野生型p53基因导入诱导神经细胞凋亡

目的　观察野生型 p5 3基因诱导神经细胞凋亡的现象 ,探讨外源性 p5 3基因对神经细胞 p2 1、c-fos和 c-jun基因表达的影响。方法　构建了野生型 p5 3基因的重组线病毒载体 ,体外转染胚胎大鼠神经细胞 ,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的切口末端标记技术原位检测细胞凋亡 ,以免疫组化法测定 P2 1 、c-Fos和 c-Jun蛋白表达水平。结果　外源性基因导入神经细胞后 ,P2 1、c-Fos和 c-Jun蛋白水平显著增高 ,d UTP切口末端标记阳性细胞百分率约为 4 0 %。结论　野生型 p5 3基因可诱导神经细胞凋亡和促进 p2 1、c-fos和 c-jun基因表达     

抗Ⅰ型幽门螺杆菌IgY和黄连及太子参联合抗活性空泡细胞毒素A^＋和细胞毒素相关蛋白A^＋幽门螺杆菌的实验

目的：观察抗Ⅰ型幽门螺杆菌IgY、黄连、太子参体内外抗活性空泡细胞毒素、细胞毒素相关蛋白A^＋幽门螺杆菌的效果及其联合应用效果，并筛选出最佳剂量组合。 方法：实验于2003-09／2004-03在江西医学院免疫学教研室完成。①中药药液制备：称取样品黄连60g（购自四川省峨眉），加5倍体积的水浸泡30min。称取样品太子参100g（购自安徽省宣州市），加入5倍体积的水浸泡30min后，两者皆用文火煎煮1h，过滤。滤渣各再加5倍体积的水，文火煎煮30min，过滤，合并2次滤液，加热浓缩至含生药1和1．6g／mL 2种原液。②体外实验方法：采用琼脂稀释法进行联合应用和各单一成分的体外抑菌实验。联合应用组的剂量设置采用L28 ^37 正交设计。体外联合应用实验剂量设定：IgY的1，2，3分别表示5，10，20s／L；黄连及太子参的1，2，3分别表示20，40，60g／L。③体内实验方法：选用昆明种小鼠100只，6-8周龄。联合应用组的剂量设置采用L18 3^7正交设计。体内联合应用实验剂量设定：IgY的1，2，3分别表示5，10，20mg；黄连的1，2，3分别表示15，30，60mg；太子参的1，2，3分别表示45，90，180mg。单一成分组及对照组采用中间剂量。④动物分组：各单一成分分组和联合应用组。除健康对照组外，所有小鼠经灌胃幽门螺杆菌液0．5mL／只（浓度1&;#215;10^17CFU／L），每间隔12h重复1次，共3次。建立昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型。取30只小鼠按随机区组法分为5组并编号（1-6号）：IgY组、太子参组、黄连组、枸橼酸铋钾组、生理盐水组。在造模后4周给药，前4组分别灌胃10，90，30，0．9mg相应药液0．5mL／只。生理盐水组和健康对照组（未造模，n=6）：灌胃0．5mL蒸馏水和无菌生理盐水。1次／d，重复5d。体内实验联合应用组（n=36）按L18 3^7正交设计表进行实验，重复1次。并观察小鼠胃黏膜的病理变化。⑤体外实验评分标准：共分为菌苔、尿素酶、H2O2试验、涂片4项，每项5分。分数越高，感染越严重。体外单一成分各组用综合评分确定最低抑菌浓度。⑥体内实验评分标准：共包括Warthin—Starry染色、苏木精-伊红染色、尿素酶试验三大项，每项15分，拭45分。分数高，感染越严重。⑦体内单一成分各组方差分析SNK法及联合应用组的体外体内实验均用正交设计的方差分析进行数据处理。 结果：①昆明系小鼠胃黏膜幽门螺杆菌感染模型：实验小鼠在感染4和8周后，胃黏膜涂片镜检、尿素酶试验及组织病理学Warthin—Starry染色检查均阳性，幽门螺杆菌感染率100％。②体外抑菌实验结果：联合应用组实验结果：黄连、太子参是综合评分的主要影响因素（P〈0．05），各成分之间无交互作用（P〉0．05），其最低抑菌浓度分别为40和60g／L。各单一成分组实验结果：黄琏、太子参均有明显抑菌效果，其最低抑菌浓度分别为50和80g/L。③体内实验结果：联合应用组实验结果：黄连、IgY对综合评分起主要作用（P〈0．05），太子参与黄莲，太子参与IgY之间均有协同作用（P〈0．05）。联合应用组中17号小鼠已经完全康复（综合评分为0），即3种成分均在中间用量时（IgY10mg，黄连30mg，太子参90mg），疗效最好。单一成分组实验结果：IgY、黄连、太子参、实验阳性对照对综合评分均有影响（P〈0．05）。IgY对幽门螺杆菌及炎症转归均有影响（P〈0．05）。 结论：①当IgY10mg、黄连30mg、太子参90mg联合应用时，黏膜损伤和炎症反应消失，幽门螺杆菌被根除。②IgY是一种较为理想的免疫治疗剂。③黄连用量为5或10mg／只小鼠时，在体外和体内都能抑制幽门螺杆菌。     

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的：观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化，以及丹参红花提取物的干预作用。 方法：实验于2005-11／2006—05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：①正常对照组。②无血清培养组：用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组：以含有800mg／L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组：用丹参红花提取物（商品名丹红滴注液，由陕西步长集团提供浓缩液，国药准字号Z 20026866／Z 20026867）预处理24h后加入800mg／L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响；应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平；用流式细胞仪分析细胞凋亡率；并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。 结果：①低密度脂蛋白处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍，1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1．4倍、1．6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0．4倍，0．5倍和0．2倍。④丹参红花提取物组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0．2倍、0．5倍和0．6倍。 结论：丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4 mRNA表达水平，从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡，对内皮细胞起到很好的保护作用。     

川畸病患儿父母的心理反应及护理对策

目的了解川畸病患儿父母心理健康状况,为患儿父母提供切实可行的护理对策。方法采用临床症状自评量表（SCL-90）对42例川畸病父母的心理状况进行调查,并与对照组进行比较。结果川畸病患儿父母SCL-90的躯体化、抑郁、焦虑、偏执和敌对性明显高于对照组。结论 川畸病患儿父母存在不健康的心理状态,护理人员应采取个性化护理措施,促进患儿疾病的恢复。     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡及其对p53、p21和Bcl-2表达的影响

为研究单核细胞源性泡沫细胞凋亡机制,以氧化型低密度脂蛋白诱导人髓系白血病细胞U937凋亡,观察p5 3、p2 1和Bcl- 2的表达。用流式细胞术和DNA断裂分析检测细胞凋亡;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测p5 3、p2 1和Bcl- 2蛋白表达,反转录聚合酶链反应显示p5 3、p2 1和Bcl- 2mRNA表达水平。结果表明氧化型低密度脂蛋白可致U937细胞凋亡,其作用具有浓度效应;氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡过程中,p5 3、p2 1mRNA和蛋白表达增加,Bcl- 2mRNA和蛋白表达减少。提示氧化型低密度脂蛋白可能通过上调p5 3、p2 1基因表达,下调Bcl- 2基因,导致U937细胞凋亡。     

上海市599名15岁以下儿童乙型肝炎感染危险因素的研究

目的 研究影响上海市15岁以下儿童感染乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)的危险因素,为提高儿童乙肝免疫预防效果提供依据.方法 以2006年全国乙肝血清流行病学调查上海现场的599名1～15岁儿童为研究对象,按是否感染HBV分为研究组和对照组,进行单因素分析并拟合多因素logistic回归模型,探讨影响儿童感染HBV的危险因素.结果 全部调查对象中感染HBV的儿童共有15例,感染率为2.50%.经综合考虑单因素分析和多因素分析,母亲怀孕时HBsAg状况、乙肝疫苗接种史、出生地点是影响儿童感染HBV的危险因素(P＜0.05),OR值分别为母亲HBsAg阳性者5.338,未接种乙肝疫苗者42.118,在家出生者12.239.结论 进一步降低上海市儿童HBV感染率,免疫预防的干预重点应为外来流动孕产妇和HBsAg阳性孕产妇,并应改进乡镇级医院新生儿乙肝免疫预防条件.     

大椎、关元对腰椎间盘突出症临床疗效的影响

目的:探讨大椎、关元对腰椎间盘突出症临床疗效的影响,以及任督脉在腰椎间盘突出症临床治疗上的指导意义。方法:将427例腰椎间盘突出症患者随机单盲分为常规(循经取穴)组、常规加大椎组和常规加关元组进行治疗观察,采用u检验评定比较各组间疗效。结果:加大椎组和加关元组的治愈率与常规组比较,差异有显著或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01),而有效率组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:大椎、关元可以提高腰椎间盘突出症的治愈率,调节任督、温补阳气可能是治疗腰椎间盘突出症的重要手段和方法之一。     

胚胎干细胞向心肌细胞的分化

目的：了解国内外在胚胎干细胞向心肌细胞分化的机理及其应用潜能等方面的研究现状。资料来源：应用计算机检索Medline，检索时间为1997／2005，检索词限定为“embryonic stem cell，cardiomyocyte／cardiac myocyte．differentiation”，并限定语言种类为英文。资料选择：对所检索到的文献进行初审，纳入标准：符合胚胎干细胞向心肌细胞分化的文章。排除标准：重复性研究。资料提炼：共查找文献200余篇，筛选出26篇。资料综合：收集到多篇关于胚胎干细胞分化为心肌细胞的文章，从最初获得胚胎干细胞源性心肌细胞的实验方法的建立到在单细胞水平对胚胎干细胞源性心肌细胞进行电生理研究。进一步，很多研究者从转录因子的角度研究了控制心脏发育的转录因子在胚胎干细胞向心肌细胞分化过程中的表达，研究表明心脏转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5控制着心脏基因的表达，它们在心脏发生过程中发挥重要的转录调控作用。研究同时发现，钙调神经磷酸酶信号通路、MAPK信号通路以及其他信号通路参与了心肌细胞分化的调节。此外，从胚胎干细胞纯化分化的心肌细胞用于治疗心肌梗死亦是一个关键问题。结论：当胚胎干细胞以胚小体的形式在没有白血病抑制因子的条件下培养时，一些干细胞可以分化成心肌细胞。干细胞来源的心肌细胞表达一些收缩蛋白，如MHC和肌球蛋白轻链-2V。转录因子GATA4、肌细胞增强因子2C和NKx2．5在心肌细胞分化中发挥重要作用，并且可以触发特异基因如α-肌动蛋白、MHC和肌球蛋白轻链-2V的表达，然而，胚胎细胞向心肌细胞分化的分子机制还有待进一步研究，鉴别出促进心脏分化的因子是研究心脏分化的基础所在。     

分选高纯度肾小球内皮细胞基础上应用小干扰RNA技术分析5-脂氧合酶激活蛋白的作用

目的:采用多个内皮细胞特异性表达或吸收的蛋白分选高纯度的肾小球内皮细胞,观察5-脂氧合酶激活蛋白在细胞因子诱导的肾小球内皮细胞蛋白通透性中的可能作用.方法:实验于2005-12/2007-03在卫生部北京老年医学研究所完成.①实验材料:雌性Wistar大鼠2只,100～120 g.②实验过程:用胶原酶消化大鼠肾小球细胞,先后用抗CD31和抗acetylated-LDL抗体标记细胞,通过流式细胞仪纯化肾小球内皮细胞,用抗CD54、CD106和CD62E鉴定分离的细胞.③评估:通过小干扰RNA技术抑制肾小球血管内皮细胞表达5-脂氧合酶;用干扰素-γ刺激细胞,通过免疫印迹杂交和免疫荧光组织化学检测5-脂氧合酶蛋白的表达;用FITC标记的BSA作为指示剂来测量体外培养的肾小球血管内皮细胞的蛋白通透性.结果:①分选高纯度肾小球内皮细胞:CD31磁珠分选得到83.3% CD31阳性细胞,其中12.5%为同时CD31 和高吸收acetylated-LDL.分离该双阳性细胞后得到纯度大于99.2%的肾小球内皮细胞.流式细胞仪检测显示这些细胞的CD54、CD106和CD6也均为阳性.在相差显微镜下观察,细胞形态呈鹅卵石状.②细胞膜上5-脂氧合酶定位:用干扰素-γ处理细胞后,5-脂氧合酶蛋白表达水平升高并呈时间和剂量依赖性.③细胞转染5-脂氧合酶小干扰RNA后结果:用干扰素-γ处理,干扰素-γ不能诱导5-脂氧合酶的高表达;用干扰素-γ处理细胞后转染5-脂氧合酶小干扰RNA,干扰素-γ诱导5-脂氧合酶蛋白表达水平被明显抑制.④在5-脂氧合酶小干扰RNA转染细胞中干扰素-γ处理和未处理细胞白蛋白的通透率:分别为(0.37±0.09)% 和(0.31±0.06)%,差异没有显著性(P＞0.05).结论:干扰素-γ能够诱导肾小球内皮细胞表达5-脂氧合酶蛋白并导致细胞通透性增高.5-脂氧合酶蛋白介导了干扰素-γ诱导细胞通透性增高的过程.     

单纯性肥胖青少年血清脂蛋白亚组分水平分析

目的探讨青少年单纯性肥胖与血清脂蛋白及其亚组分水平的关系。方法采用超速离心-高效液相色谱法测定60例肥胖青少年和19例体重指数正常者血清脂蛋白及其亚型水平。使用双能量X线吸收仪检测所有受试者全身及躯干部体脂比率。结果与正常对照组相比,肥胖组血清TC(4.47±0.90)比(3.79±0.50)mmol/L、TG(1.02±0.41)比(0.72±0.34)mmol/L、LDL-C(2.56±0.81)比(1.95±0.35)mmol/L、LDLa-C(2.39±0.83)比(1.74±0.37)mmol/L平均水平显著增高,而HDL-C(1.18±0.23)比(1.35±0.16)mmol/L、HDL2-C(0.73±0.21)比(0.91±0.16)mmol/L平均水平明显降低(P<0.01)。BMI、腰围、全身体脂及躯干体脂比率分别与TC、TG、LDL-C、LDLa-C水平呈显著正相关,与HDL-C、HDL2-C水平呈显著负相关(P<0.05,P<0.01)。结论单纯性肥胖青少年存在与肥胖相关的早期脂质代谢紊乱的趋势。