小脑颗粒神经元凋亡差异表达基因的分离克隆研究

目的筛选分离低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡的差异表达基因。方法采用低钾处理的小脑颗粒细胞,抽提细胞总RNA,用荧光法mRNA差异显示技术分离差异表达基因,并对差异表达基因片段进行回收、克隆,经反向RNA印迹及RT鄄PCR技术验证。结果发现51条差异片段,成功克隆8个片段,其中2个未知功能的基因片段证实在低钾诱导的小脑颗粒细胞凋亡中表达增加。结论mRNA差异显示法是分离差异表达基因的一个良好的工具,分离出的差异基因与神经细胞凋亡有关。     

表皮生长因子含漱液中mEGF活性及热稳定性的实验研究

目的:检测表皮生长因子(mEGF)在口腔局部用药制剂中活性和热稳定性.方法:采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法.结果:mEGF在对不同温度活性比较中作t检验,各组间无统计学差异.结论:表皮生长因子是一种高度生物活性多肽物质,因结构紧密,对热比较稳定,是所有细胞生长因子中唯一能耐受热的一种生物活性蛋白质,在加入朵贝氏溶液中无抑制活性作用.     

鳖甲煎丸含药血清对肝癌细胞Bel-7402增殖的影响及其可能机制

【立题依据及设计思路】 原发性肝癌是一种常见恶性肿瘤,探索行之有效的治疗方法,是一个亟待解决的问题。鳖甲煎丸是医圣张仲景所创,研究表明具有较好的抑制肝癌生长,防止肝癌转移的作用,但其机制不明。本实验拟观察鳖甲煎丸含药血清对肝癌Bel-7402细胞生长的影响,从细胞凋亡和肿瘤血管新生角度探讨其抗癌机制,为临床应用此方治疗肝癌提供理论与实验依据。 【实验内容】 (1)大鼠含药血清的制备;(2)MTT法检测不同剂量鳖甲煎丸含药血清对Bel-7402细胞增殖的影响;(3)流式细胞术检测含药血清对Bel-7402细胞凋亡情况;(4)蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、ERK1、p-ERK、JNK、p-JNK等相关凋亡蛋白含量的变化,探讨其影响MAPK信号通路传导,促进肿瘤细胞凋亡的作用机制;(5)蛋白质印迹法检测肿瘤细胞VEGF、Delta-4、NICD等蛋白表达变化,探讨鳖甲煎丸影响VEGF-D114-Notch信号通路传导,抑制肿瘤血管生成的作用机制。 【材料】 SD大鼠、胎牛血清、中药、5-FU、相关抗体等。 【可行性】 (1)鳖甲煎丸以活血、补益、散结为主,既有攻伐之效,亦含补益之功。课题组前期在体实验证明鳖甲煎丸具有较好的抑瘤功效。血清药理学对于中药复方制剂的复杂化学成分能更好的反映药物在体内环境中产生药理效应的真实过程,在理论上具可行性。(2)课题组成员已掌握相关实验技术。(3)科研中心仪器设备能满足实验所需。 【创新性】 中药在抑制肝癌细胞增殖、控制瘤体生长等方面具有独特的优势。目前对中药抗肿瘤的研究仍以单味药或药物单体成分及临床经验方为主,而中医经典复方对肿瘤相关信号通路影响的研究则相当少见。本课题在前期鳖甲煎丸抑制S180实体瘤研究的基础上,通过体外实验观察其对人肝癌细胞Bel-7402的影响,并运用血清药理学、形态学、流式细胞术、MTT、蛋白质印迹等方法,试图从促进肿瘤细胞凋亡及阻碍瘤体内血管生成两方面,探讨鳖甲煎丸治疗肝癌的可能机制。本研究在思路上,将传统中医药理论与现代医学分子生物学理论相结合,探讨中药复方治疗肝癌机制。为中医经典复方治疗肿瘤提供理论基础。     

胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系

用凝胶电泳和fura-2荧光技术测定［Ca²⁺］_i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与［Ca²⁺］_i升高之间的关系. 将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾（25 mmol·L^-1 KCl）培养基中转移到低钾（5 mmol·L^-1 KCl）培养基中,神经元发生凋亡. 但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因（5-20 mmol·L^-1）浓度依赖性地保护,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定(ryanodine) 敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林(dantrolene)的影响;也不被Ｌ-型钙通道阻断剂硝苯地平, 尼莫地平, 维拉帕米和NMDA受体阻断剂地佐环平抑制. 结果说明［Ca²⁺］_i的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的.     

限制性差异显示RT-PCR技术对大鼠脑缺血相关基因表达的研究

目的研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血与非缺血组织中基因表达的差异,以及差异表达基因随时间变化的规律,为临床寻找新的防治脑缺血的靶点奠定基础。方法采用线栓法制备大鼠不同时间脑缺血动物模型,采用限制性差异显示RTPCR技术(restrictiondisplayRTPCR,RDRTPCR),研究在大鼠局灶性脑缺血过程中差异基因的表达。结果在缺血后各时间点分别出现上调的EST片段有32条、下调的有13条。其中7条在缺血0.5、1.0、4.0小时均出现变化,分别系同一对引物所扩增且分子量相同,其在脑缺血中的表达具有一定的规律性。结论利用RDRTPCR技术成功获取了大鼠脑缺血过程中差异表达的基因,并揭示了部分基因在脑缺血过程中呈现的规律性变化,为进一步筛选、鉴定与克隆表达这些与脑缺血密切相关的基因,阐明脑缺血发病机制奠定基础。     

氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的 研究氯胺酮预先给药对缺氧复氧诱导大鼠小脑颗粒神经元（CGNs）凋亡的影响，及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）／Akt通路在其中的作用。方法 出生7-8d的清洁级SD大鼠，雌雄不拘，体重15～20g；制备CGNs，培养的8d的CGNs随机分为5组，对照组（A组）、缺氧复氧组（B组）、氯胺酮预先给药组（C组）、PDK／Akt通路的特异性抑制剂Ly294002-氯胺酮预先给药组（D组）、Ly294002组（E组）。B组将CGNs放入特制缺氧盒中，缺氧3h后复氧；C组缺氧前1h加入200μmol／L氯胺酮；D组加入氯胺酮前30min加入20μmol／LLy294002；E组加入20μmol／LLy294002。复氧16h后进行下述指标的观察。二乙酸荧光素染色法测定CGNs存活率，Hoechst33258核染色检测CGNs凋亡细胞核，琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化水平，蛋白免疫印迹法（Western blot法）检测CGNs磷酸化Akt、磷酸化GSK3β及总Akt水平。结果缺氧复氧可诱导CGNs的凋亡，降低CGNs磷酸化Akt和磷酸化GSK3β水平（P〈0．05），氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导的上述改变，氯胺酮对CGNs的这种保护作用可被Ly294002部分抑制。结论 氯胺酮预先给药可减轻缺氧复氧诱导大鼠CGNs凋亡，其机制与激活PI3K／Akt通路有关。     

论如何提高中医药文化的软实力

介绍中医药文化的作用、现状及其原因,并提出增强中医药文化软实力的措施,即在校园中推广中医药文化,并加强高素质中医药人才培养。     

柯达MTB型洗片机的几例特殊故障

（1）故障现象：烘干温度失控，加热器持续加热，烘干传动系统内温度高达90℃以上，致使齿轮和滚轴及两端接头处轮翻损坏，加热能风管也因温度过高而变形，严重影响正常使用。     

尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶FⅡa对不同血栓模型的溶解作用(英文)

目的:本文研究尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶FⅡ_a体内的溶栓作用。方法:采用兔颈动脉血栓模型,大鼠颈动脉血栓模型和大鼠大脑中动脉血栓模型三种动脉血栓模型,观察FⅡ_a的体内溶栓活性。结果:FⅡ_a剂量为0.625mg/kg时,对兔颈动脉血栓和大鼠颈动脉血栓即有溶解作用;而在1.25mg/kg时,对大鼠大脑中动脉血栓才有溶解作用。随着剂量的增加,对三种血栓的溶解作用相应增强。大鼠的肾、肝、心、肺组织学检查没有发现出血。结论:FⅡ_a在体内能够溶解血栓,并且在有效的溶栓剂量下不会引起出血反应。     

彩色多普勒超声和黑白B超检测精索静脉曲张症对比分析

精索静脉曲张是青壮年男性较常见的疾病,其导致男性不育已引起越来越广泛的重视和研究,目前,彩色多普勒超声是公认的诊断精索静脉曲张的主要和较准确的方法。但此法仅限于已配备有彩色多普勒超声的大医院开展,本研究意在能过彩色多普勒超声和黑白B超检测精索静脉曲张症的对比分析,探讨黑白B超诊断精索静脉曲张症,使其能在基层医院普遍开展。