损伤抑制基因Dsup对人胚胎干细胞生物学性质的影响

目的 通过CRISPR/Cas9技术将水熊虫Dsup基因定点敲入胚胎干细胞（hESC-H9）的AAVS1位点,构建Dsup基因过表达的稳定细胞株,研究Dsup表达对hESC-H9生物学性质的影响。方法 构建CRISPR/Cas9 AAVS1位点敲入系统,采用PCR技术扩增Dsup序列,并将其插入pAAVS1-Donor-GFP-Puro,将构建的pAAVS1-Dsup-GFP-Puro与pAAVS1-CRISPR-Cas9载体共同转染hESC-H9,通过CRISPR/Cas9技术介导的同源重组使Dsup基因插入hESC-H9的AAVS1位点,经嘌呤霉素筛选后利用流式分选技术分选GFP、TRA-1-60、SSEA-4等3种荧光标记阳性的细胞群,获得稳定敲入Dsup基因并保持干性的细胞。将获得的hESC-H9-Dsup传至第9代,对Dsup mRNA表达水平、GFP、细胞表面干性标志物（TRA-1-60、SSEA-4）以及干性基因（OCT4、SOX2、NANOG）进行检测,并研究hESC-H9-Dsup的增殖、凋亡以及辐射耐受情况,以探索Dsup基因对hESC-H9生物学活性的影响。结果 ...     

转基因植物口服疫苗的免疫机制研究进展

植物作为新型的生物反应器正日益受到关注,转基因植物以其独有的可食(饲)性成为疫苗研究的热点之一。目前转基因植物口服疫苗的可行性已逐步得到证实,但相关的免疫机制尚在进一步的探索之中。实验证实植物细胞壁类似天然的“生物胶囊”,可在一定程度上保护表达在植物细胞内的疫苗抗原蛋白抵御消化道酶的作用。使疫苗抗原特异地定位表达于植物细胞的内质网、叶绿体等细胞器中,以及将抗原蛋白组装成病毒样颗粒,也均可增强其抗消化能力。适当选用免疫佐剂等可增强转基因植物疫苗免疫保护反应,选择合适的启动子等可提高目的基因在转基因植株中的表达量,这些均是增强转基因植物口服疫苗免疫保护反应、避免免疫耐受的可行策略。