基于Cyclin D1基因敲减探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的机理

目的验证Cyclin D1及其下游信号蛋白对成骨细胞增殖的调控作用,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制。方法培养成骨样细胞株UMR-106,运用CRISPR/Cas9技术敲减Cyclin D1基因后,将细胞分为基因敲减+生理盐水组(组1)、基因敲减+健骨颗粒组(组2)、病毒空载体细胞(组3,阴性对照)。未行基因敲减的细胞分为正常细胞+生理盐水组(组4)和正常细胞+健骨颗粒组(组5)。分别用生理盐水血清或健骨颗粒含药血清干预各组细胞24、48、72 h,通过CCK8法检测细胞增殖情况,利用Real time PCR检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK 2、CDK 4、Rb及E2F-1基因的表达水平。结果经Western-bolt检测表明基因敲减的成骨细胞Cyclin D1蛋白表达明显下降。CCK8法检测结果显示,与组4相比,组5增殖速度变快(P0. 05),组3增殖速度无差异(P0. 05),组1和组2增殖速度均减慢(P0. 05);与组5相比,组2增殖速度减慢(P0. 01);与组1相比,组2增殖速度无统计学意义(P0. 05)。Real time PCR检测结果显示,与组4相比,组5 Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin E、Rb及E2F-1 mRNA的表达明显增高(P0. 05或P0. 01),组3表达无统计学意义(P0. 05),组1和组2表达明显降低(P0. 05或P0. 01);与组5相比,组2增殖速度减慢(P0. 01);与组1相比,组2无统计学意义(P0. 05)。结论 Cyclin D1及其下游信号蛋白是调控成骨细胞增殖的关键因素;健骨颗粒可以通过调节Cyclin D1及其下游信号蛋白促进成骨细胞增殖。     

锁定加压接骨板结合自体髂骨移植治疗无菌性尺骨干骨不连的结果分析

目的 :探讨锁定加压接骨板结合自体髂骨移植治疗无菌性尺骨干骨不连的临床治疗结果。方法 :自2009年3月至2017年7月,对取得完整随访资料的22例无菌性尺骨干骨不连患者实施手术治疗,其中男12例,女10例;年龄16～58(39.7±9.9)岁;病程10～192(39.4±55.7)个月。萎缩型骨不连15例,肥大型骨不连5例,滑膜假关节型骨不连2例。骨不连断端清创后给予锁定加压接骨板固定,并给予自体髂骨植骨。对骨愈合率、手术并发症和临床结果进行评价。结果:所有患者获得随访,时间13～42(22.5±8.2)个月,1例未愈合。视觉模拟疼痛评分0～3(0.9±0.9)分,前臂旋前47～86(69.0±14.7)°,旋后35～85(63.0±9.4)°,腕关节伸直20～80(51.0±10.2)°,腕关节屈曲32～88(71.0±11.7)°,肘关节屈曲挛缩0～25(9.0±5.6)°,进一步屈曲105～150(134.0±13.9)°,手部抓握力为对侧的87%。根据Anderson功能评分标准,优8例,满意11例,不满意2例,失败1例。结论:锁定加压接骨板结合自体髂骨移植可以有效治疗无菌性尺骨干骨不连。     

消化系统疾病并发骨质疏松症与肠道菌群的关系探讨

随着全球人口老龄化,骨质疏松症的发病率逐年增高,在我国,50岁以上人群中骨质疏松症总患病率达15.7%,预计到2020年,我国骨质疏松和低骨量患者将增加至2.8亿,骨质疏松症已经成为影响我国老年人口生活质量的重大公共卫生问题。消化系统疾病并发骨质疏松症,其发生机制较复杂,目前仍未彻底阐明,常常并发骨质疏松症的消化系统疾病有胃切除术后、慢性肝脏疾病、炎症性肠病等。研究发现,消化系统疾病伴随着肠道菌群的失调,而肠道菌群与骨质疏松症从发病、发展及治疗等方面关系密切,越来越多的研究表明肠道菌群失衡与多种代谢性疾病的发生发展紧密相关,因此,骨质疏松症作为一种全身性骨代谢疾病,其与肠道菌群失衡之间的关系近年来逐渐受到关注。从肠道菌群的视角探讨消化系统疾病并发骨质疏松症的机制,对于开拓该类合并症的防治思路具有启示意义。     

成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者骨密度变化及影响因素分析

目的探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults,LADA)患者骨密度(bone mineral density,BMD)变化及其影响因素。方法选取2013年4月至2016年6月于武警浙江总队杭州医院内分泌科确诊的LADA患者43例,作为LADA组,另选同期健康体检人员40名作为对照组。检测两组受试者代谢指标空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2 h血糖(2 h postprandial blood glucose,2 h PBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、血钙、血磷、24 h尿钙、24 h尿磷、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、尿微量蛋白(microalbuminuria,MAU)水平,并检测腰椎2~4BMD及股骨颈BMD进行比较。同时研究L2~4BMD及股骨颈BMD与代谢指标水平之间的关系,并分析L2~4BMD及股骨颈BMD的影响因素。结果两组受检者血磷、24 h尿磷、ALP水平均无明显差异(P0.05),LADA组FPG、2hPBG、HbA1c、24h尿钙及MAU均明显高于对照组(P0.05),LADA组血钙明显低于对照组(P0.05);LADA组L2~4、股骨颈BMD均明显低于对照组(P0.05);L2~4BMD与HbA1c、MAU呈负相关(r=-0.351、-0.242,P0.05),与血钙呈正相关(r=0.396,P0.05);股骨颈BMD与HbA1c、MAU呈负相关(r=-0.462、-0.118,P0.05),与血钙呈正相关(r=0.411,P0.05)。结论LADA患者的骨密度明显低于健康受试者,性别、血钙、MAU为L2~4BMD的影响因素,年龄、性别、血钙、MAU为股骨颈BMD的影响因素。     

紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬相关蛋白LC3的表达及其作用

目的:探讨紫杉醇对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响及意义。方法:用CCK-8法测定紫杉醇对TNBC细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用及25%抑制浓度(IC_(25));用IC_(25)浓度的紫杉醇作用MDA-MB-231细胞后,分别用免疫荧光化学法、Western blot、流式细胞术检测细胞LC3与凋亡相关蛋白的表达及细胞的凋亡率。结果:紫杉醇呈浓度依懒性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P0.05),其IC_(25)为3.11μg/m L。IC_(25)浓度的紫杉醇处理后,MDA-MB-231细胞后LC3的表达量以及LC3B/LC3A比例明显升高、凋亡蛋白Bax与caspase-3蛋白表达量明显降低、总凋亡率与早期调亡率均明降低(均P0.05)。结论:紫杉醇可诱导TNBC细胞自噬相关蛋白LC3表达升高,该作用可能降低细胞凋亡,从而导致TNBC细胞产生紫杉醇耐药。     

关节镜下双通道双根线固定治疗胫骨髁间棘骨折疗效分析

目的:探讨关节镜下应用双通道双根线治疗胫骨髁间棘骨折的可行性及近期疗效。方法 :2012年5月至2017年6月对21例胫骨髁间棘骨折患者行关节镜下双通道双根线固定,其中男16例,女5例;年龄17～45岁,平均29.6岁;受伤至手术时间3～6 d,平均3.6 d。所有病例行关节镜探查,骨折复位,双通道双根线固定。术后3、6个月采用Lysholm膝关节评分评定膝关节功能,并通过X线片检查随访患者骨折愈合及复位情况。结果 :所有患者获得随访,时间7～23个月,平均12.8个月。术后所有患者骨折骨性愈合,膝关节活动度恢复良好,膝关节活动范围0°～130°,无患肢功能障碍。患者术后3、6个月的Lysholm膝关节评分分别为93.52±7.10,95.95±6.34。结论:关节镜下应用双通道双根线治疗胫骨髁间棘骨折,操作简便,疗效可靠,可为胫骨髁间棘骨折提供一种较为理想的内固定方法。     

伤寒沙门菌不同生长期和不同应激下非编码RNA ArpH的表达

［摘要］目的: 探讨伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S. Typhi) 在不同生长时期和不同应激条件下非编码RNA ArpH的表达水平,以及双组分调节系统和氧应激调节因子对ArpH的调控作用。方法: 利用RNA印迹、qRT PCR分析伤寒沙门菌在不同生长期ArpH的表达;利用qRT PCR分析伤寒沙门菌在酸、氧、高渗和热等不同应激环境下ArpH的表达;利用qRT PCR分析伤寒沙门菌双组分调节系统基因(ompR、rcsB)和氧应激调节因子基因(oxyR)对ArpH表达的影响。结果： ArpH在伤寒沙门菌的对数晚期表达量最高,在从对数早期开始到达稳态期的转变中,其表达量逐渐增加,而进入稳态期后明显回落;ArpH表达水平在酸应激下明显下降,氧应激下明显增高,而高渗应激和42℃热应激下ArpH的表达无显著变化;当ompR、rcsB和oxyR基因缺失时,ArpH表达量均明显下降。结论： ArpH参与伤寒沙门菌对酸、氧应激的调节;伤寒沙门菌双组分调节系统OmpR、RcsB和氧应激调节因子OxyR对ArpH均有正向调控作用。     

非编码 RNA GlmY 对伤寒沙门菌生物膜形成的影响

目的: 探究非编码 RNA GlmY 对伤寒沙门菌生物膜形成的影响及其分子机制。方法: 用自杀质粒pGMB151介导的同源重组方法,制备 glmY 缺陷株;用96孔微量板结晶紫染色法检测各菌株生物膜形成情况;通过qRT PCR分析glmY 缺陷株及野生株中生物膜形成相关基因的mRNA表达水平。结果： 成功制备glmY缺陷株;细菌生物膜形成实验表明,与野生株相比,glmY缺陷株生物膜形成能力明显下降;qRT PCR分析结果显示,GlmY缺失后卷曲菌毛合成相关基因csgD和csgA的mRNA表达水平明显下调。结论： 伤寒沙门菌非编码 RNA GlmY可通过上调csgD和csgA的表达促进卷曲菌毛合成,进而促进生物膜的形成。     

综合评估慢性阻塞性肺疾病稳定期中医证型与疾病程度及预后的相关性

目的:运用综合评估法分析慢性阻塞性肺疾病稳定期中医证型与病情程度及预后的相关性。方法:将符合纳入标准的200例患者分为肺气虚、肺脾气虚、肺肾气虚及肺肾气阴两虚四组,观察1年前后患者肺功能、mMRC分级、CAT评分,并进行数据整理及统计分析。结果:肺肾气虚证、肺肾气阴两虚证患者较肺气虚证、肺脾气虚证患者肺功能分级重且FEV1下降更明显、出现呼吸困难症状重且程度进展快、对生活质量影响较大且影响增加更显著,但肺气虚证与肺脾气虚证、肺肾气虚证与肺肾气阴两虚证之间无明显差异。结论:慢性阻塞性肺疾病稳定期中医证型与疾病程度及预后存在相关性。