CAR-NK抗肿瘤研究的现状与发展趋势

作为固有免疫中重要的效应细胞,NK细胞具有强大的抗肿瘤功能,在肿瘤免疫治疗方面具有良好的应用前景.随着嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞(CAR-T)技术的兴起,NK细胞的CAR修饰潜力也受到了关注.CAR-NK的研发既传承了经典CAR-T研发的思路,也实现了诸多基于NK细胞生物特点的创新和发展.外周血NK细胞、NK细胞系和干细胞来源的NK细胞各具生物学特色,在CAR-NK研发中被广泛使用.已有靶向多种血液肿瘤和实体瘤抗原的CAR-NK在体外实验和动物模型中取得显著效果.虽然在临床暂未有数据支持CAR-NK的疗效且仍存在一些瓶颈问题需要攻克,但是CAR-NK有望在治疗实体瘤、简化免疫治疗等方面实现新的突破.     

雷公藤内酯醇对人宫颈癌细胞的凋亡诱导效应

目的:探讨腺病毒介导AFP基因修饰的DC(AFP-DC)瘤苗经不同途径免疫后机体抗肿瘤免疫应答反应.方法:采用皮下注射、静脉注射和瘤体注射三种途径回输AFP-DC瘤苗,比较观察AFP-DC瘤苗对荷瘤小鼠免疫治疗作用,应用4h51cr释放杀伤实验、T细胞与NK体内剔除实验等方法,观察AFP-DC瘤苗对荷瘤小鼠免疫治疗作用及保护性免疫反应.结果:皮下注射AFP-DC瘤苗治疗效果在抑制肿瘤生长、延长小鼠存活期方面都明显优于瘤体内注射或尾静脉注射(P＜0.05),AFP-DC瘤苗体内能更有效地诱导特异CTL细胞毒活性,能使免疫动物产生一定的免疫保护作用,抵抗肿瘤细胞的再攻击.在AFP-DC瘤苗诱导抗肿瘤免疫排斥反应过程中,必需有CD4 T和CD8 T细胞的参与;而在其效应阶段,则依赖于CD8 T细胞的参与,CD4 T细胞为非必需;在免疫诱导及效应阶段剔除NK细胞对抗肿瘤免疫应答无明显影响.结论:皮下注射AFP-DC瘤苗能有效诱导机体产生抗肿瘤免疫反应,为DC介导的肝癌免疫治疗开辟了新的途径.     

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。     

成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法促进化疗后造血功能恢复的实验研究

利用RT-PCR方法克隆到包括有全部编码序列和部分5′、3′端非编码序列的人G-CSF cDNA,并通过核苷酸测序得到证实。将其定向克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成人G-CSF的重组逆转录病毒表达载体pLGSN。体外经CRE和CRIP细胞的两次包装,病毒滴度达到了临床应用的水平(1.1×10~6CFU/ml)。hG-CSF逆转录病毒感染NIH3T3小鼠成纤维细胞后,分泌G-CSF达168U/ml,Southern分析表明hG-CSF基因已整合至NIH3T3-G-CSF细胞的基因组中,Northern和Western分析分别从mRNA和蛋白质水平证实了人G-CSF在NIH3T3-G-CSF细胞的表达。将NIH3T3-G-CSF细胞植入同系小鼠体内,能从血清中检测到持续表达的G-CSF活性。本研究为开展人G-CSF基因治疗奠定了基础。     

腹腔注射分泌粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的抗肿瘤肺转移作用

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义。作者观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒（ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹腔内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０６ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２次／周，连续治疗２周。结果显示，ＶＶＧＭ－ＣＳＦ能够显著减少荷瘤小鼠肺转移结节的数目，并明显延长荷瘤小鼠的存活期。研究发现，经过ＶＶＧＭ－ＣＳＦ治疗，小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤、吞噬及其释放一氧化氮的能力明显提高，结合其它实验结果，荷瘤小鼠持续表达ＧＭ－ＣＳＦ并导致以上巨噬细胞功能改变，可能是ＶＶＧＭ－ＣＳＦ的抗肿瘤转移作用机理之一。     

联合细胞因子基因转染对恶性胶质瘤的治疗作用及其免疫学机理的研究

人脑恶性胶质瘤的发病率高,疗效差,病人平均生存期不到一年.本研究将具有多种免疫学功能的IL-2基因和具有共刺激作用的B7-1分子的基因共转染恶性胶质瘤细胞,通过对其疗效的观察及对机体免疫功能的检测,探讨恶性胶质瘤免疫基因治疗的新途径.方法:①以重组腺病毒作载体,将IL-2基因和B7-1基因体外联合转染G422小鼠胶质母细胞瘤细胞,2h后洗去病毒.取1×10~5细胞,分别作小鼠皮下和脑内注射,观察肿瘤生长情况和动物存活期,注射后     

COMBINED IL-2/IL-3 GENE THERAPY FOR G422 MOUSE GLIOBLASTOMA BY INTRATUMORAL INJECTION OF RECOMBINANT ADENOVIRUSES

ＣＯＭＢＩＮＥＤＩＬ２／ＩＬ３ＧＥＮＥＴＨＥＲＡＰＹＦＯＲＧ４２２ＭＯＵＳＥＧＬＩＯＢＬＡＳＴＯＭＡＢＹＩＮＴＲＡＴＵＭＯＲＡＬＩＮＪＥＣＴＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＡＤＥＮＯＶＩＲＵＳＥＳ１ＨｏｎｇＢｏ２洪波ＣａｏＸｕｅｔａｏ３曹雪涛Ｙｕ...     

瘤内/瘤周注射M-CSF和/或IFN-γ基因转染的巨噬细胞对肿瘤的治疗作用

目前过继性回输活化的巨噬细胞治疗局部和转移性肿瘤的临床试验正在进行之中,但由于回输体内的巨噬细胞缺乏持续的刺激信号而影响了其抗肿瘤功能的充分发挥.若能将具有活化巨噬细胞功能的细胞因子——巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和IFN-γ基因转入巨噬细胞以同时增强其免疫效应功能和抗原提呈功能,再将此巨噬细胞用于治疗局部肿瘤,将有望而取得更好的抗癌效果.     

大肠杆菌CD自杀基因转染诱导肿细胞凋亡及旁观者效应的研究

以重组腺病毒AdCD为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因体外传染小鼠红白血病细胞FBL3,结果显示,转染了CD基因的FBL3细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性显著提高,进一步研究发现,AdCD/5-FC系统可以诱导肿瘤细胞发生凋亡;将经AdCD/5-FC处理过的FBL3细胞上清倍比稀释后,加入到野生型FBL3细胞中,发现当上清仅占6.25％时,即对野生型FBL3细胞发挥明显的杀伤作用,提示旁观者效应在AdCD介导的细胞毒作用中起着重要的作用。本实验还观察了CD基因体内转染后的杀伤效果,荷瘤小鼠局部注射AdCD并连续10天给予5-FC(300mg/kg)治疗后,小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制。     

THE THERAPEUTIC EFFECT OF INTRATUMORAL INJECTION OF GM-CSF GENE-MODIFIED ALLOGENIC MACROPHAGES ON TUMOR-BEARING MICE

ＴＨＥＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＥＦＦＥＣＴＯＦＩＮＴＲＡＴＵＭＯＲＡＬＩＮＪＥＣＴＩＯＮＯＦＧＭＣＳＦＧＥＮＥＭＯＤＩＦＩＥＤＡＬＬＯＧＥＮＩＣＭＡＣＲＯＰＨＡＧＥＳＯＮＴＵＭＯＲＢＥＡＲＩＮＧＭＩＣＥＹｕＹｉｚｈｉ于益芝ＣａｏＸｕｅｔａｏ?..