排序方式: 共有51条查询结果,搜索用时 15 毫秒
31.
32.
33.
目的 探讨从DNA水平制备重组α-病毒的新途径,寻找更简便的制备重组α-病毒疫苗的新方法。方法 将表达β-半乳糖苷酶的载体和包装载体用磷酸钙法共转染BHK包装细胞,收集并纯化上清中的病毒。再用该病毒在体外感染BHK细胞,鉴定所制备病毒滴度和目的基因的表达情况。结果 用本方法制备出了较高效价的重组病毒,并能在哺乳细胞中很好地表达。结论 从DNA水平可以制备出较高滴度的重组α-病毒,这种方法可以扩展用于基因治疗和疫苗的制备。 相似文献
34.
35.
SARS-CoV S1蛋白基因克隆及其在Vero E6细胞中的表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:克隆表达SARS-CoV S1蛋白,构建SARS基因疫苗。方法:从SARS病毒的cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoV S1蛋白的编码序列,将该序列克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。采用脂质体法转染Vero E6细胞,用Western blot检测S1蛋白的表达。结果:PCR方法扩增出2000bp左右的基因片段,插入pVAXl构建重组表达载体后,经序列测定证实扩增的片段为SARS-CoV Tor2株S1蛋白编码序列。将重组子转染Vero E6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoV S1蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。 相似文献
36.
目的通过对肿瘤基因SSX家族不同成员进行CTL表位预测,并对其与MHC-Ⅰ亲和力进行分析,为探索基于SSX肿瘤基因家族的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序结合量化基序方案开发的HLA-A2.1限制性CTL表位预测软件,对SSX基因家族不同成员进行CTL表位预测,然后合成SSX相关待测表位肽P1(AMTKLGFKA)、P4(AMT-KLGFNV)、P5(AMTKLGFKV)和P6(VMTKLGFKV),再对这些合成肽与MHC-Ⅰ结合亲和力及其结合物稳定性进行实验分析。结果与实验阳性肽(HBcAg,18~27)相比,除P1外,P4、P5、P6均显示较高的结合亲和力;而结合稳定性实验(DC50)结果显示,P1、P4与阳性对照肽(HBcAg,18~27)DC50均大于8 h,而P5和P6的DC50介于2~4 h之间。结论计算机软件预测的CTL表位肽,经过体外亲和力与结合稳定性实验筛选到2条理想的表位肽,为该表位的下一步体内鉴定奠定基础。 相似文献
37.
目的 克隆人DcR3分子的cDNA,将其重组入真核表达载体,并表达于COS-7细胞.方法 以PCR方法克隆编码人DcR3分子的cDNA,对其序列进行测定.将测序正确的DcR3 cDNA克隆入真核表达载体pAAV-IRES-hrGFP,构建重组表达载体.采用脂质体法转染COS-7细胞,用Western blot检测和激光共聚焦检测重组DcR3分子在COS-7细胞中的表达.结果 PCR方法扩增出一1 000 bp左右的基因片段,插入pAAV-IRES-hrGFP构建重组表达载体后,经序列测定证实扩增的片段为人DcR3分子cDNA.将重组子转染COS-7细胞,Western blotting和激光共聚焦检测到DcR3分子的表达.结论 成功地克隆并在COS-7细胞中表达了DcR3分子. 相似文献
38.
GPI锚固型CD46/CD55嵌合分子的设计及构建 总被引:3,自引:3,他引:3
目的:选取调控补体活化中心环节C3转化酶的两种膜调节蛋白CD46和CD5,设计构了新型的GPI锚固型CD46/CD55嵌合分子,方法:以CD46cDNA和CD55cDNA为模板,通过PCR及PCR重叠延伸技术(SOE)得到CD46/CD55嵌合cDNA。为避免双分子连接后的空间结构和功能变化,在CD46和CD55之间引入了多肽氨基酸接头(Linker),然后克隆构建GPI锚固型CD46/CD55-Bluescripy M13克隆载体,结果:获得了阅读框完整,连接部位正确的GPI锚固型CD46/CD55嵌合分子cDNA,结论:本为研制开发新一代的多功能,多靶点的补体抑制剂奠定了基础。 相似文献
39.
目的制备用于靶向DC-SIGN受体的Le(x)寡糖介导的靶向抗原.方法利用Sulfo-SMCC异源双功能交联试剂交联链霉亲和素(streptavidin,SA)和模式抗原卵白蛋白(ovalbumin,OVA),再利用SA与生物素高亲和力结合的特性,将SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖反应,由此获得由Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结果应用SDS-PAGE蛋白质电泳和Western免疫印迹方法证实SA与OVA蛋白成功交联,ELISA方法证实SA-OVA复合物中的SA仍具有与生物素反应的功能,根据SA-OVA复合物与生物素修饰的Le(x)寡糖饱和反应的比例,获得所需要的靶向抗原Le(x)-OVA复合物.结论获得Le(x)寡糖介导的靶向抗原Le(x)-OVA复合物,为进一步研究经由DC-SIGN靶向后的抗原特异性免疫应答奠定了基础. 相似文献
40.
目的:制备能抑制补体活化的2个关键环节(C3/C5转化酶和MAC的形成)的一种新型、高效补体抑制剂。方法:先设计引物,然后通过PCR技术扩增重组可溶性CD46/CD55/CD59嵌合分子cDNA片段,重组于pSecTagA真核表达载体上,分别利用COS-7细胞和中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞进行表达,并用抗人CD46多克隆抗体及抗人CD55、CD59单克隆抗体对表达产物进行western bolting鉴定。结果:DNA测序证实,前端带有小鼠IgGκ链前导序列,后端融合有编码6个组氨酸碱基的CD46/CD55/CD59嵌合分子cDNA片段的阅读框完整。免疫印迹结果显示,表达的重组蛋白分别能与抗人CD46多克隆抗体和抗人CD55、CD59单克隆抗体结合。结论:成功构建并在真核细胞内表达了重组可溶性CD46/CD55/CD59嵌合分子,为进一步研制和开发新一代多功能、多靶点补体抑制剂奠定了基础。 相似文献