 成功构建有绿色荧光蛋白融合的IRX1真核表达载体,外源性IRX1基因在胃癌SGC-7901细胞中表达成功,在荧光显微镜下IRX1表达蛋白定位于细胞核内.结论 pEGFP-IRX1真核表达载体构建成功,并可在细胞内表达,这将为IRX1在胃癌内的功能研究奠定基础.     

结肠癌组织中TGFβ1及其Ⅱ型受体和Smad4蛋白的表达

目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Sm ad4的关系,及其在结肠癌中的可能作用机制。方法用EnV ision免疫组化法检测38例石蜡包埋人结肠癌标本中TGF-β1、TβRⅡ和Sm ad4蛋白的表达情况。结果TGF-β1阳性率为52.6%(20/38),65.8%的TβRⅡ和63.2%的Sm ad4表达下降。Sm ad4的表达与肿瘤分化程度及Dukes分期相关(P<0.05)。TGF-β1与TβRⅡ之间有相关关系(P<0.05)。结论TGF-β1与TβRⅡ对结肠癌的发生可能有协同作用。Sm ad4是TGF-β信号通路中的关键因子,但Sm ad4上游可能还存在其他信号通路,调控其表达。     

细胞增殖标记物MIB1(Ki-67)在乳腺癌中的表达及核分级的研究

目的　研究细胞增殖标记物ＭＩＢ１（Ｋｉ６７） 在乳腺癌中的表达以及肿瘤细胞核分级（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｇｒａｄｉｎｇ,ＮＧ）在浸润性导管癌中的应用价值,探讨ＭＩＢ１ 和ＮＧ二指标的内在联系。　方法　将石蜡切片置于０－０１ ｍｏｌＬ枸橼酸缓冲液内进行微波修复抗原处理,然后行ＭＩＢ１ 单克隆抗体ＬＳＡＢ免疫组织化学染色。镜下观察结果并计算每张切片内的ＭＩＢ１ 标记指数（ＭＩＢ１ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇｉｎｄｅｘ,ＭＩＢ１ ＬＩ） 。对浸润性导管癌根据癌细胞核大小、异型性及核分裂相多少进行核分级。对乳腺癌病例进行随访,随访期为１３ ～２４ 个月。　结果　乳腺癌的ＭＩＢ１ 表达明显高于乳腺良性病变;ＭＩＢ１ ＬＩ随着肿瘤由导管原位癌（８－２７±４－６６） 向浸润性导管癌（１６－１０±１１－６２）进展而明显增高（Ｐ＜ ０－０５）;伴随着浸润性导管癌细胞核分级的增加,ＭＩＢ１ ＬＩ也呈增高趋势。随访结果显示,一例ＮＧ３ 的浸润性导管癌（ＭＩＢ１ ＩＬ１４－１３） 于术后１１ 个月死于广泛转移（ 经尸体解剖证实）,该患者术后对放射治疗不敏感。　结论　ＭＩＢ１ ＬＩ在乳腺良恶性病变鉴别诊断中有辅助作用;在浸润性导管癌的预后判断中,ＭＩＢ１ ＬＩ与ＮＧ     

环孢素A及FK506对人肝癌细胞株增殖的影响

目的:探讨免疫抑制剂环孢素(CsA)及他克莫司(FK506)对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察CsA及FK506对QGY鄄7701、QGY鄄7703、SMMC鄄7721和BEL鄄7402等4株肝癌细胞增殖的影响。还应用Hoechst33258荧光染料涂片,在荧光显微镜下观察用药组细胞的形态学改变。结果:随着作用时间延长,10μM的CsA对4株肝癌细胞均呈现明显的生长抑制效应(P<0.01),而0.5μM的FK506与对照组相比,其生长抑制作用不明显(P>0.05)。荧光显微镜下CsA用药组肝癌细胞呈现凋亡改变;而FK506用药组与对照组无显著差异。结论:免疫抑制剂CsA非但未促进体外肝癌细胞生长,相反呈明显的抑制效应。FK506尽管未呈现对肝癌细胞增殖的抑制效应,也未显示有生长促进作用。CsA对肝癌细胞的增殖抑制作用与诱导癌细胞发生凋亡有关。