血液灌流联合血液透析对急性肾衰竭患者外周血IL-1β、SAA、IL-10的影响

目的:观察血液灌流技术对急性肾衰竭(ARF)患者外周血促炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、血清淀粉样蛋白A(SAA)及抗炎症因子白细胞介素10(IL-10)表达的影响。方法:选择山西医科大学第二临床医院肾内科确诊的ARF患者80例,随机分为血液灌流联合血液透析组(HP+HD组)和单纯血液透析组(HD组)两组,每组40例。分别于治疗前、治疗后采血;另选20例健康体检者为对正常对照组;ELISA方法检测各组血清中IL-1β、SAA、IL-10水平。结果:①灌流及透析治疗前两组患者血清IL-1β、SAA水平均高于正常对照组(P<0.01),两组之间IL-1β、SAA水平差异无统计学意义(P>0.05);IL-10水平高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);②灌流及透析治疗后两组患者血清IL-1β、SAA水平较治疗前降低,其中HP+HD组差异有统计学意义(P<0.01),HD组差异无统计学意义(P>0.05);HP+HD组治疗后IL-10水平较治疗前有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05),HD组治疗前后IL-10水平无明显变化。结论:急性肾衰竭患者外周血促炎症因子IL-1β、SAA及抗炎症因子IL-10均较正常对照组升高,存在炎症反应;血液灌流能清除急性肾衰竭患者外周血中促炎症因子IL-1β、SAA,而对抗炎症因子IL-10无明显作用。     

Omi/HtrA2 shRNA重组真核表达质粒的构建及其在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型中的作用

目的 构建在哺乳动物细胞中表达的Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)的表达质粒,观察其对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2表达的影响.方法 根据Genbank中Omi/HtrA2 mRNA分别设计2对多聚核苷酸序列,退火形成互补双链DNA,分别克隆至经双酶切后的载体Pgenesil-1上,构建Omi/HtrA2特异性的shRNA表达载体PGP1和PGP2,进行酶切和测序鉴定.制作NRK-52E缺氧/复氧模型,将表达质粒通过脂质体介导转染NRK-52E,Westernblot检测Orni/HtrA2蛋白质表达.结果 将合成的DNA片段退火后克隆至Pgenesil-1载体上,构建Omi/HtrA2特异shRNA表达载体PGP1和PGP2;经酶切和测序证实构建成功,无碱基突变发生.将表达质粒介导转染NRK-52E缺氧/复氧模型后,细胞Chai/HtrA2蛋白质表达显著降低.结论 成功构建针对大鼠Omi/HtrA2基因的shRNA表达载体PGP1和PGP2,它们能有效抑制NRK-52E缺氧/复氧模型中Ckni/HtrA2表达.     

异基因骨髓移植后肾病综合征的临床与病理分析

目的探讨异基因骨髓移植后肾病综合征的临床和病理特点。方法对1例异基因骨髓移植后发生肾病综合征患者的临床、病理资料及治疗进行综合分析。结果本例患者在骨髓移植后28个月发生肾病综合征,在此之前患者有皮肤、口腔和肝脏损害表现;肾脏病理表现为膜性肾病。糖皮质激素及霉酚酸酯治疗后肾病综合征完全缓解。结论异基因骨髓移植后肾病综合征是慢性移植物抗宿主病的肾脏表现,可能为自身免疫性疾病,是移植物对宿主产生的一种排斥反应。肾穿刺活检对该病的诊断和预后判断具有重要价值,免疫抑制剂治疗有效。     

线粒体自噬对急性肾损伤的保护作用

近年来,全球范围内急性肾损伤(AKI)的发病率和死亡率增加。线粒体自噬通过清除受损、功能障碍的线粒体,在减少活性氧积累、维持细胞正常能量代谢、抑制炎症反应、维持线粒体动力学稳态等方面具有重要作用。研究表明在缺血再灌注损伤、顺铂、对比剂、脓毒症等诱导的AKI中,线粒体自噬缺陷促进肾小管上皮细胞损伤,导致肾功能下降。本文就线粒体自噬在AKI中的保护作用进行综述,旨在寻找新的治疗靶点,改善AKI患者预后。     

四例结核病并发IgA肾病患者的临床病理分析

IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球疾病,发病10～20年后20%～30%的患者会走向终末期肾病[1].其病因和发病机制尚不清,可能与黏膜免疫有关.结核菌感染是否能引起IgA肾病尚不清楚,国外有结核病并发IgA肾病的个案报道[2].     

Intermedin对血管紧张素Ⅱ诱导的NRK- 52E细胞纤维化的影响及机制研究

目的观察Intermedin(IMD)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞系NRK- 52E纤维化的影响,并探讨其机制。 方法体外培养的NRK- 52E细胞,随机分为4组：正常对照组、Ang Ⅱ组(10^－6mol/L)、转染IMD质粒＋Ang Ⅱ组、转染空质粒＋Ang Ⅱ组。采用Fugene HD转染试剂,将pIRES2- EGFP空质粒和pIRES2- IMD真核表达质粒分别转染至NRK- 52E细胞,应用流式细胞仪检测转染效率,转染成功48 h后用Ang Ⅱ(10^－6mol/L)干预24 h。用real- time RT- PCR检测各组细胞中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的表达;Western印迹法检测Col Ⅰ、E-钙黏蛋白(E- cadherin)的表达;ELISA法检测细胞培养上清液内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)的浓度。采用SPSS 17.0软件包进行统计学处理,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果与正常对照组相比,Ang Ⅱ组Col Ⅰ的表达显著上调(mRNA水平t＝4.835,P＝0.008;蛋白质水平P<0.001),E-钙黏蛋白的表达显著下降(t＝4.284,P＝0.013);转染IMD质粒后Col Ⅰ的表达较Ang Ⅱ组明显下降(mRNA水平t＝3.032,P＝0.039;蛋白质水平P<0.001),E-钙黏蛋白的表达明显上调(t＝6.054,P＝0.004);而转染空质粒后Col Ⅰ、E-钙黏蛋白的表达与Ang Ⅱ无明显差别(Col Ⅰ mRNA水平t＝0.951,P＝0.395;蛋白质水平t＝1.208,P＝0.294;E-钙黏蛋白蛋白质水平t＝1.613,P＝0.182)。与正常对照组相比,Ang Ⅱ组细胞上清液eNOS、cGMP的浓度显著增加(eNOS t＝20.718,P<0.001;cGMP t＝8.324,P＝0.001);与Ang Ⅱ组相比,IMD质粒＋Ang Ⅱ组的浓度进一步增加(eNOS t＝10.682,P<0.001;cGMP t＝18.974,P<0.001);而转染空质粒组＋Ang Ⅱ组eNOS及cGMP的浓度与Ang Ⅱ组无明显差别(eNOS t＝2.039,P＝0.111;cGMP t＝1.469,P＝0.216)。 结论IMD对Ang Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞纤维化有抑制作用,可能通过eNOS- cGMP途径阻断Ang Ⅱ的作用实现的。     

抗病毒药物的肾脏损害

新型有效的抗病毒药物的问世为许多难治性病毒感染性疾病,如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染、免疫缺陷患者的巨细胞病毒(CMV)感染等的治疗带来福音。但同时我们也观察到,许多抗病毒药物具有潜在的肾脏毒性作用,如药物引起的急性肾     

肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of adrenomedullin (AM) on apoptosis of renal tubular epithelial cell in rats induced by renal ischemia reperfusion injury. Methods Thirty-two Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group, IRI group, empty plasmid group and AM group. One week after removing the right kidney, eukaryotic expression vector encoding rat AM gene was transfected into the left kidney using an ultrasound-microbubble mediated system. After 1 week the transfer efficiency was detected by immunohistochemical method . Renal IRI model induced by clamping left renal arteries for 45 min followed by reperfusion for 24 h. Tubular cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Bcl-2, Bax and Fas expressions were examined by RT-PCR. The expressions of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were determined by Western bolt analysis. Results The expression of AM in the AM group was significantly higher than the empty plasmid group (0.51±0.09 vs 0.23±0.05; P<0.05). Compared with the control group, the apoptosis rate of renal tubular cell in the IRI group was significantly higher [(38.79±7.52)% vs (2.89±0.52)%; P<0.05]. The expressions of Bax, Bcl-2, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were also significantly increased (0.72±0.18 vs 0.23±0.04, 0.80±0.12 vs 0.38±0.06, 1.24±0.25 vs 0.39±0.09, 0.76±0.13 vs 0.38±0.08, 0.92±0.14 vs 0.32±0.06, 0.89±0.12 vs 0.42±0.09; P<0.05). Bax/Bcl-2 was also significantly increased (0.91±0.18 vs 0.61±0.08; P<0.05). Compared with the IRI group, AM pretreatment significantly decreased the apoptosis rate of renal tubular cells [(19.36±6.78)% vs (38.79±7.52)%; P<0.05]. AM inhibited the up-regulation of Bax, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, while promoting the up-regulation of Bcl-2 (0.48±0.11 vs 0.72±0.18, 0.62±0.07 vs 1.24±0.25, 0.53±0.08 vs 0.76±0.13, 0.46±0.08 vs 0.92±0.14, 0.51±0.12 vs 0.89±0.12, 1.23±0.25 vs 0.80±0.12; P<0.05). Bax/Bcl-2 significantly decreased (0.44±0.12 vs 0.91±0.18; P<0.05). The above parameters had no significant diffe-rence between the empty plasmid group and the IRI group (P>0.05). Conclusion AM can reduce apoptosis of renal tubular epithelial cell induced by renal IRI, the mechanism of which might be achieved by inhibiting caspase-dependent intrinsic and extrinsic pathways.