人脂肪来源间充质干细胞成骨及成软骨的潜能

背景:人脂肪来源间充质干细胞是种具有较强的体外增殖和多系分化能力的成体干细胞,可以从美容吸脂手术中获得,取材方便,原料来源丰富,在生物治疗应用方面蕴藏着巨大的价值。目的:体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,探讨其基本生物学特性及成骨成软骨的潜能。方法:取美容吸脂获得的脂肪组织,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养;观察细胞形态、测定细胞周期、流式细胞仪鉴定细胞表面标志;取第3代细胞,分别加入成骨诱导培养基及成软骨诱导培养基行体外成骨及成软骨诱导。结果与结论:体外培养人脂肪来源间充质干细胞呈纤维样形态,原代细胞24h内贴壁,培养5~7d后开始形成细胞集落;经细胞周期检测显示G0/G1,S和G2/M所占比例分别为(88±2)%,(12±2)%和0.03%。经流式细胞仪检测CD29和CD105呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达。RT-PCR检测显示,人脂肪间充质干细胞经成骨诱导分化后细胞中骨桥蛋白mRNA呈阳性表达,经软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原mRNA呈阳性表达。结果证实,实验成功体外分离、培养人脂肪来源间充质干细胞,其具有向成骨细胞和软骨细胞分化的潜能。     

胸部小切口心内直视手术810例临床应用

目的探讨胸部小切口在心内直视手术中的应用价值。方法1995年12月～2008年1月，经胸部小切口行心内直视手术810例，包括先天性心脏病660例，瓣膜病129例，心脏黏液瘤21例。经胸骨正中上段小切口手术36例，胸骨正中下段小切口59例，右胸骨旁小切口3例，右胸前外侧小切VI658例，右腋下小切口54例。其中382例在心脏跳动下手术。结果术后死亡12例，手术死亡率1．5％。术后呼吸机辅助（6．7±4．2）h，术后引流量（210±165）ml，术后住院时间（7．4±4．9）d，421例（52％）未输血。术后无胸骨裂开、纵隔感染。术后随访690例（85％），随访（48．2±25．3）月，无远期死亡。心功能Ⅰ级478例，Ⅱ-Ⅲ级212例，Ⅳ级0例，明显好于术前（310、438、62例，Z=-13．21，P=0．000）；心胸比率0．51±0．11（0．37～0．75），明显低于术前（0．53．4-0．08，t=4．065，P=0．000）；左心室射血分数0．63±0．11（0．36～0．75），明显高于术前（0．57±0．11，t=-10．529，P=0．000）。结论胸部小切口心内直视手术具有切口隐蔽美观、胸骨畸形及感染发生率低等优点，但必须选择适合的病例，应用必要措施改善显露，加上熟练的手术技巧，才能取得良好的手术及美学效果。     

浅低温心脏不停跳心内直视手术577例临床分析

目的总结浅低温心脏不停跳心内直视手术的经验,并探讨临床应用价值。方法回顾性分析行浅低温不停跳心内直视手术的577例患者,包括先天性心脏病539例,心脏瓣膜病22例,心脏粘液瘤16例。结果术后死亡7例（1.2%）,出现一过性血尿98例（17.0%）。随访496例,平均时间（48.2±25.3）月,无远期死亡。术后心功能Ⅰ级329例,Ⅱ级135例,Ⅲ级32例,较术前有明显改善。复查超声心动图,无缺损残余漏、瓣周漏,心脏粘液瘤无复发。结论浅低温不停跳体心内直视手术适用于大多数简单的先心病,能较大程度地避免心肌缺血、缺氧损伤,有利于心肌保护,有助于防止缺损残漏和传导阻滞的发生;但不能提供安静无血的手术野,显露相对较差,增加了手术难度。     

多孔丝素蛋白/羟基磷灰石复合脂肪间充质干细胞修复兔关节软骨及软骨下骨缺损

背景：丝素蛋白/羟基磷灰石是细胞立体培养的良好支架,是临床常用的骨缺损修复材料,具有良好的生物相容性。脂肪干细胞具有向骨及软骨细胞分化的潜能,适合骨软骨缺损修复。 目的：观察转化生长因子β1和胰岛素样生长因子1联合成软骨诱导脂肪干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石复合后修复兔关节软骨及软骨下骨缺损的效果。 方法：取新西兰大白兔56只,2只用于传代培养脂肪间充质干细胞,以3×109 L-1浓度接种到丝素蛋白/羟基磷灰石。其余54只新西兰大白兔,在股骨髁间制备软骨缺损模型,随机分为细胞复合材料组、单纯材料组和空白对照组,细胞复合材料组植入复合脂肪间充质干细胞的丝素蛋白/羟基磷灰石;单纯材料组植入丝素蛋白/羟基磷灰石;空白对照组不作任何植入。从大体、影像学、组织学观察比较缺损的修复情况。 结果与结论：12周时大体观察、CT、磁共振和组织学检查细胞材料复合组软骨及软骨下骨缺损区完全被软骨组织修复,修复组织与周围软骨色泽相近,支架材料基本吸收,未见明显退变和白细胞浸润,所有标本均未见丝素蛋白残留。单纯材料组缺损区缩小、部分修复,且呈纤维软骨样修复。空白对照组缺损无明显修复。提示复合脂肪间充质干细胞的丝素蛋白/羟基磷灰石修复兔关节软骨及软骨下骨缺损能力优于单纯丝素蛋白/羟基磷灰石材料。丝素蛋白/羟基磷灰石复合脂肪间充质干细胞可形成透明软骨修复动物膝关节全层软骨缺损,重建关节的解剖结构和功能,可作为新型骨软骨组织工程支架。     

冠状动脉旁路术同期进行心脏瓣膜替换术对冠心病心脏瓣膜病变的疗效分析

目的探讨冠状动脉旁路术同期进行心脏瓣膜替换术对冠心病心脏瓣膜病变的临床治疗效果。方法选择2013年6月28日至2014年6月28日于该院就诊的64例冠心病心脏瓣膜病变患者,对所有患者均选择冠状动脉旁路术,并同期采用心脏瓣膜替换术进行治疗,分析心功能恢复情况、并发症发生率、随访情况。结果相比治疗前,治疗后患者左心室射血分数明显提高,左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径明显降低(P0.05);术后并发症发生率为7.81%;患者呼吸机使用时间、重症监护室监护时间、住院时间分别为(34.61±2.84)h、(4.72±1.63)d、(13.31±2.32)d;术后随访得知,61例(95.31%)患者心功能明显改善。结论对冠心病心脏瓣膜病变患者采用冠状动脉旁路术同期心脏瓣膜替换术治疗的效果显著,并发症发生率较低,可明显改善患者的心功能,值得临床推广应用。     

聚焦超声介导阳离子脂质体携带HSV-TK增强基因转染及联合更昔洛韦对大鼠胶质瘤C6细胞的影响

目的探讨聚焦超声对载单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因阳离子脂质体体外基因转染的影响,及其联合更昔洛韦(ganciclovir,GCV)对大鼠脑胶质瘤C6细胞的影响。方法制备含HSV-TK基因质粒,利用阳离子脂质体转染至对数期大鼠胶质瘤C6细胞,并随机分为脂质体组和超声1、2、3、4min组,脂质体组加入含9μg阳离子脂质体-HSV-TK基因质粒的100μL培养液;超声1、2、3、4min组在脂质体组基础上分别给予体外超声(1 MHz,功率3W/cm2,电压150mvPP)辐照1、2、3、4min。5组C6细胞均于37℃、体积分数5%CO2培养箱,含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养液,继续培养48h。转染48h后,荧光显微镜下观察载HSV-TK基因阳离子脂质体转染效率。将对数生长期C6细胞接种于96孔板,依据转染效率实验结果分为GCV组、超声3min+GCV组,超声3 min+GCV组加入9μg阳离子脂质体-HSV-TK基因质粒的100μL培养液,并超声辐照3min,GCV组转染空白阳离子脂质体;转染24h后,2组均分别加入0.1、1、10、50、100、1 000mg/L GCV作用48h,采用分光光度法检测C6细胞存活率。结果转染48h后,超声1、2、3、4min组C6细胞HSV-TK基因转染效率[(0.14±0.07)%、(1.39±0.11)%、(19.61±4.80)%、(18.81±7.92)%]均高于脂质体组[(0.05±0.01)%](P0.05),且超声3、4min组转染效率高于超声1、2min组,超声2 min组转染效率高于超声1 min组(P0.05),超声3 min组与超声4min组转染效率比较差异无统计学意义(P0.05);随GCV浓度增加,GCV组和超声3min+GCV组C6细胞存活率均逐渐降低;GCV为50、100、1 000mg/L时,超声3min+GCV组C6细胞存活率[(85.88±1.80)%、(75.51±1.43)%、(68.17±5.26)%]均低于GCV组[(95.40±0.85)%、(92.62±4.50)%、(83.66±0.98)%](P0.05);GCV为0.1、1、10mg/L时,超声3min+GCV组C6细胞存活率[(99.32±3.01)%、(97.01±1.53)%、(94.50±1.15)%]与GCV组[(99.56±5.14)%、(98.60±5.18)%、(97.39±8.06)%]比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论聚焦超声体外辐照可明显提高载HSV-TK基因阳离子脂质体转染效率,增强GCV的抗胶质瘤作用。     

Triple-Endobutton钢板在治疗RockwoodⅢ度以上肩锁关节脱位的临床疗效研究

目的：探讨Triple-Endobutton钢板在治疗RockwoodⅢ度以上肩锁关节脱位的临床疗效。方法：采用回顾性分析的方法,自2009年1月至2011年12月采用钩钢板治疗RockwoodⅢ度以上肩锁关节脱位患者25例,2012年1月至2015年12月Triple-Endobutton钢板手术治疗RockwoodⅢ度以上肩锁关节脱位25例。比较两组患者术后3个月、6个月的患侧肩膀视觉模拟评分(VAS),并采用Constant-Murley评分进行肩关节功能评定。结果：所有患者获得随访,时间6-12个月,平均9个月。术后3月Endobutton组的VAS评分及肩关节Constant-Murley评分明显优于钩钢板组(P<0.05);术后6月Endobutton组的VAS评分优于钩钢板组(P<0.05),而Constant-Murley评分与钩钢板组无明显统计学差异。结论：Triple-Endobutton钢板重建喙锁韧带治疗肩锁关节脱位能有效降低术后肩部疼痛,对肩关节功能影响小,有利于肩关节功能的早期恢复,临床疗效满意。     

冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响

目的 观察冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白（ oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的调控作用。方法 将RAW264.7巨噬细胞分为对照组,模型组,冠心平含药血清低、中、高剂量组,以80 μg/mL ox-LDL刺激24 h,诱导巨噬细胞泡沫化模型,采用不同浓度冠心平含药血清进行干预。油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成;ELISA法检测巨噬细胞内游离胆固醇（free cholesterol,FC）与胆固醇酯（cholesterol esterase,CE）的表达水平;实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞清道夫受体A（scavenger receptor-A,SR-A）和CD36 mRNA表达水平。结果 冠心平中、高剂量能够显著减少巨噬细胞泡沫化;低剂量显著增加巨噬细胞FC水平（P<0.05）,高剂量显著降低巨噬细胞CE水平（P<0.05）;冠心平高剂量显著增加SR-A mRNA表达水平（P<0.05）,低、中、高剂量均显著增加CD36 mRNA表达水平（P<0.05）。结论 冠心平能够抑制巨噬细胞的泡沫化,这或许是冠心平治疗动脉粥样硬化的潜在机制之一。     

低强度聚焦超声触发PLGA阿霉素在细胞内空化增加乳腺癌细胞死亡

探讨低强度聚焦超声能否触发聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）包裹阿霉素在细胞内的空化作用以增加4T1肿瘤细胞的死亡。     

载尿激酶阴离子脂质微泡联合低频超声体外溶栓的效率研究

目的制备载尿激酶（uPA）阴离子脂质微泡,探讨其联合低频超声的体外溶栓效果。方法利用二硬脂酸磷酯酰胆碱（DSPC）、二棕榈酰磷酯酰甘油（DPPG）、PEG2000修饰二硬脂酸磷酯酰乙醇胺（DSPE-PEG2000）3种磷脂,通过机械振荡法制备阴离子微泡,再将微泡与uPA混合孵育,两者结合即得载药微泡,用粒径分析仪测定其粒径及分布。用FITC标记uPA,制得荧光标记的载药微泡,在荧光显微镜下观察微泡的形态及uPA与微泡的黏附情况。用Zeta电位仪分别测定载药微泡与未载药微泡的表面电荷;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）对载药微泡进行验证;测量加入10000、50000和100000UuPA时微泡的包封率。抽取大鼠血液制作体外血栓模型,测定载药微泡联合低频超声的体外溶栓效果。采用两样本t检验、单因素方差分析及Bonferroni法进行数据比较。结果载药微泡的平均粒径为（1．76±0．29）μm,在荧光显微镜下可以观察到FITC标记的uPA成功结合到阴离子微泡表面。载药微泡的表面电荷明显低于未载药微泡的表面电荷：（-36．64±0．21）mV与（-66．33±2．38）mV,t=21．538,P〈0．05;SDS—PAGE显示载药微泡的泳道有明显的蛋白质条带,而未载药微泡没有;当uPA加入量分别为10000、50000和100000U时,药物包封率分别为（42．01±2．02）％、（33．24±1．95）％和（33．10±1．65）％（F=22．340,P〈0．05）。生理盐水组、生理盐水±超声组、未载药微泡±超声组、载药微泡±超声组、单纯uPA组的体外溶栓效率分别为（4．09±0．80）％、（8．50±1．48）％、（14．27±1．59）％、（35．72±6．31）％、（16．87±0．46）％,载药微泡超声组最高（F=48．783,t=-8．613、-7．273、-5．942及-6．908,均P〈0．05）。结论阴离子微泡能成功搭载uPA,该微泡联合低频超声的溶栓效果良好。