重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp63,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3．1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEg-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒坶hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞053基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEg-hp63构建正确。与0Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0．5-5Gy照射后,p53mRNA水平增高;A549．hp53在2-5Gy后,p53蛋白表达显著增高（P〈0．01）,SKOV-3-hp63其蛋白表达随剂量（0．5-5Gy）增加而明显增加（P〈0．05-P〈0．01）。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0．5Gy照射后明显下降（P〈0．05）,2-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）;SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0Gy时增高,0.5-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。     

携带Egr-1启动子和Endostatin基因的腺病毒穿梭质粒构建及鉴定

目的构建含辐射敏感启动子Egr-1和人内皮抑素（endostatin）基因的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-Endo-statin。方法利用RT-PCR方法从人胎肝中扩增出人endostatin cDNA序列，从T-Egr1质粒中扩增出Egr-1基因序列，并将它们连接到pMD19T质粒进行测序，利用基因重组技术构建含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egrl-Endostafin。结果经测序证实，获得的人endostatin基因和Egr-1基因与GenBank公布的完全一致，表明克隆人帆．dostatin基因和Egr-1启动子成功，并经鉴定证实含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-Endostatin构建正确。结论本实验成功克隆了人endostatin基因和Egr-1启动子并构建了含辐射敏感启动子的腺病毒穿梭质粒pshtntle-Egr1-Endostatin。     

黄蘑多糖对小鼠骨髓细胞染色体的辐射防护作用

黄蘑是真菌的一种，主要产于长白山地区。它不仅味道鲜美、营养丰富，还具有疏风活络、强筋健骨之功效。据报道从黄蘑中提取的有效成分黄蘑多糖[polysaccharides of mushroom(Huangmo),PM]对小鼠体内接种的人肿瘤细胞有较强的抑制作用。但迄今为止，对PM辐射防护作用的研究国内外报道尚少。本研究用PM作为辐射防护剂对不同剂量X射线照射的小鼠所诱发的骨髓细胞染色体畸变进行了观察，并就其对辐射损伤体细胞的保护作用进行了初步的探讨。